本發(fā)明涉及青蒿琥酯衍生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是常見的且嚴(yán)重威脅人類生命和生活質(zhì)量的主要疾病之一，2000年全球新發(fā)癌癥病例約為1000萬，死亡620萬，現(xiàn)患病例2240萬。20世紀(jì)后期近30年以來癌癥病發(fā)率一直呈上升趨勢，按目前趨勢世界衛(wèi)生組織(WHO)預(yù)測，至2020年隨著全球人口達(dá)80億，將有2000萬新發(fā)癌癥病例，其中死亡人數(shù)將達(dá)到1200萬，癌癥將成為新世紀(jì)人類的第一殺手。統(tǒng)計表明，我國常見影響人類生命健康的惡性腫瘤有：肺癌、胃癌、食管癌、腸癌、肝癌、宮頸癌、乳腺癌、白血病、惡性淋巴瘤、鼻咽癌等十大腫瘤。化療、放療、手術(shù)治療是當(dāng)今治療腫瘤的主要手段，但毒副作用較大。能否找到既能殺傷腫瘤細(xì)胞，毒副作用又比較小的藥物及治療方法在腫瘤治療中顯得尤其重要。
青蒿素(Artemisinin)是我國研究人員從菊科植物黃花蒿葉中提取分離得到的一種含有過氧橋結(jié)構(gòu)的倍半萜內(nèi)酯類化合物。此后陸續(xù)開發(fā)出青蒿琥酯(Artesunate)、雙氫青蒿素(Dihydroartemisinin)、蒿甲醚(Artemether)等多種青蒿素衍生物。這類藥物具有顯著的抗瘧疾、抗血吸蟲、抗弓形蟲等藥理作用。
近年研究表明青蒿素類化合物可以抑制多種實體瘤生長，對多種腫瘤細(xì)胞有明顯的細(xì)胞毒性，且對正常組織細(xì)胞的毒性很低；在體外對包括白血病、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝癌、胰腺癌、肺癌等在內(nèi)的多種腫瘤細(xì)胞都具有一定的抑制或殺傷作用。但是，青蒿素類化合物，如青蒿琥酯對腫瘤的抑制作用并不如人意。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的在于提供一種聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，所述聚乙二醇青蒿琥酯可以較好的抑制人體多種癌細(xì)胞的增殖，且對正常細(xì)胞的增殖不會造成影響。
本發(fā)明提供了式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用：
式(I)中，POLY為聚乙二醇?xì)埢瑪?shù)均分子量為200～100000Da；
X選自-NH-、-O-或甲氧基；
Y選自含有雙氨基和單羧基的氨基酸殘基，所述氨基酸的羧基與X成酰胺鍵或酯鍵，向遠(yuǎn)端引出多氨基基團(tuán)與青蒿琥酯的羧基成酰胺；
m和n獨(dú)立地選自0、1或2；
r和s代表與Y通過酰胺鍵相連的青蒿琥酯的數(shù)量；并且：
當(dāng)m和n均不為0時，r和s分別為n和m的2倍數(shù)，并且青蒿琥酯通過羧基與Y引出的多氨基成酰胺；
當(dāng)m為0且n不為0或者m不為0且n為0時，r和s分別為n和m的2倍數(shù)，并且青蒿琥酯通過羧基與Y引出的多氨基成酰胺，m為0或n為0的一端的X為甲氧基；或
當(dāng)m和n同時為0時，r和s均為1，青蒿琥酯通過羧基與X成酯或酰胺。
在一個實施例中，所述聚乙二醇青蒿琥酯具有式(I-a)、(I-b)或(I-c)結(jié)構(gòu)：
式(I-a)中，X為-NH-；
式(I-c)中，X為-NH-；
式(I-a)、(I-b)或(I-c)中，POLY的數(shù)均分子量為10000～30000Da。在一個實施例中，所述聚乙二醇青蒿琥酯具有式1、2、3或4結(jié)構(gòu)：
式1、2、3或4結(jié)構(gòu)中，PEG20k代表數(shù)均分子量20000的PEG。
在一個實施例中，所述腫瘤選自肝癌、結(jié)腸癌、肺腺癌、前列腺癌、胃癌、喉癌、宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、慢性粒細(xì)胞白血病或早幼粒細(xì)胞白血病。
聚乙二醇青蒿琥酯為青蒿琥酯的聚乙二醇衍生物，是將青蒿琥酯和含有游離氨基的多價聚乙二醇修飾劑置于惰性溶劑中，在偶聯(lián)劑和有機(jī)堿催化作用下，青蒿琥酯的羧基和多價聚乙二醇修飾劑的氨基或羥基進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)而得到。本發(fā)明對所述據(jù)聚乙二醇青蒿琥酯的來源沒有特殊限制，可以按照中國專利CN103450468B公開的方法制備。
與其他青蒿素類衍生物相比，式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯聚乙二醇青蒿琥酯具有更好的水溶性和更長的半衰期。發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)，其對肝癌、結(jié)腸癌、肺腺癌、前列腺癌、胃癌、喉癌、宮頸癌、非小細(xì)胞肺癌、乳腺癌、慢性粒細(xì)胞白血病、早幼粒細(xì)胞白血病等都具有一定的抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡作用；對小鼠移植性肉瘤、肝癌等腫瘤細(xì)胞也具有顯著的抑制作用。
本發(fā)明首先通過MTT法測試式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯對11株體外培養(yǎng)的人體腫瘤細(xì)胞及1株人體正常細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，發(fā)現(xiàn)聚乙二醇青蒿琥酯對人肝癌細(xì)胞株(HepG-2)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT-29)、人肺腺癌細(xì)胞株(SPC-A-1)、人前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)、人胃癌細(xì)胞株(MKN-28)、人喉癌細(xì)胞株(Hep2)、人宮頸癌細(xì)胞株(Hela)、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549)、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(K562)、人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(HL-60)的增殖有較好的抑制效果，而且對人體正常細(xì)胞人胚肝細(xì)胞L-02的毒性較低。
本發(fā)明將式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯經(jīng)腹腔注射給藥10天，與陰性對照組相比，明顯抑制小鼠移植性肉瘤S180生長、H22小鼠肝癌腫瘤細(xì)胞的生長，量效關(guān)系明顯。
式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯可被制成藥學(xué)上可接受的劑型。
本發(fā)明通過體外腫瘤細(xì)胞毒性試驗和動物移植瘤試驗發(fā)現(xiàn)：式(I)所示的聚乙二醇青蒿琥酯可以較好的抑制人體多種癌細(xì)胞的增殖，且對正常細(xì)胞的增殖不會造成影響，因此，作為制備抗腫瘤藥物應(yīng)用具有較好的前景。
具體實施方式
為了進(jìn)一步說明本發(fā)明，下面結(jié)合實施例對本發(fā)明提供的聚乙二醇青蒿琥酯在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)地描述，但不能將它們理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
實施例1聚乙二醇青蒿琥酯對不同腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用
1.試驗材料
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，昆藥集團(tuán)藥物研究院根據(jù)中國專利CN103450468B實施例1、實施例3、實施例2和實施4公開的方法自制；青蒿琥酯，重慶華方武陵山制藥有限公司；注射用鹽酸多柔比星(ADR)，浙江海正藥業(yè)股份有限公司；人肝癌細(xì)胞株(HepG-2)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT-29)、人肺腺癌細(xì)胞株(SPC-A-1)、人前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)、人胃癌細(xì)胞株(MKN-28)、人喉癌細(xì)胞株(Hep2)、人宮頸癌細(xì)胞株(Hela)、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549)、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(K562)、人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(HL-60)，均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫。XB-K-25細(xì)胞計數(shù)板，江蘇省海門縣玻璃儀器制造廠；ZSBB-724恒溫水浴鍋，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；synergy 2多功能酶標(biāo)儀，BioTek公司；HERA cell 150 C02培養(yǎng)箱，Thermo；RJ-TDL-508細(xì)胞離心機(jī)，無錫瑞江離心機(jī)廠；96孔板，Corning康寧。
2.試驗方法
2.1受試樣品的配制
分別取聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ用生理鹽水溶解配置成100mM的母液，青蒿琥酯采用二甲基亞砜(DMSO)溶解配置成100mM的母液，使用時分別加入一定量的RPMI 1640完全培養(yǎng)液分別配制成5、10、50、250、500μM5個受試濃度，各低濃度溶液按比例由高濃度稀釋配制而成。
2.2陽性對照的配制
注射用鹽酸多柔比星(ADR)用生理鹽水溶解配置成1mg/ml的母液。取ADR母液加入一定量的RPMI 1640完全培養(yǎng)液配制成0.125、0.25、0.5、1μM4個受試濃度，各低濃度溶液按比例由高濃度稀釋配制而成。
2.3細(xì)胞培養(yǎng)
所有細(xì)胞的培養(yǎng)條件如下：在二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37℃、飽和濕度、CO2含量5％)，生長于含10％胎牛血清和100U/mL抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液中。每3到4天細(xì)胞傳代一次。
2.4檢測方法(MTT法)
取對數(shù)生長期的人肝癌細(xì)胞株(HepG-2)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT-29)、人肺腺癌細(xì)胞株(SPC-A-1)、人前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)、人胃癌細(xì)胞株(MKN-28)、人喉癌細(xì)胞株(Hep2)、人宮頸癌細(xì)胞株(Hela)、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549)、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(K562)和人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(HL-60)，用完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔100μL。于二氧化碳培養(yǎng)箱中貼壁細(xì)胞培養(yǎng)24小時，棄去原有培養(yǎng)液，按每3個孔為一個檢測濃度加入含有待測試藥物的培養(yǎng)液100μL，繼續(xù)培養(yǎng)72小時，每孔加5mg/mL的MTT溶液20μL，置培養(yǎng)箱內(nèi)4h后。實驗中另設(shè)培養(yǎng)液空白對照及未加藥處理的細(xì)胞對照。室溫低速震蕩后在酶標(biāo)儀測定各孔在570nm波長處的吸光度(OD)值。計算各孔(OD)值的平均數(shù)，并計算藥物對腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)。
2.5結(jié)果計算和統(tǒng)計學(xué)分析
按下列公式計算細(xì)胞增殖抑制率：
細(xì)胞存活率(％)＝(實驗孔OD-培養(yǎng)空白組OD)/(細(xì)胞對照組OD-培養(yǎng)液空白組OD)×100％
藥物對細(xì)胞生長的半數(shù)抑制濃度IC50即細(xì)胞存活率為50％時的藥物濃度。
采用Microsoft Excel 2007計算抑制率，采用LOGIT法，計算半數(shù)抑制濃度IC50，以此作為抑制能力的判斷指標(biāo)。
3.結(jié)果與結(jié)論
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯對上述腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)結(jié)果見表1。
表1聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯對不同腫瘤細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度(IC50)
由表1的結(jié)果可見，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯作用72h后，對人肝癌細(xì)胞株(HepG-2)、人結(jié)腸癌細(xì)胞株(HT-29)、人肺腺癌細(xì)胞株(SPC-A-1)、人前列腺癌細(xì)胞株(PC-3)、人胃癌細(xì)胞株(MKN-28)、人喉癌細(xì)胞株(Hep2)、人宮頸癌細(xì)胞株(Hela)、人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株(A549)、人乳腺癌細(xì)胞株(MCF-7)、人慢性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(K562)、人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株(HL-60)都有明顯的抑制增殖作用，但聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的抑制增殖作用比青蒿琥酯的抑制增殖作用強(qiáng)，其差異具有顯著性。
實施例2聚乙二醇青蒿琥酯對正常細(xì)胞人胚肝細(xì)胞(L-02)的體外毒性試驗
1.試驗材料
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，昆藥集團(tuán)藥物研究院根據(jù)中國專利CN103450468B實施例1、實施例3、實施例2和實施4公開的方法自制；青蒿琥酯，重慶華方武陵山制藥有限公司；人胚肝細(xì)胞L-02，中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫；XB-K-25細(xì)胞計數(shù)板，江蘇省海門縣玻璃儀器制造廠；ZSBB-724恒溫水浴鍋，上海醫(yī)用恒溫設(shè)備廠；synergy 2多功能酶標(biāo)儀，BioTek公司；HERA cell 150 C02培養(yǎng)箱，Thermo；RJ-TDL-508細(xì)胞離心機(jī)，無錫瑞江離心機(jī)廠；96孔板，Corning康寧。
2.試驗方法
2.1受試樣品的配制
分別取聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ用生理鹽水溶解配置成100mM的母液，青蒿琥酯采用二甲基亞砜(DMSO)溶解配置成100mM的母液，使用時分別加入一定量的RPMI 1640完全培養(yǎng)液分別配制成10、20、40、80、160、320μM6個受試濃度，各低濃度溶液按比例由高濃度稀釋配制而成。
2.2細(xì)胞培養(yǎng)
人胚肝細(xì)胞L-02的培養(yǎng)條件如下：在二氧化碳細(xì)胞培養(yǎng)箱中(37℃、飽和濕度、CO2含量5％)，生長于含10％胎牛血清和100U/mL抗生素的RPMI-1640培養(yǎng)液中。每3到4天細(xì)胞傳代一次。
2.3檢測方法(MTT法)
取人胚肝細(xì)胞L-02，用完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個/mL的單細(xì)胞懸液，接種于96孔板，每孔100μL。于二氧化碳培養(yǎng)箱中貼壁細(xì)胞培養(yǎng)24小時，棄去原有培養(yǎng)液，按每3個孔為一個檢測濃度加入含有待測試藥物的培養(yǎng)液100μL，繼續(xù)培養(yǎng)48小時，每孔加5mg/mL的MTT溶液20μL，置培養(yǎng)箱內(nèi)4h后。實驗中另設(shè)未加藥處理的陰性細(xì)胞對照。室溫低速震蕩后在酶標(biāo)儀測定各孔在570nm波長處的吸光度(OD)值。計算各孔(OD)值的平均數(shù)，并計算藥物對腫瘤細(xì)胞的存活率。
2.4結(jié)果計算
按下列公式計算細(xì)胞存活率：
細(xì)胞存活率(％)＝實驗組OD值/陰性對照組OD值×100％
3.結(jié)果與結(jié)論
正常細(xì)胞人胚肝細(xì)胞L-02在聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯中的存活率試驗結(jié)果見表2。
表2L-02細(xì)胞在不同聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯濃度中的存活率
表2結(jié)果顯示，正常細(xì)胞人胚肝細(xì)胞L-02對聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯遠(yuǎn)不如腫瘤細(xì)胞株對其敏感，其半數(shù)抑制濃度(IC50)＞320μM。說明藥物體外毒性很低。因此，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯對腫瘤細(xì)胞具有特異性的增殖抑制作用。
實施例3聚乙二醇青蒿琥酯對小鼠移植性肉瘤S180生長的影響
1.實驗材料
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，昆藥集團(tuán)藥物研究院根據(jù)中國專利CN103450468B實施例1、實施例3、實施例2和實施4公開的方法自制；青蒿琥酯，重慶華方武陵山制藥有限公司；S180細(xì)胞株，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫；昆明小鼠，18～22g，雌性各半，昆藥集團(tuán)實驗動物中心提供。
2.實驗方法
2.1藥物配制：聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯，分別用生理鹽水配制成0.5、1.0、1.5mg/ml低、中、高三個濃度，按0.2ml/10g給藥，給藥劑量分別為10、20、30mg/kg。
2.2取瘤種：無菌操作，將S180細(xì)胞株腹腔接種小鼠，于第10天用碘酒、75％乙醇局部消毒，無菌條件下抽取出腹水，用生理鹽水按體積比1∶3稀釋成瘤細(xì)胞懸液。
2.3接種瘤液：給每只小鼠右前肢腋皮下準(zhǔn)確接種瘤液0.2ml(細(xì)胞數(shù)約2×107)。
2.4分組給藥：接種24小時后，將小鼠隨機(jī)分為聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯低、中、高劑量組，陰性對照組，每組8只。聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ按0.2ml/10g體重腹腔注射給藥，陰性對照組腹腔注射生理鹽水，1天1次。各組均連續(xù)注射10天。至實驗結(jié)束，各組無小鼠死亡。
2.5稱瘤重：末次給藥后24小時，頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剝?nèi)×鰤K稱重，計算抑瘤率(％)。
抑瘤率＝(平均瘤重對照組－平均瘤重給藥組)/平均瘤重對照組×100％
2.6統(tǒng)計學(xué)方法：實驗數(shù)據(jù)均以表示，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
3.實驗結(jié)果
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯的抑瘤率試驗結(jié)果見表3。
表3聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯對小鼠肉瘤S180腫瘤生長的抑制作用
注：與陰性對照組比較，*P<0.05，**P<0.01。
表3結(jié)果表明，與陰性對照組相比，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯低劑量(10mg/kg)具有明顯的抑瘤作用，隨劑量增加而作用效果增強(qiáng)，與陰性對照組相比，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯經(jīng)腹腔注射給藥10天，給藥組小鼠腫瘤與陰性對照組相比瘤體減小、瘤重減輕。在同等劑量下，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ抑瘤作用明顯較青蒿琥酯強(qiáng)。
實施例4聚乙二醇青蒿琥酯對H22小鼠肝癌的體內(nèi)抑瘤作用
1.實驗材料
聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ，昆藥集團(tuán)藥物研究院根據(jù)中國專利CN103450468B實施例1、實施例3、實施例2和實施4公開的方法自制；青蒿琥酯，重慶華方武陵山制藥有限公司；注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司；H22小鼠肝癌細(xì)胞株，購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫；昆明小鼠，18～22g，雌性各半，昆藥集團(tuán)實驗動物中心提供。
2.實驗方法
2.1藥物配制：聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯，分別用生理鹽水配制成1.5、3.0、6.0mg/ml低、中、高三個濃度，按0.2ml/10g給藥，給藥劑量分別為30、60、120mg/kg；注射用環(huán)磷酰胺(CTX)，用生理鹽水配制成2mg/ml，按0.1ml/10g給藥，給藥劑量為20mg/kg。
2.2取瘤種：無菌操作，將H22小鼠肝癌細(xì)胞株腹腔接種小鼠，于第10天選擇腹水飽滿小鼠，用碘酒、75％乙醇局部消毒，無菌條件下抽取出腹水，用生理鹽水按體積比1∶3稀釋成瘤細(xì)胞懸液。
2.3接種瘤液：給每只小鼠右前肢腋皮下準(zhǔn)確接種瘤液0.2ml(細(xì)胞數(shù)約2×107)。
2.4分組給藥：接種24小時后，將小鼠隨機(jī)分為聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯低、中、高劑量組，CTX組和模型對照組，每組8只。聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯分別按0.2ml/10g體重腹腔注射給藥，CTX按0.1ml/10g體重腹腔注射給藥，模型對照組腹腔注射生理鹽水，1天1次。各組均連續(xù)注射10天。至實驗結(jié)束，各組無小鼠死亡。
2.5稱瘤重：末次給藥后24小時，頸椎脫臼處死小鼠，稱體重，剝?nèi)×鰤K和脾臟，稱重，計算抑瘤率(％)。
抑瘤率(％)＝(模型對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/模型對照組平均瘤重×100％。
2.6統(tǒng)計學(xué)方法：實驗數(shù)據(jù)均以表示，應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計軟件，用t檢驗進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理。
3.實驗結(jié)果
CTX組的抑瘤率為62.9％，對H22小鼠肝癌具有非常明顯的體內(nèi)抑制作用(P<0.01)。聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和青蒿琥酯中高劑量組與模型對照組比較，統(tǒng)計學(xué)意義顯著(P<0.01)。同等劑量下，聚乙二醇青蒿琥酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ對H22小鼠肝癌的抑制作用較青蒿琥酯強(qiáng)，統(tǒng)計學(xué)意義顯著(P<0.01)。荷瘤小鼠脾質(zhì)量隨聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯劑量增加而增加，試驗結(jié)果見表4。
表4聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯對H22荷瘤小鼠體質(zhì)量及瘤體量的影響
注：與模型對照組比較，*P<0.05，**P<0.01
表4結(jié)果表明，聚乙二醇青蒿琥酯和青蒿琥酯低劑量(30mg/kg)具有明顯的抑瘤作用，隨劑量增加而作用效果增強(qiáng)，給藥劑量與抑瘤率呈正相關(guān)關(guān)系。聚乙二醇青蒿琥酯還能使荷瘤小鼠的脾質(zhì)量增加，且隨劑量增加而增加，可能是反映機(jī)體免疫水平的提高。
以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。