本發(fā)明涉及魚藤酮在制備藥物中的應(yīng)用，具體是魚藤酮在制備急慢性血管損傷疾病藥物中的一種新應(yīng)用，屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

隨著經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，國人的生活水平大幅度提高，隨之相對(duì)應(yīng)的是心血管疾病的發(fā)生率和死亡率大大增高，這不但嚴(yán)重影響了患者的壽命及生活質(zhì)量，也給患者家庭帶來極大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。有效防治心血管疾病已經(jīng)顯得尤為重要。血管損傷是心血管疾病的主要病理原因，而且血管損傷在臨床上十分常見，醫(yī)源性血管插管，造影檢查以及血管狹窄介入治療都可能造成血管損傷，血管損傷主要以動(dòng)脈損傷為主，損傷后機(jī)體會(huì)啟動(dòng)血管的修復(fù)。但是在血管損傷修復(fù)的過程中，血管平滑肌細(xì)胞會(huì)增殖遷移，導(dǎo)致血管新生內(nèi)膜增厚，造成血管狹窄，甚至閉塞。醫(yī)源性的血管損傷后血管狹窄是困擾醫(yī)生和病人的一個(gè)臨床難題。因此，尋求有效治療血管損傷后狹窄的方法不僅顯得非常重要緊迫。

魚藤酮，存在于豆科魚藤屬植物的種子、莖部和根部，不溶于水，溶于有機(jī)試劑。主要用作農(nóng)用殺蟲劑，也可防治人畜體外寄生蟲和生化研究。防治對(duì)象有：蚜蟲、飛虱、黃條跳甲、薊馬、黃守瓜、猿葉蟲、菜青蟲、斜紋夜蛾、甜菜夜蛾、小菜蛾等。在毒理學(xué)上是一種專屬性很強(qiáng)的物質(zhì)，對(duì)昆蟲尤其是菜粉蝶幼蟲、小菜蛾和蚜蟲具有強(qiáng)烈的觸殺和胃毒兩種作用。早期的研究表明魚藤酮主要是與NADH脫氫酶與輔酶Q之間的某一成分發(fā)生作用，使害蟲細(xì)胞的電子傳遞鏈?zhǔn)艿揭种疲瑥亩档蜕矬w內(nèi)的ATP水平最終使害蟲得不到能量供應(yīng)，然后行動(dòng)遲滯、麻痹而緩慢死亡。

目前，尚無關(guān)于魚藤酮用于治療血管損傷修復(fù)的任何報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供魚藤酮在制備急慢性血管損傷疾病藥物中的應(yīng)用，從而為該病患者提供一種新的藥物，是一種可以有效治療血管損傷過度修復(fù)的新方法。

實(shí)現(xiàn)上述目的的技術(shù)解決方案是：

魚藤酮在制備急慢性血管損傷疾病藥物中的應(yīng)用。

進(jìn)一步地，所述魚藤酮的劑量是低劑量。

更進(jìn)一步地，所述魚藤酮的劑量250ppm。

在細(xì)胞及組織器官的損傷過程中，會(huì)伴有線粒體功能和結(jié)構(gòu)的損傷，受損的線粒體會(huì)產(chǎn)生過多的氧自由基，進(jìn)而導(dǎo)致氧化損傷，甚至繼發(fā)性激活炎癥和細(xì)胞凋亡等。因此，適度的抑制線粒體功能，一方面可以減少能量的供應(yīng)，減輕血管損傷部位過度的增殖性修復(fù)，同時(shí)也可以減少超氧陰離子等損傷性產(chǎn)物的生成，進(jìn)而減輕血管損傷的形成和進(jìn)展。

本發(fā)明在C57BL/6小鼠股動(dòng)脈導(dǎo)絲損傷小鼠模型，應(yīng)用小劑量(250ppm)魚藤酮治療后，發(fā)現(xiàn)小鼠股動(dòng)脈內(nèi)膜損傷修復(fù)得到顯著改善；在體外實(shí)驗(yàn)，魚藤酮有效降低了平滑肌細(xì)胞的遷移，顯示通過小劑量魚藤酮適度限制線粒體活性，可以減少線粒體源性的細(xì)胞毒性物質(zhì)的釋放，進(jìn)而減輕細(xì)胞及組織器官的損傷。

本發(fā)明的技術(shù)效果：

1、本發(fā)明通過在金屬導(dǎo)絲引起的動(dòng)脈損傷小鼠模型，應(yīng)用小劑量魚藤酮治療后，發(fā)現(xiàn)血管壁重構(gòu)、管腔狹窄、血栓形成等均得到顯著改善，顯示魚藤酮是一種治療急慢性血管損傷的有效手段，從而為后期研發(fā)相關(guān)制備急慢性血管損傷疾病藥物提供可能。

2、通過低劑量魚藤酮(一般研究中，魚藤酮的劑量為500-600ppm，本研究使用的劑量為250ppm)干預(yù)，血管新生內(nèi)膜增厚被改善80％以上。

3、魚藤酮是一種線粒體活性抑制劑，該研究結(jié)果提示，通過適當(dāng)抑制線粒體活性，可以有效改善血管損傷過度修復(fù)造成的新生內(nèi)膜增厚，具有一定的臨床應(yīng)用前景。

4、魚藤酮,目前主要用作農(nóng)用殺蟲劑，對(duì)昆蟲有強(qiáng)烈的毒殺作用，高劑量的魚藤酮對(duì)于細(xì)胞以及生命個(gè)體具有毒副作用，因此我們選擇的是一個(gè)相對(duì)安全的低劑量(250ppm)。

附圖說明

圖1是HE染色下對(duì)照組(a)/魚藤酮治療組(b)小鼠股動(dòng)脈損傷修復(fù)后內(nèi)膜面積(鏡下圖)；

圖2：對(duì)照組/魚藤酮治療組小鼠股動(dòng)脈損傷修復(fù)后內(nèi)膜面積統(tǒng)計(jì)圖(柱狀圖)；

圖3：圖3a是沒有經(jīng)過任何處理的小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目，圖3b是血管緊張素II(AngII)處理過的小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目，圖3c是小鼠平滑肌細(xì)胞給予魚藤酮(0.2μM)處理2小時(shí)，后加入血管緊張素II(AngII)，小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目減少(鏡下圖)

圖4：圖3的結(jié)果進(jìn)行染色細(xì)胞統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)分析(柱狀圖)。

具體實(shí)施方式

以下將結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步詳細(xì)說明。

本發(fā)明以下實(shí)施例中使用的魚藤酮購置于Sigma；C57BL/6小鼠購自南京大學(xué)模式動(dòng)物中心購買的；小鼠平滑肌細(xì)胞購置廣州吉妮歐生物科技有限公司。

實(shí)施例1

魚藤酮可以降低小鼠股動(dòng)脈損傷修復(fù)后內(nèi)膜面積

選取10-12周齡的C57BL/6小鼠,術(shù)前使用水合氯醛麻醉，暴露右下肢；選取直徑為0.45mm的螺旋導(dǎo)絲，從股動(dòng)脈分支股深動(dòng)脈的部位進(jìn)導(dǎo)絲至股動(dòng)脈1-1.5cm處，放置1分鐘后取出導(dǎo)絲并結(jié)扎股深動(dòng)脈；手術(shù)后小鼠隨機(jī)分兩組：對(duì)照組和魚藤酮治療組，每組6只，魚藤酮治療組小鼠食物內(nèi)給與魚藤酮(250ppm)；術(shù)后4周后取股動(dòng)脈血管，石蠟包埋、切片，HE染色拍照后分析血管損傷后新生內(nèi)膜增厚程度；如圖1所示魚藤酮治療組小鼠的血管損傷后新生內(nèi)膜增厚面積小于對(duì)照組。統(tǒng)計(jì)6只小鼠新生內(nèi)膜增厚面積，使用graphpad軟件做出統(tǒng)計(jì)圖，如圖2所示，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。圖2結(jié)果顯示經(jīng)魚藤酮治療后的小鼠血管新生內(nèi)膜增厚被改善80％以上。

實(shí)施例2魚藤酮可以降低平滑肌細(xì)胞的遷移

在小鼠血管內(nèi)膜損傷后修復(fù)過程中，平滑肌增殖遷移起到非常重要的作用，所以我們檢測(cè)魚藤酮是否影響小鼠平滑肌細(xì)胞的遷移。具體實(shí)施為：小鼠平滑肌細(xì)胞接種到12孔板中，貼壁過夜后，給予魚藤酮(0.2μM)處理2小時(shí)，后加入0.1μM的血管緊張素II(AngII)，24小時(shí)后，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行消化重懸，計(jì)數(shù)細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為15000個(gè)細(xì)胞/200μl,取200μl細(xì)胞懸液加到遷移小室中，小室下方的培養(yǎng)孔中加入600μl完全培養(yǎng)基，24小時(shí)后，結(jié)晶紫染液染色，如圖3所示，魚藤酮可以降低平滑肌細(xì)胞的遷移；圖3a是沒有經(jīng)過任何處理的小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目，圖3b是血管緊張素II(AngII)處理過的小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目，AngII處理后小鼠平滑肌細(xì)胞遷移數(shù)目增加，圖3c是小鼠平滑肌細(xì)胞給予魚藤酮(0.2μM)處理2小時(shí)，后加入血管緊張素II(AngII)，小鼠平滑肌細(xì)胞遷移的數(shù)目減少。并對(duì)上述結(jié)果進(jìn)行染色細(xì)胞統(tǒng)計(jì)計(jì)數(shù)分析，結(jié)果如圖4所示，魚藤酮可以降低平滑肌細(xì)胞的遷移。