本發(fā)明屬于藥物組合物領(lǐng)域，具體涉及中藥藥物組合物領(lǐng)域，尤其涉及一種治療肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的藥食組合物及其制劑和制備應(yīng)用。

背景技術(shù)：

肝病患者普遍存在營(yíng)養(yǎng)不良，特別是肝硬化和肝癌等重癥患者營(yíng)養(yǎng)不良發(fā)生率極高。肝病患者存在的營(yíng)養(yǎng)不良問題，近年來受到業(yè)內(nèi)高度重視，對(duì)營(yíng)養(yǎng)不良的危害性和營(yíng)養(yǎng)干預(yù)的重要性高度重視。肝臟具有極其復(fù)雜的功能,是糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝的中心器官。以肝硬化為例，由于肝臟結(jié)構(gòu)發(fā)生異常，功能發(fā)生改變，與之相關(guān)的各條代謝途徑存在不同程度代謝障礙，肝硬化患者幾乎都存在不同程度的營(yíng)養(yǎng)不良。即使Child-Pugh分級(jí)為A級(jí)的患者，營(yíng)養(yǎng)不良率也高達(dá)25％。并且隨著Child-Pugh分級(jí)的增加，營(yíng)養(yǎng)不良的發(fā)生率亦隨之增加。肝硬化進(jìn)展與營(yíng)養(yǎng)不良的嚴(yán)重程度密切相關(guān)，對(duì)肝硬化患者的治療和預(yù)后也有著非常嚴(yán)重的影響。(注：Child-Pugh分級(jí)是目前國(guó)際上對(duì)肝病患者肝功能狀態(tài)優(yōu)劣的一種最通用的分級(jí)方法，分為A、B、C三級(jí)，A級(jí)肝功能狀態(tài)最好，C級(jí)則最差)

蛋白質(zhì)-能量營(yíng)養(yǎng)不良在肝硬化患者中最常見。肝臟受損時(shí)，主要影響白蛋白的合成、氨基酸代謝異常和尿素的合成變化。其中氨基酸的代謝異常表現(xiàn)尤為突出。氨基酸代謝異常是引起肝硬化并發(fā)癥的重要發(fā)病機(jī)制，如肝性腦病、低蛋白血癥、胰島素抵抗等。首先，氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位,其中血漿(清)氨基酸尤其是支鏈氨基酸濃度與白蛋白濃度密切相關(guān)，而白蛋白濃度與肝硬化腹水等并發(fā)癥的出現(xiàn)有很大關(guān)系。其次，氨基酸失衡(支鏈氨基酸和芳香族氨基酸比值的下降)是肝性腦病的重要發(fā)病機(jī)制之一。支鏈氨基酸主要包括亮氨酸、異亮氨酸及纈氨酸,是維持人體大腦正常功能的必需物質(zhì)。芳香族氨基酸主要包括苯丙氨酸、色氨酸及酪氨酸,能促進(jìn)假性神經(jīng)遞質(zhì)的合成而競(jìng)爭(zhēng)內(nèi)源性的多巴胺和去甲腎上腺素。因此,如何改善氨基酸代謝異常是減少肝硬化并發(fā)癥的關(guān)鍵。有研究表明：補(bǔ)充支鏈氨基酸可明顯促進(jìn)肝性腦病的恢復(fù)，并且可以對(duì)抗分解代謝，促進(jìn)血漿白蛋白合成，加速肝臟再生。如何通過適當(dāng)營(yíng)養(yǎng)素進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)改善肝硬化患者氨基酸失衡狀態(tài)從而治療肝硬化及其合并癥是臨床醫(yī)師及研究者關(guān)注的熱點(diǎn)問題。

肝病患者最常出現(xiàn)的癥狀有食欲不振、腹脹等，這些癥狀會(huì)導(dǎo)致病人攝食減少，營(yíng)養(yǎng)攝入不足，是導(dǎo)致患者營(yíng)養(yǎng)不良的常見病因。另外，患者口服多種藥物，往往會(huì)進(jìn)一步影響食欲和胃的攝入量。而住院病人還會(huì)由于大量輸液而增加腹脹感，頻繁抽血、放腹水等導(dǎo)致的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)丟失，以及為配合檢查和治療而頻繁的限制飲食，因?yàn)楹芏鄼z查需要空腹進(jìn)行。肝硬化的病人還會(huì)經(jīng)常被限制鈉鹽、葡萄糖、蛋白質(zhì)的攝入，以上多種因素都會(huì)導(dǎo)致肝病患者的營(yíng)養(yǎng)不良進(jìn)入惡性循環(huán)，即營(yíng)養(yǎng)不良造成肝病進(jìn)行性加重，反過來肝病又進(jìn)一步限制了飲食營(yíng)養(yǎng)的攝入和消化吸收。如何打破這一惡性循環(huán)是醫(yī)學(xué)上的難題。

目前臨床最常用的解決方案是腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)方案和腸外營(yíng)養(yǎng)方案。腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)也就是經(jīng)口補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素，目前臨床常用的口服營(yíng)養(yǎng)素有多種，但存在的問題主要是：①缺少針對(duì)肝病患者專用的口服營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，目前市售的僅有美國(guó)生產(chǎn)的“紐娃(Noveliver)”是專門針對(duì)肝病的營(yíng)養(yǎng)素，是目前全球唯一針對(duì)肝病患者的新型復(fù)合營(yíng)養(yǎng)及免疫調(diào)節(jié)素，含有豐富的氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)不良的肝硬化患者。其他非針對(duì)性營(yíng)養(yǎng)素則需要專業(yè)人員的調(diào)配才能服用。②目前所有的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑均為單純補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素，而沒有考慮患者的基礎(chǔ)肝病是導(dǎo)致患者營(yíng)養(yǎng)攝入及吸收障礙的根本因素。單純補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素往往由于患者肝功能不全，消化吸收功能差等原因而導(dǎo)致攝入或吸收障礙而作用不佳，達(dá)不到預(yù)期的目的。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明主要解決的技術(shù)問題是如何將補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素與改善肝功能和消化吸收功能同步進(jìn)行的問題。

針對(duì)肝病患者及其同時(shí)存在的營(yíng)養(yǎng)不良問題，現(xiàn)有技術(shù)存在很多不足：

西醫(yī)對(duì)肝病營(yíng)養(yǎng)不良的干預(yù)可以分為腸外營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充和腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充兩大方法。腸外營(yíng)養(yǎng)即指經(jīng)靜脈營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，常用的為白蛋白、葡萄糖、脂肪乳、氨基酸等，該方案的優(yōu)點(diǎn)是起效快，但缺點(diǎn)較多：①價(jià)格高昂，人血白蛋白在肝病患者最常用，但除了價(jià)格高昂之外，還常出現(xiàn)貨源緊張，另外因?yàn)槿搜椎鞍资茄褐破罚嬖谝欢ǔ潭鹊挠盟庯L(fēng)險(xiǎn)。②效果不持久，經(jīng)靜脈補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素常在短時(shí)間內(nèi)被代謝掉，而作用不持久。③靜脈輸注脂肪乳可增加感染風(fēng)險(xiǎn)，并有很強(qiáng)的血管刺激，因而臨床應(yīng)用受到很大的限制。

腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)是指經(jīng)口補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素，目前臨床有很多配方營(yíng)養(yǎng)素，較多用于外科術(shù)后患者。對(duì)于肝功能失代償?shù)幕颊撸Ｒ驉盒摹⒏姑浀纫蛩貙?dǎo)致患者不能很好接受腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)治療方案。腸內(nèi)營(yíng)養(yǎng)素不能解決食欲和腹脹的問題，是其明顯不足。

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，解決以上現(xiàn)有技術(shù)所帶來的問題，為合并營(yíng)養(yǎng)不良的肝病患者，特別是重癥肝病患者提供一種由藥食兩用中藥配方而成的，既能補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素又能保肝且促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收的制劑，以克服既往營(yíng)養(yǎng)方案不能同時(shí)解決補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素和促進(jìn)吸收同時(shí)進(jìn)行的缺陷。

本發(fā)明的發(fā)明人在長(zhǎng)期從事肝病臨床診療過程中，認(rèn)識(shí)到營(yíng)養(yǎng)不良是導(dǎo)致肝病患者預(yù)后不良的重要因素。結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，開發(fā)了一種養(yǎng)肝運(yùn)脾方，兼顧了營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充、保肝、增進(jìn)食欲、減輕腹脹等多個(gè)環(huán)節(jié)，臨床具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

具體而言，本發(fā)明提供了一種治療肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的藥食組合物及其制劑和制備應(yīng)用。

具體而言，本發(fā)明提供了一種用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的藥食組合物，其含有下述幾種組分：枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子。

優(yōu)選的，上述藥食組合物，按重量份計(jì)，包含枸杞6-12份，山藥15-30份，山楂9-15份，麥芽9-15份，和萊菔子1-10份。

優(yōu)選的，上述藥食組合物，按重量份計(jì)，包含枸杞10-12份，山藥20-28份，山楂12-15份，麥芽12-15份，和萊菔子5-10份。

優(yōu)選的，上述藥食組合物，按重量份計(jì)，包括枸杞15份、山藥15份、山楂15份、麥芽15份和萊菔子9份。

第二方面，本發(fā)明提供了一種用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的中藥制劑，所述中藥制劑包括以上任一項(xiàng)所述的藥食組合物作為活性成分和輔料。

優(yōu)選的，所述輔料包括乳清蛋白、維生素、蜂蜜、糊精、淀粉和/或蛋白粉中的至少一種。

優(yōu)選的，所述制劑的劑型包括湯劑、沖劑、片劑、口服液、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑或注射劑。

第三方面，本發(fā)明提供了一種用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的試劑盒，所述中藥制劑試劑盒含有中藥制劑試劑單元，每個(gè)試劑單元含有以上任一項(xiàng)所述的藥食組合物的有效用量為0.1g-3g。

優(yōu)選的，所述中藥制劑試劑盒含有1-5個(gè)試劑單元。

第四方面，本發(fā)明提供了一種用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的湯劑的制備方法，包括如下步驟：將以上任一項(xiàng)所述的藥物組合物中的各原料浸泡煎煮，分出水煎劑；向剩余藥材中加水煎煮過篩，分出水煎劑；合并水煎劑。

第五方面，本發(fā)明提供了以上任一項(xiàng)所述的藥食組合物或任一項(xiàng)所述的中藥制劑或者所述的試劑盒在制備治療肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的藥物領(lǐng)域或者在制備保肝護(hù)肝的保健品或食品領(lǐng)域中的應(yīng)用。本發(fā)明所取得的有益效果為：(1)價(jià)格低廉。紐娃含有極為豐富與平衡的氨基酸、維生素、微量元素，以及特殊的生物堿、黃酮、腺苷，是肝細(xì)胞白蛋白原料提供劑和蛋白合成激活劑，有益于促進(jìn)肝臟白蛋白自發(fā)合成，緩解肝硬化時(shí)的低蛋白狀態(tài)。紐娃(Noveliver)是目前全球唯一針對(duì)肝病患者的新型復(fù)合營(yíng)養(yǎng)及免疫調(diào)節(jié)素，含有豐富的氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)不良的肝硬化患者。但是紐娃的價(jià)格為每月1920元，價(jià)格高，使肝硬化患者在治療疾病的同時(shí)還需大量費(fèi)用花在改善營(yíng)養(yǎng)方面。養(yǎng)肝運(yùn)脾方五味中藥，價(jià)格低廉，每月的價(jià)格為幾十元。

(2)口感良好。紐娃服用時(shí)配合酸奶或水，成糊狀，無味。肝硬化患者食欲下降，這種口感必然會(huì)影響進(jìn)食。養(yǎng)肝運(yùn)脾方口味酸甜，水煎劑質(zhì)稀便于服用。

(3)本方面提供的藥物組合物具有補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)素和改善肝功能，改善食欲和減輕腹脹的多種作用，同時(shí)安全性好，口感良好，價(jià)格低廉，在肝病患者的營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充方面，具有明顯的優(yōu)勢(shì)。

附圖說明

圖1為實(shí)施例二建立大鼠肝硬化模型時(shí)正常組大鼠腎組織電鏡圖。

圖2為實(shí)施例二建立大鼠肝硬化模型時(shí)低劑量組大鼠腎組織電鏡組。

圖3為實(shí)施例二建立大鼠肝硬化模型時(shí)高劑量組大鼠腎組織電鏡組。

圖4為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，給藥期大鼠體重變化圖。

圖5為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，正常組與模型組大鼠氨基酸變化圖。

圖6為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠酪氨酸水平變化圖。

圖7為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠色氨酸水平變化圖。

圖8為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠苯丙氨酸水平變化圖。

圖9為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠異亮氨酸水平變化圖。

圖10為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠纈氨酸水平變化圖。

圖11為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠亮氨酸水平變化圖。

圖12為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠支鏈氨基酸水平變化圖。

圖13為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠芳香族氨基酸水平變化圖。

圖14為實(shí)施例三動(dòng)物實(shí)驗(yàn)部分，模型組、紐娃治療組和中藥治療組大鼠支芳比水平變化圖。

具體實(shí)施方式

如上所述，針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供了一種治療肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的藥食組合物，在保證藥效的基礎(chǔ)上，增加患者的耐受性。

本發(fā)明所述的藥食組合物，是指可以作為藥物，用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的患者；同時(shí)，也可以用來作為食品或者保健品，用于健康人群的保健和食用。

中醫(yī)學(xué)一般根據(jù)患者的癥狀體征及臨床特點(diǎn)，把肝硬化分屬于：脅痛，黃疸，癥積，痞塊，臌脹，水臌，蜘蛛蠱等。中醫(yī)證型大致分為肝氣郁結(jié)證、脾虛濕盛證、濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、肝腎陰虛證、脾腎陽(yáng)虛、肝血瘀阻證等，養(yǎng)肝運(yùn)脾方包括枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等5味，枸杞滋補(bǔ)肝腎且能補(bǔ)血；山藥大補(bǔ)肺脾腎三臟之氣；枸杞配合山藥，氣血雙補(bǔ)，補(bǔ)益肝脾肺腎四臟；山楂善消肉積且能活血柔肝；麥芽善消面積且能理氣。四藥合用，具有養(yǎng)血柔肝、健脾消導(dǎo)之功效。既能補(bǔ)充肝臟所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，又能調(diào)整臟器代謝功能，促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)素的吸收，優(yōu)于單純的營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充方案，而且以上藥物具有安全、廉價(jià)的優(yōu)勢(shì)。現(xiàn)代研究表明：五藥含有豐富氨基酸、微量元素等，在改善肝硬化營(yíng)養(yǎng)不良、氨基酸代謝失常中，具有一定的意義。

養(yǎng)肝運(yùn)脾方是首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院中西醫(yī)結(jié)合肝病重點(diǎn)學(xué)科開發(fā)的中藥經(jīng)驗(yàn)秘方，學(xué)科在長(zhǎng)期從事肝病臨床診療過程中，認(rèn)識(shí)到營(yíng)養(yǎng)不良是導(dǎo)致肝病患者預(yù)后不良的重要因素。我們基于肝硬化合并營(yíng)養(yǎng)不良的病因病機(jī)，采用養(yǎng)血柔肝、健脾消導(dǎo)法組方，選用山藥、山楂、麥芽、枸杞、萊菔子等5味藥食同源的中藥組成，用于治療肝硬化患者的營(yíng)養(yǎng)不良。前期臨床研究表明，本方具有安全、無副作用、口感良好、服用方便、成本低廉等優(yōu)勢(shì)，通過改善肝硬化患者的消化吸收功能以及補(bǔ)充微量元素和抗氧化作用機(jī)制，對(duì)肝硬化合并營(yíng)養(yǎng)不良具有一定的治療作用，較目前西醫(yī)的營(yíng)養(yǎng)素補(bǔ)充具有明顯優(yōu)勢(shì)。

而且，本發(fā)明提供的主要活性成分配方，其包含枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等5味中藥組成，一方面可以用于治療肝病營(yíng)養(yǎng)不良，另一方面可以作為保肝護(hù)肝的產(chǎn)品，用于正常人群的食用和保健。本發(fā)明提到的五味中藥可以經(jīng)過處理，例如包括各味中藥的各種炮制方法，如麥芽，包括生麥芽、炒麥芽、焦麥芽等。也可以不經(jīng)過特殊處理，將中藥藥材調(diào)配進(jìn)行常規(guī)的浸泡煎煮等。

具體的，在本發(fā)明的一種優(yōu)選實(shí)施方式中，所述藥食組合物按重量份計(jì)，包含以下物質(zhì)作為活性成分：枸杞6-12份、山藥15-30份、山楂9-15份、麥芽9-15份和萊菔子1-10份；在此基礎(chǔ)上還可以添加黃精5-40份、和/或雞內(nèi)金3-30份。黃精以根莖入藥，味甘，性平，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰，健脾，潤(rùn)肺，益腎功能，可以作為滋補(bǔ)之品；雞內(nèi)金味甘，性平，可以健胃消食。

本發(fā)明的養(yǎng)肝健脾方包含枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子等5味藥食同源的中藥作為活性成分，在此基礎(chǔ)上可在主方的基礎(chǔ)上隨證加減。同時(shí)可以添加其他輔料制備成不同的中藥劑型。所述輔料包括賦形劑以及其他營(yíng)養(yǎng)性的原料，例如乳清蛋白、蛋白粉和/或維生素等等。所述輔料例如可以占到所述制劑的20％到90％，優(yōu)選占到30％-90％，優(yōu)選占到40％-90％，優(yōu)選占到50％-90％，優(yōu)選占到60％-90％，優(yōu)選占到70％-90％。例如可以加入蜂蜜等輔料，按照本領(lǐng)域常用的比例，作成蜜丸食用。

其中在一種優(yōu)選實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了一種用于肝病合并營(yíng)養(yǎng)不良的中藥制劑試劑盒，所述中藥制劑試劑盒含有試劑單元，每個(gè)試劑單元含有枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子作為活性組分，所述的藥食組合物的有效用量為每個(gè)試劑單元每kg體重人群對(duì)應(yīng)0.1g/天-3g/天。患者或者是健康人群在藥用或者食用時(shí)，可以根據(jù)個(gè)人需要每天攝取一個(gè)或者三個(gè)試劑單元。作為藥物使用時(shí)，其臨床用量可以參照上述值，即為0.1g/kg/天-3g/kg/天。

另外，所述試劑單元可以根據(jù)實(shí)際制成的劑型的不同，在0.1g/kg/天-3g/kg/天變化。例如，如果是制成丸劑、散劑、片劑等劑型時(shí)給藥量要小，而制成湯劑或者口服液時(shí)給藥量要大。

其中，枸杞、山藥、山楂、麥芽、萊菔子等均為本領(lǐng)域常用的中藥原料，同時(shí)收錄在《中國(guó)藥典》中。

枸杞：漿果紅色，卵狀，栽培者可成長(zhǎng)矩圓狀或長(zhǎng)橢圓狀，頂端尖或鈍，長(zhǎng)7-15毫米，栽培者長(zhǎng)可達(dá)2.2厘米，直徑5-8毫米。種子扁腎臟形，長(zhǎng)2.5-3毫米，黃色。花果期6-11月。《神農(nóng)本草經(jīng)》中稱枸杞“味苦寒，主五內(nèi)邪氣，熱中，消渴，周痹。久服能堅(jiān)筋骨，輕身不老”。現(xiàn)代藥理研究表明，枸杞含蛋白質(zhì)、脂肪、糖、微量元素、胡蘿卜素、核黃素以及鈣、磷、鐵等多種礦物質(zhì)和18種氨基酸。

山藥：本品略呈圓柱形，彎曲而稍扁，長(zhǎng)15～30cm，直徑1.5～6cm。表面黃白色或淡黃色，有縱溝、縱皺紋及須根痕，偶有淺棕色外皮殘留。體重，質(zhì)堅(jiān)實(shí)，不易折斷，斷面白色，粉性。無臭，味淡、微酸，嚼之發(fā)黏。光山藥呈圓柱形，兩端平齊，長(zhǎng)9～18cm，直徑1.5～3cm。表面光滑，白色或黃白色。又稱薯蕷，《神農(nóng)本草經(jīng)》中記載：薯蕷，味甘，溫。主傷中，補(bǔ)虛羸，除寒熱邪氣。補(bǔ)中，益氣力，長(zhǎng)肌肉。久服耳目聰明，輕身，不饑，延年。現(xiàn)代學(xué)分析，山藥含皂苷、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、膽堿、淀粉、多糖、氨基酸、多酚氧化酶、維生素及微量元素等成分。

山楂：果實(shí)近球形或梨形，直徑1-1.5厘米，深紅色，有淺色斑點(diǎn)；小核3-5，外面稍具稜，內(nèi)面兩側(cè)平滑；萼片脫落很遲，先端留一圓形深洼。花期5-6月，果期9-10月，干制后可入藥。《日用本草》：化食積，行結(jié)氣，健胃寬膈，消血痞氣塊。《本草綱目》：化飲食，消肉積，癥瘕，痰飲痞滿吞酸，滯血痛脹。現(xiàn)代學(xué)研究表明，山楂含有山楂的主要成分為黃酮類及有機(jī)酸類化合物(兒茶精、槲皮素、金絲桃甙、綠原酸、山楂酸、檸檬酸、苦杏仁甙等)，另外尚含有磷脂、維生素等。

麥芽：本品呈梭形，長(zhǎng)8～12mm，直徑3～4mm。表面淡黃色，背面為外稃包圍，具5脈；腹面為內(nèi)稃包圍。除去內(nèi)外稃后，腹面有1條縱溝；基部胚根處生出幼芽和須根，幼芽長(zhǎng)披針狀條形，長(zhǎng)約5mm。須根數(shù)條，纖細(xì)而彎曲。質(zhì)硬，斷面白色，粉性。氣微，味微甘。《本草綱目》：麥糵、谷芽、粟糵，能消導(dǎo)米面諸果食積。現(xiàn)代學(xué)研究表明，麥芽含有淀粉、微量元素、氨基酸等成分。

萊菔子：為十字花科植物蘿卜Raphanus sativus L.的干燥成熟種子。夏季果實(shí)成熟時(shí)采割植株，曬干，搓出種子，除去雜質(zhì)，再曬干。本品呈類卵圓形或橢圓形，稍扁，長(zhǎng)2.5～4mm，寬2～3mm。表面黃棕色、紅棕色或灰棕色。一端有深棕色圓形種臍，一側(cè)有數(shù)條縱溝。種皮薄而脆，子葉2，黃白色，有油性。氣微，味淡、微苦辛。辛、甘，平。歸肺、脾、胃經(jīng)。消食除脹，降氣化痰。用于飲食停滯，脘腹脹痛，大便秘結(jié)，積滯瀉痢，痰壅喘咳。

下面結(jié)合具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明。但是這些實(shí)施例僅為本發(fā)明的代表舉例而已，不應(yīng)理解為本發(fā)明實(shí)施的限定范圍。此外，凡是對(duì)本發(fā)明配方、生產(chǎn)工藝步驟的簡(jiǎn)單替換或變化，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明組合物中所用的原料均為本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的原料。

其中，本發(fā)明所提到的氨基酸，參照本領(lǐng)域通用的氨基酸的表述方式，即用三個(gè)字母表示氨基酸，分別如下：

絲氨酸(Ser)；甘氨酸(Gly)；組氨酸(His)；蘇氨酸(Thr)；谷氨酸(Glu)；谷氨酰胺(Gln)；天門冬氨酸(Asp)；天門冬酰胺(Asn)；丙氨酸(Ala)；精氨酸(Arg)；脯氨酸(Pro)；半胱氨酸(Cys)；賴氨酸(Lys)；甲硫氨酸(Met)；纈氨酸(Val)；酪氨酸(Tyr)；異亮氨酸(Ile)；亮氨酸(Leu)；苯丙氨酸(Phe)；色氨酸(Trp)；支鏈氨基酸(BCAA)；芳香族氨基酸(AAA)。

實(shí)施例一

配制方法：以重量份計(jì)算，稱取枸杞15g、山藥15g、山楂15g、麥芽15g和萊菔子9g等五味中藥，煎藥前首先將藥物加涼水浸泡20分鐘左右，有利于藥物有效成分的析出。加水后使中藥完全浸泡于水中，水面要高出中藥2-3cm，煎藥先用大火煮沸后，再用文火煮，每劑應(yīng)煎兩次，第一次煎制時(shí)間為開鍋后30分鐘，第二次用開水量較第一次應(yīng)少，煎制的時(shí)間為開鍋后40分鐘，兩次各取藥汁200毫升，共計(jì)400毫升，混合均勻后，備用。最終制得的藥液為69g中藥組合物對(duì)應(yīng)于400mL藥液。

實(shí)施例二 大鼠肝硬化模型的建立

1.材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康SD大鼠，雄性，4-6周齡，體重為180±20g/只，共30只。由北京軍事研究所提供，在北京市肝病研究所動(dòng)物房飼養(yǎng)。所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前均予普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。所有飼料、飲水及墊料達(dá)到清潔標(biāo)準(zhǔn)，環(huán)境清潔安靜，溫度控制在26±2℃，濕度控制在60±10％。

1.2主要試劑

四氯化碳 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司

橄欖油 北京華源生命科貿(mào)發(fā)展有限公司

1.3儀器設(shè)備

2.方法

2.1四氯化碳油溶液的制備

四氯化碳(CCl₄)與橄欖油按體積比配置40％及50％濃度的四氯化碳油溶液，充分?jǐn)嚢枞芙猓覝乇４妫瑐溆谩?/p>

2.2動(dòng)物造模

選取30只SPF級(jí)SD大鼠，體重200±20g，隨機(jī)分為三組，每組10只。其中低劑量組給予腹腔注射40％CCl₄橄欖油溶液,每周2次，持續(xù)8周，2.0mL/100g；高劑量組給腹腔注射50％CCl₄橄欖油溶液，每周2次,持續(xù)8周2.0mL/100g；正常組注射生理鹽水，每周2次，持續(xù)8周2.0mL/100g。

8周后觀察大鼠生長(zhǎng)狀態(tài)及存活率，留取大鼠肝臟組織病理以選取最佳的造模注射劑量。

2.3.大鼠一般狀況及相關(guān)測(cè)定

2.3.1大鼠的一般情況

觀察大鼠精神狀態(tài)、皮毛光澤、活動(dòng)攝食及死亡情況。

2.3.2大鼠肝臟病理觀察

處死大鼠留取新鮮肝臟組織用HE染色，電鏡下觀察肝臟病理切片超微結(jié)構(gòu)并拍照記錄。

2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有數(shù)據(jù)處理均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用x²檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)對(duì)定性資料進(jìn)行組間比較；采用t-test或ANOVA檢驗(yàn)對(duì)定量資料進(jìn)行組間比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1大鼠的一般狀況

造模過程中，正常組大鼠表現(xiàn)機(jī)警，皮毛整齊有光澤，進(jìn)食及活動(dòng)情況均無明顯異常，無死亡。

造模組大鼠精神萎靡，皮毛欠光澤，食欲不振，活動(dòng)遲緩，體形消瘦。

3.2死亡率

造模過程中，高劑量組大鼠死亡7只，死亡率70％，低劑量組死亡2只，死亡率20％。

3.3大鼠肝臟組織電鏡觀察

對(duì)各組肝臟組織進(jìn)行電鏡觀察，在電鏡放大倍數(shù)為12000倍時(shí)，如附圖1-3所示。其中圖1為正常組大鼠電鏡圖片，圖2為低劑量組大鼠電鏡圖片，圖3為高劑量組大鼠電鏡圖片。如圖所示，正常組肝臟組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)清楚，未見明顯異常；低劑量組和高劑量組均可見肝臟纖維增生明顯，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，并形成不典型假小葉。

本發(fā)明通過40％、50％四氯化碳油溶液，干預(yù)大鼠模型，觀察兩組大鼠生長(zhǎng)變化及成模率，以尋找最佳造模濃度和劑量，盡量避免大鼠對(duì)四氯化碳反應(yīng)的個(gè)體差異，以減少大鼠死亡概率，提高模型成功率。

本實(shí)驗(yàn)腹腔注射四氯化碳油溶液建造大鼠肝硬化模型，所有模型組大鼠肝臟切片均可見肝臟纖維增生明顯，肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，并形成不典型假小葉，造模成功。但在造模過程中，高劑量組死亡率為70％，考慮可能與高劑量四氯化碳肝毒作用迅速劇烈，導(dǎo)致大鼠急性肝衰竭而死亡，不適合進(jìn)行下一步實(shí)驗(yàn)研究。故本實(shí)驗(yàn)確定予大鼠腹腔注射40％四氯化碳橄欖油溶液為制備肝硬化模型的適宜劑量。

實(shí)施例三 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

在造模成功的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步研究本發(fā)明的中藥配方對(duì)于肝硬化大鼠模型氨基酸水平以及一般生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。其中，具體實(shí)驗(yàn)過程和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：

1.材料

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)健康SD大鼠，雄性，4-6周齡，體重為180±20g/只，共37只。由北京軍事研究所提供，在北京市肝病研究所動(dòng)物房飼養(yǎng)。所有動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)前均予普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)一周。所有飼料、飲水及墊料達(dá)到清潔標(biāo)準(zhǔn)，環(huán)境清潔安靜，溫度控制在26±2℃，濕度控制在60±10％。

1.2藥物及試劑

四氯化碳(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；橄欖油(北京華源生命科貿(mào)發(fā)展有限公司)；養(yǎng)肝運(yùn)脾方(山楂、山藥、枸杞、麥芽和萊菔子)由北京佑安醫(yī)院中藥房提供，均購(gòu)自于北京杏林藥業(yè)責(zé)任有限公司，按照等效劑量系數(shù)折算法換算(參考徐叔云教授主編的《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》)，水煎濃縮至所需濃度(即將實(shí)施例一制備的400mL的藥液濃縮至63.5mL)；紐娃(北京美澳嘉事生物技術(shù)有限公司，配制濃度為0.18g/mL)；氨基酸試劑盒：北京質(zhì)譜醫(yī)學(xué)研究有限公司MSLAB-45+AA批號(hào)：MSLAB451561#；甲醇、已腈等均購(gòu)自fisher。

1.3主要儀器

電子天平(德國(guó)Sartorius公司，BP1215)；低溫離心機(jī)(美國(guó)sigma公司，3-18k)；超速離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司，WX100)；超低溫冰箱(美國(guó)Thermo公司)；全自動(dòng)石蠟切片機(jī)(德國(guó)Leica公司，LEICA RM2235)；石蠟包埋機(jī)(德國(guó)Leica公司，LEICA 1150H)；光學(xué)顯微鏡(日本OLYMPUS公司，CH型)；展片機(jī)(德國(guó)Leica公司，HI1210)；照相系統(tǒng)(日本尼康公司，Eclipso 501型)；顯微圖像分析系統(tǒng)(日本尼康公司，Image-pro plus 6.0)；高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀儀器型號(hào)：HPLC-MS/MS(Ultimate3000-API 3200 Q TRAP)。

2.實(shí)驗(yàn)方法

37只大鼠隨機(jī)分為正常組(7只)、模型組(30只)。所有模型組大鼠給予腹腔注射40％CCl₄橄欖油溶液，每周2次，持續(xù)8周，2.0mL/100g。8周后模型組大鼠病理切片證實(shí)造模成功。

然后將模型組隨機(jī)等量分為3組，模型組、紐娃治療組、中藥治療組。紐娃治療組灌胃紐娃，2mL，每日一次；中藥治療組灌胃養(yǎng)肝運(yùn)脾方，2mL，每日一次；正常組與模型組均灌胃生理鹽水，2mL，每日一次。各組均干預(yù)治療6周。

治療期間，在0周、2周、4周、6周測(cè)量大鼠體重，尾靜脈取大鼠靜脈血0.5mL，進(jìn)行血清氨基酸水平分析。治療結(jié)束后處死大鼠，留取肝臟組織行電鏡觀察病理變化。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)處理均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用x²檢驗(yàn)或Fisher精確檢驗(yàn)對(duì)定性資料進(jìn)行組間比較；采用t-test或ANOVA檢驗(yàn)對(duì)定量資料進(jìn)行組間比較。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

4.結(jié)果

4.1各組大鼠一般情況的比較

實(shí)驗(yàn)過程中，正常組大鼠共計(jì)7只，大鼠表現(xiàn)機(jī)警，皮毛整齊有光澤，進(jìn)食及活動(dòng)情況均無明顯異常，造模期無死亡，給藥期死亡2只。造模組大鼠共計(jì)30只，大鼠精神萎靡，皮毛欠光澤，食欲不振，活動(dòng)遲緩，體形消瘦；其中大鼠在造模期死亡7只，剩余23只模型組大鼠，隨機(jī)分為模型組(7只)、紐娃治療組(8只)和中藥治療組(8只)，進(jìn)行給藥處理。給藥期模型組死亡3只，紐娃治療組死亡3只，中藥治療組死亡2只。給藥期三組肝硬化大鼠一般情況無明顯差異，中藥治療組大鼠體重增長(zhǎng)比其他組有增多趨勢(shì)(P＞0.05)，如圖4所示。從圖4可以看出，治療期內(nèi)給予中藥治療的大鼠，其體重增長(zhǎng)的趨勢(shì)也比紐娃治療組更明顯。

4.2模型組大鼠與正常大鼠血清氨基酸水平比較

比較正常組大鼠和模型組(肝硬化大鼠)大鼠的血清氨基酸水平變化。與正常組比較，肝硬化大鼠血清氨基酸水平變化較大，氨基酸水平紊亂，水平升高及降低均可見，其中絲氨酸(Ser)、色氨酸(Trp)水平下降、芳香族氨基酸(AAA)水平升高、支鏈氨基酸(BCAA)與芳香族氨基酸(AAA)比值下降，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)果見圖5和表1所示。

表1 正常組與肝硬化大鼠氨基酸變化

注：與正常組比較，*P<0.05

4.3給藥期肝硬化大鼠氨基酸水平變化

在給藥期，分別于給藥后第0周，第2周，第4周，以及第6周，觀察不同組，包括模型組，中藥給藥組以及紐娃給藥組大鼠氨基酸水平變化。在觀察支芳比及相關(guān)氨基酸水平變化中發(fā)現(xiàn)，養(yǎng)肝運(yùn)脾方在影響肝硬化大鼠氨基酸水平上作用與紐娃相似，組間比較基本無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；中藥治療組與模型組比較，氨基酸水平差變化異較大，其中以支芳比(BCAA/AAA)升高，芳香族氨基酸水平下降最為明顯，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。隨著肝硬化大鼠模型病程進(jìn)展，大鼠體內(nèi)支鏈氨基酸(包括亮氨酸、異亮氨酸及纈氨酸)、芳香族氨基酸(包括苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸)及相關(guān)氨基酸水平均呈下降趨勢(shì)，其中模型組支鏈氨基酸水平下降明顯，其中異亮氨酸(Ile)、纈氨酸(Val)下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，中藥治療組芳香族氨基酸下降明顯，其中色氨酸(Try)下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。模型組支芳比值明顯下降(P<0.05)，中藥治療組及紐娃組支芳比值明顯升高(P<0.05)，且中藥治療組趨勢(shì)更加明顯。肝硬化進(jìn)展中，大鼠支鏈氨基酸及芳香族氨基酸都成下降趨勢(shì)，支芳比也逐漸降低，中藥治療組在與模型組比較時(shí)，支芳比顯著提高，說明養(yǎng)肝運(yùn)脾方有改善肝硬化大鼠支芳比的作用，且主要以減緩支鏈氨基酸的降低而改善支芳比。結(jié)果見表2-10以及圖6-圖14所示。

表2 酪氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表3 色氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表4 苯丙氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表5 異亮氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表6 纈氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比#P<0.05

表7 亮氨酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表8 支鏈氨基酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表9 芳香族氨基酸水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

表10 支芳比水平變化

注：中藥治療組與模型組比較，*P<0.05；與紐娃治療組比較，^△P<0.05；與治療前相比^#P<0.05

實(shí)施例四 臨床實(shí)驗(yàn)

本發(fā)明的養(yǎng)肝健脾方作為中藥經(jīng)驗(yàn)秘方，在臨床使用時(shí)，大量的臨床實(shí)踐表明其可以有效治療肝病營(yíng)養(yǎng)不良患者。其在臨床使用時(shí)，通常視肝病營(yíng)養(yǎng)不良的病情嚴(yán)重程度，按照每個(gè)成年病人臨床劑量即60-150g/天給藥，然后按照實(shí)施例一的方法配制成藥物煎劑使用。作為滋補(bǔ)食品或者藥品時(shí)，可以縮寫用量，將藥物組合物的量縮寫為10g/天，甚至于更少，以便進(jìn)行滋補(bǔ)。

肝硬化患者幾乎都存在不同程度的營(yíng)養(yǎng)不良，蛋白質(zhì)-能量營(yíng)養(yǎng)不良(PEM)在肝硬化患者中最常見。其中氨基酸的代謝異常表現(xiàn)尤為突出。氨基酸代謝異常是引起肝硬化并發(fā)癥的重要發(fā)病機(jī)制，如肝性腦病(HE)、低蛋白血癥、胰島素抵抗等。改善肝硬化患者氨基酸水平對(duì)減少并發(fā)癥十分重要。

在中醫(yī)方面一般根據(jù)患者的癥狀體征及臨床特點(diǎn)，把肝硬化屬于：脅痛，黃疸，癥積，痞塊，臌脹，水臌，蜘蛛蠱等。中醫(yī)證型大致分為肝氣郁結(jié)證、脾虛濕盛證、濕熱內(nèi)蘊(yùn)證、肝腎陰虛證、脾腎陽(yáng)虛、肝血瘀證等，養(yǎng)肝運(yùn)脾方為枸杞、山藥、山楂、麥芽和萊菔子等五位組成，枸杞滋補(bǔ)肝腎且能補(bǔ)血；山藥大補(bǔ)肺脾腎三臟之氣；枸杞配合山藥，氣血雙補(bǔ)，補(bǔ)益肝脾肺腎四臟；山楂善消肉積且能活血柔肝；麥芽善消面積且能理氣，同時(shí)再輔以萊菔子消脹滿。五藥合用，具有養(yǎng)血柔肝、健脾消導(dǎo)之功效。從現(xiàn)代研究理論上表明：五藥含有豐富氨基酸、微量元素等，在改善肝硬化營(yíng)養(yǎng)不良、氨基酸代謝失常中，具有一定理論指導(dǎo)意義。

肝硬化患者肝臟受損，氨基酸代謝異常。氨基酸代謝異常是引起肝硬化并發(fā)癥的重要發(fā)病機(jī)制。首先其中血清氨基酸尤其是支鏈氨基酸濃度與白蛋白濃度密切相關(guān)，而白蛋白濃度與肝硬化腹水等并發(fā)癥的出現(xiàn)有很大關(guān)系，隨著患者病程進(jìn)展，肝硬化程度的加深，支鏈氨基酸水平下降，實(shí)驗(yàn)證明養(yǎng)肝運(yùn)脾方有減緩支鏈氨基酸下降的作用，這對(duì)改善患者白蛋白水平及防治腹水形成有一定積極作用。其次，氨基酸失衡(支鏈氨基酸和芳香族氨基酸比值的下降)是肝性腦病的重要發(fā)病機(jī)制之一。有研究表明：補(bǔ)充支鏈氨基酸可明顯提高肝性腦病的恢復(fù)，并且可以對(duì)抗分解代謝，促進(jìn)血漿白蛋白合成，加速肝臟再生。養(yǎng)肝運(yùn)脾方正是以減少支鏈氨基酸的消耗，調(diào)整支芳比改善肝硬化大鼠氨基酸水平，故可能具有減少肝性腦病的風(fēng)險(xiǎn)。紐娃(Noveliver)是目前全球唯一針對(duì)肝病患者的新型復(fù)合營(yíng)養(yǎng)及免疫調(diào)節(jié)素，含有豐富的氨基酸等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，廣泛應(yīng)用于營(yíng)養(yǎng)不良的肝硬化患者，本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)顯示養(yǎng)肝運(yùn)脾方在治療肝硬化大鼠氨基酸水平變化、改善支芳比的過程中，與紐娃組比較結(jié)果無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。養(yǎng)肝運(yùn)脾方后續(xù)可嘗試在臨床應(yīng)用，改善肝硬化患者的營(yíng)養(yǎng)不良和代謝紊亂狀態(tài)。這為是否能有更經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的中藥方劑代替昂貴的營(yíng)養(yǎng)品提出新思路及證據(jù)，可以作為治療肝硬化患者營(yíng)養(yǎng)問題的新思路。

以上所述僅為本發(fā)明較佳實(shí)施例，并不用于局限本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)所做的修改、等同替換和改進(jìn)等，均需要包含在發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。