本發明涉及中藥活性成分，特別涉及一種款冬酮的新用途，具體是款冬酮在制備抗衰老藥物和保健食品中的應用。

背景技術：

隨著醫療條件的改善，人類平均壽命在不斷地延長，同時人口老齡化問題也逐漸嚴重。截至2006年底，全國65歲以上人口10419萬人，占全國總人口的7.9％。預計到2050年人口達到最高峰值時，老年人口總量將超過4億，老齡化水平推進到30％以上，接近于1980年全世界老年人口之和。隨著人口老齡化形勢日趨嚴峻，衰老機制、延緩衰老藥物研究已經成為生命科學的熱點和重點問題。衰老的機制復雜、學說繁多，迄今為止，解釋衰老機理的理論或學說多達200余種，其中包括：遺傳控制說、細胞端粒說、自由基損傷說、體細胞突變說、免疫紊亂說、線粒體損傷學說等(FosselM.Cell Senescence in HmanAging and Disease.In：Harman D.(Ed.)：Increasing healthy lifespan，conventionalmeasures and slowing the innate aging process.ANN N Y ACAD SCI，2002，959：14～23)。

款冬酮(tussilagone)是從中藥款冬花(Tussilagofarfara L.)中分離出的一種活性單體成分。研究表明款冬酮具有抗炎、抗過敏、抗癌等活性，但是否具有抗衰老作用未見任何報道。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種款冬酮的醫藥新用途，以充分發揮款冬酮的藥用價值。

本發明提供一種以款冬酮為活性成分在制備抗衰老藥物或保健品中的應用。

所述款冬酮的結構式如下：

所述款冬酮采用現有技術制備得到。

本發明以款冬酮為活性成分，采用線蟲這一模式生物，觀察款冬酮對線蟲壽命的影響，發現20μM濃度的款冬酮能延長線蟲23.6％的平均壽命，25％的中位壽命以及25.8％的最高壽命?？疃鳛榛钚猿煞挚稍谥苽淇顾ダ纤幬锘虮＝∑分袘?。

附圖說明

圖1為本發明實施例2的線蟲生存曲線圖。

圖2為本發明實施例2中不同劑量款冬酮給藥組存活時間和和最高壽命圖(各劑量組與空白組相比：P＜0.05*P＜0.01**)。

具體實施方式

下面結合實施例對本發明作進一步詳細、完整的說明。

實施例1款冬酮的制備

取干燥的款冬花1kg粉碎，用石油醚超聲提取3次，每次100min，提取液過濾，減壓濃縮得粗提取物1.23g。

取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水(10:5:11:3)置于分液漏斗中，靜置分層，上相為固定相，下相為流動相，用泵將固定相灌滿分離柱，取粗提取物溶于固定相中上樣，當主機轉速達到800rpm，以2ml/min流速泵入流動相，當流動相流出時根據檢測器圖譜收集目標成分，濃縮、干燥得款冬酮粗品。以石油醚-乙酸乙酯(35:1)為洗脫劑，采用硅膠柱對款冬酮粗品進行分離，用石油醚-乙酸乙酯(10:3)對各餾分進行薄層檢測，合并含款冬酮的流分，減壓濃縮干燥得款冬酮純品。經高效液相色譜檢測其純度為99.3％。

實施例2款冬酮抗衰老藥效學實驗

1材料

1.1模式生物

秀麗隱桿線蟲(Caenorhabditiselegans，C.elegans)N2由山西大學應用生物學研究所馬恩波課題組友情提供。

1.2藥物和試劑

大腸桿菌Escherichia coli OP50(E.coil OP50)由山西大學應用生物學研究所馬恩波課題組友情提供，5-氟-2′-脫氧尿苷(FUdR)購自sigma公司(美國)，瓊脂粉購自Solarbio公司(北京)，蛋白胨購自北京奧博星生物科技有限責任公司，其他無機試劑均購自天津市風船化學試劑有限公司。標準線蟲培養基NGM培養基：每升培養基含3g氯化鈉、21g瓊脂粉、2.5g蛋白胨、1mL膽固醇乙醇溶液(濃度為5mg/mL)、1mL CaCl₂溶液(1mol/L)、1mL MgSO₄溶液(1mol/L)和25mLKH₂PO₄-K₂HPO₄緩沖溶液(pH＝6，濃度為1mol/L)。堿裂解液由0.5mol/L NaOH和0.5％NaOCl配制而成。

1.3儀器

恒溫培養箱(上海一恒科學儀器有限公司)，體視顯微鏡(重慶澳浦光電科技有限公司)，高壓滅菌鍋(上海申安醫療器械廠)。

2方法

2.1實驗分組

分為對照組和三個給藥組，款冬酮給藥組在培養基中的濃度分別為20μM，40μM，60μM。

2.2線蟲同步化

用堿裂解液對在20℃培養的處于混合發育時期的線蟲進行處理，獲得蟲卵，置于標準線蟲培養基(NGM)板上培養，從而獲得同步發育的幼蟲。

2.3線蟲常規培養

選用L4期雌雄同體N2線蟲，轉移至預先接種了E.coil OP50的NGM平板，于20℃培養箱中恒溫培養。

2.4受試培養基的制備

對照組培養基中含50μmol/LFUdR；藥物組培養基中含50μmol/LFUdR及不同濃度的款冬酮(20μM，40μM，60μM)。

2.5壽命觀察

挑取同步化的L4線蟲到各組培養基中，每組90條，每個板中有30條。從轉移時刻起開始計算線蟲存活天數，轉移當天記為壽命實驗第0天(day 0)。每天對線蟲進行觀察，記錄線蟲的死亡數。線蟲死亡標準：喪失運動能力，多次觸碰無反應。對平均壽命、中位壽命(每組線蟲的中間壽命)、最高壽命(每組線蟲最后存活的10只線蟲的平均壽命)進行統計學比較。

3結果分析

運用SPSS16.0軟件對線蟲存活狀況進行分析。繪制生存曲線圖，結果顯示20μM濃度的款冬酮能使空白組線蟲的生存曲線右移，即有明顯效果；40μM濃度的款冬酮對空白組線蟲的生存曲線無明改變，即無明顯效果；60μM濃度的款冬酮則使空白組線蟲的生存曲線左移，即有抑制作用(圖1)。

用Kaplan-Meier(KM)法對其平均壽命、最高壽命和中位壽命進行統計分析，與對照組相比，濃度為20μM的款冬酮能顯著延長線蟲的平均壽命、中位壽命和最高壽命，結果見表1(分別延長23.6％，25％，25.8％)。

表1 款冬酮對線蟲壽命的影響(n＝90)

與空白組相比，P＜0.05*P＜0.01**

運用T檢驗對每個劑量組線蟲存活天數及最高壽命進行分析(圖2)。結果顯示，20μM，40μM濃度的款冬酮給藥組能明顯延長線蟲的存活天數(P<0.01)；60μM濃度的款冬酮給藥組能明顯降低線蟲存活天數(P<0.01)。20μM濃度的款冬酮組最高壽命與空白組之間存在明顯差異(P<0.01)，能明顯延長線蟲的最高壽命；40μM濃度的款冬酮最高壽命與空白組之間無明顯差異，即對線蟲的最高壽命無明顯影響；60μM濃度的款冬酮最高壽命與空白組之間存在明顯差異(P<0.01)，能降低線蟲的最高壽命。

運用卡方分析對20μM款冬酮組與空白組線蟲的(根據生存曲線圖1第4天差異開始)存活率進行統計分析。發現從第11天起20μM濃度的款冬酮能明顯延長(p<0.05)空白組線蟲的壽命(表2)。

表2 20μM款冬酮與空白組比較卡方檢驗結果表(P值)