本發(fā)明屬于護(hù)膚品領(lǐng)域，特別涉及一種含生物多肽微球美白面膜的制備方法。

背景技術(shù)：

貼式面膜包含面膜基材和精華液，面膜基材作為介質(zhì)，吸附精華液，可以固定在臉部特定位置，形成封閉層，促進(jìn)精華液的吸收。貼式面膜擁有即刻保濕、提亮膚色和改善皮膚紋理的效果，是面膜類產(chǎn)品中銷量最大、增長(zhǎng)速度最快的一個(gè)品類。目前最受消費(fèi)者歡迎且銷量最大的貼式面膜逐步淘汰了使用時(shí)會(huì)損傷皮膚的撕拉型面膜。

傳統(tǒng)的美白面膜的制備方法，一般為面膜基材浸泡在含有美白功能成分的液體中。傳統(tǒng)的皮膚美白劑,往往采用化學(xué)性物質(zhì),如過(guò)氧化氫、氯化氨基汞以及各種酚類衍生物,這些化合物能使黑色素組織迅速瓦解,達(dá)到快速美白的效果。但由于安全問(wèn)題,在許多國(guó)家的衛(wèi)生規(guī)范中,已被禁止用于化妝品中。近年來(lái),人類使用各種天然的、合成的物質(zhì)美白皮膚,如曲酸、熊果苷及其衍生物、維生素c及其衍生物、果酸類以及動(dòng)植物提取物等。尋找有效且對(duì)人體無(wú)毒副作用的酪氨酸酶抑制劑已成為藥學(xué)和化妝品行業(yè)研究的趨向。

生物活性多肽是指對(duì)生物機(jī)體的生命活動(dòng)有益或具有生理作用的膚類化合物,是蛋白質(zhì)中20個(gè)天然氨基酸以不同組成和排列方式構(gòu)成的從二膚到復(fù)雜的線性、環(huán)形結(jié)構(gòu)的不同肚類的總稱,也是源于蛋白質(zhì)的多功能化合物。目前,化妝品中應(yīng)用較多的主要有細(xì)胞因子類如表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(egf)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(fgf)等;還有一些酶類如:sod,谷朧甘膚過(guò)氧化物酶等。而本發(fā)明的fmoc-hp則很少有人應(yīng)用于美白組分的研究。因此開(kāi)發(fā)一種新型的生物活性多肽美白面膜更具有商業(yè)價(jià)值。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種生物多肽美白面膜的制備方法，該方法操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和，制備得到的生物多肽面膜，美白效果好，球形的生物多肽使面膜具有較好的皮膚接觸感。

本發(fā)明的一種生物多肽美白面膜的制備方法，包括：

（1）將七肽fmoc-hp溶于1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇溶液中，得到fmoc-hp溶液；其中，fmoc-hp的濃度為50~150mg/ml；

（2）將pta溶解在無(wú)水乙醇溶液中，得到pta的乙醇溶液；其中pta的濃度為0.5~1.0mg/ml；

（3）將步驟（2）中的pta的無(wú)水乙醇溶液加入到步驟（1）中的fmoc-hp溶液，pta的無(wú)水乙醇溶液和fmoc-hp溶液的體積比為：15:1~5:1，靜置，離心，冷凍干燥，得到生物多肽微球；其中，避光靜置的時(shí)間為0.5~2小時(shí)；

（4）將步驟（3）中的生物多肽微球重新分散在溶液中，得到生物多肽微球的分散液，將分散液利用手持噴槍均勻噴灑在空白面膜上，烘干，即得含生物多肽微球的美白面膜；其中，分散液的濃度為5~15mg/ml。

所述步驟(1)中七肽的序列為fomc-ile-gln-ser-pro-his-phe-phe。

所述步驟（3）中的加入為快速加入。

所述步驟（4）中均勻噴灑采用手持式噴槍，其中，手持噴槍的噴灑距離為3~6cm，含有生物多肽微球的噴灑溶液質(zhì)量和空白面膜紙的質(zhì)量比為：5%~15%。

所述步驟（4）中溶解液為ph7.4的磷酸緩沖液。

所述步驟（4）中烘干為恒溫干燥；其中，溫度為30~45℃。

有益效果

（1）本明制備含生物多肽的美白面膜，操作簡(jiǎn)單、反應(yīng)條件溫和，耗時(shí)較少，成本低，適用于規(guī)模化生產(chǎn)；

（2）本發(fā)明所使用的材料具有很好的生物降解性和美白特性，具有較好的皮膚接觸感。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例1中生物多肽微球的sem圖；

圖2為含生物多肽面膜對(duì)黑素細(xì)胞增殖率的影響；

圖3為含生物多肽面膜對(duì)黑色素瘤細(xì)胞黑素生成的影響。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。

實(shí)施例1

生物多肽微球的制備，包括如下步驟：

（1）配制質(zhì)量濃度為10mg/ml的fmoc-hp溶液10.0ml，標(biāo)記為a液。準(zhǔn)確稱取1g的fmoc-hp，溶解在10毫升1,1,1,3,3,3,-六氟-2-丙醇中，使用漩渦振蕩器震蕩均勻，得到均一透明的fmoc-hp溶液；

（2）配制質(zhì)量濃度為0.6mg/ml的pta的乙醇溶液90ml，標(biāo)記為b液。準(zhǔn)確稱取54mg的pta，溶解在90毫升無(wú)水乙醇中，實(shí)用漩渦振蕩器震蕩均勻，得到均一透明的pta乙醇溶液；

（3）將b液快速加入a液中，使用漩渦振蕩器震蕩10秒，然后靜置1小時(shí)，8000轉(zhuǎn)速離心，去掉上層清液，取下層沉淀物，冷凍干燥，得到生物多肽微球，所拍sem圖如圖1所示，分散均勻，粒徑在1um左右。

實(shí)施例2

以實(shí)施例1中所制得的生物多肽微球制備美白面膜：

(1)裁取10cm╳10cm的無(wú)紡布一塊，稱重，質(zhì)量為0.538g，作為面膜基材，待用；

(2)配制質(zhì)量濃度為10mg/ml的多肽生物微球的分散液。稱取100mg的多肽生物微球，分散于10ml的ph7.4的磷酸緩沖液中，攪拌，形成均一的乳白色懸濁液；

(3)取配制好的5.38ml的多肽生物微球分散液，置于手持噴槍中，噴灑距離為5cm，均勻的噴灑在步驟（1）中的裁好的無(wú)紡布上；

(4)噴灑完畢后，置于干燥無(wú)塵的培養(yǎng)皿中放置恒溫干燥箱（37℃），烘干12小時(shí)，至完全烘干，得到含生物多肽微球的美白面膜。

實(shí)施例3

生物多肽微球的美白面膜的美白性能測(cè)試，分別采用對(duì)黑素細(xì)胞增殖率的影響和對(duì)黑色素瘤細(xì)胞黑色素生成影響兩個(gè)方面進(jìn)行美白效果評(píng)價(jià)：

(1）生物多肽微球的美白面膜對(duì)黑素細(xì)胞活力的影響實(shí)驗(yàn)：細(xì)胞接種之前，空白面膜和多肽面膜都用紫外光進(jìn)行殺菌消毒3小時(shí)。采用mtt法，取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞常規(guī)消化，調(diào)整細(xì)胞濃度為5×104個(gè)/ml，取100ul接種于96孔板，37℃co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后，設(shè)立4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，每孔分別加入1mg，2mg，4mg和10mg的生物活性多肽面膜。并設(shè)立美白對(duì)照組（培養(yǎng)基+空白面膜），陰性對(duì)照組（培養(yǎng)基+細(xì)胞）和空白對(duì)照組（單純培養(yǎng)基）。置于co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48h后，每孔加入5mg/ml的mtt溶液20ul，繼續(xù)培養(yǎng)4h后，棄上清，每孔加入100uldmso，用酶標(biāo)儀在492nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（a），用增殖比例表示細(xì)胞增殖情況。即細(xì)胞增殖率=（a實(shí)驗(yàn)組-a美白對(duì)照組）/（a陰性對(duì)照組-a空白對(duì)照組）×100%。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)2，細(xì)胞增殖率分別為：94.8%，89.6%，81.3%，70.5%，可以看出，在質(zhì)量不高于4mg情況下，對(duì)人a375黑色素瘤細(xì)胞增殖率沒(méi)有顯著影響，增殖率均保持在80%以上。當(dāng)質(zhì)量為10mg時(shí)，開(kāi)始明顯抑制細(xì)胞的增殖，增殖率降低至73%以下，該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05）；

(2）生物多肽微球的美白面膜對(duì)黑色素瘤細(xì)胞黑色素生成影響：調(diào)整黑色素瘤細(xì)胞密度，以5×105個(gè)/孔接種于6孔板，6h后換液，每孔加入1mg，2mg，4mg和10mg的生物活性多肽面膜，對(duì)照組加入新鮮培養(yǎng)液代替多肽面膜，5%co2，37℃孵育48h后，棄去上清液，每孔加入0.25%胰酶1ml于室溫下消化2min，每孔加入4ml培養(yǎng)液中止消化，吹打成單細(xì)胞懸液，取20μl作細(xì)胞計(jì)數(shù)，其余細(xì)胞懸液1500rpm離心5min，棄上清液，加人1ml濃度為1mol/l的naoh溶液，震蕩5min，80℃水浴加熱1h后，轉(zhuǎn)移至96孔板，每孔加入100ul，選擇492nm波長(zhǎng)，以空白孔調(diào)零，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)吸光度（a）。各實(shí)驗(yàn)組相對(duì)黑素含量=（a實(shí)驗(yàn)組-a美白對(duì)照組）/（a陰性對(duì)照組-a空白對(duì)照組）×100%。生物多肽面膜對(duì)黑色素瘤細(xì)胞黑素生成的影響見(jiàn)圖3，當(dāng)濃度低于4mg時(shí)，雖然不顯著影響黑素細(xì)胞的增殖率，但是在1~10mg質(zhì)量范圍內(nèi)，呈質(zhì)量依賴性抑制黑色素瘤細(xì)胞黑素生成。當(dāng)質(zhì)量為10mg時(shí)，相對(duì)黑色含量?jī)H為對(duì)照組的56%；

綜合圖1和圖2實(shí)驗(yàn)結(jié)果，本發(fā)明制備的生物多肽面膜，不僅抑制了黑素細(xì)胞的增殖，且能抑制黑色素瘤細(xì)胞黑素生成，具有顯著的美白效果。