本發明涉及干細胞提取物，尤其是一種基于人間充質干細胞分泌的活性因子提取物的身體霜及其制備方法。
背景技術：
間充質干細胞(mesenchymalstemcells,msc)是一組源于基質的異質細胞群，可以從人體大多數組織獲取。它們具有自我更新能力、組織修復、免疫調節能力，可以向中胚層譜系分化，例如：脂肪細胞、骨細胞、軟骨細胞等，此外還能夠向及其它胚層譜系細胞分化，例如向表皮細胞、血管內皮細胞分化。
間充質干細胞培養體系中含有多種大量的活性成分，如：干細胞生長因子(scf)、成纖維細胞生長因子(fgf)、內皮細胞生長因子(vegf)、表皮細胞生長因子(egf)、細胞集落刺激因子、白細胞介素(il)、膠原蛋白、透明質酸等80余種活性物質。身體霜基礎配方成分中，另外添加促進皮膚修復的寡肽-1能促進細胞的增殖分化，以新生細胞代替衰老細胞和死亡細胞，使肌膚保持最佳生理狀態，是決定肌膚活力和健康的源泉，寡肽-2能夠促進成纖維細胞增殖分化，具有深層修復作用，可用于新產生的痘坑、激光后、點斑點痣祛痘后修復，紅血絲修復。調理膚質：改善細胞生長的內環境，促進彈性纖維和膠原蛋白的合成，調理肌膚紋理，還原膚色紅潤光澤，使皮膚柔軟潤滑、富有彈性，寡肽-5能夠促進表皮角質細胞生長，修復受損細胞，加速細胞的新陳代謝，增加皮膚的免疫力和抵抗力，使肌膚回復健康，亮白狀態。可用于皮膚的緊致修復，解決各種皮膚問題。目前，已經有將間充質干細胞分泌的活性因子應用于皮膚的修復及治療的報道。但是用于修復面部以及身體各種皮膚問題的化妝品沒有報道。
技術實現要素：
本發明所要解決的技術問題是，提供一種基于人間充質干細胞分泌的活性因子提取物的身體霜及其制備方法，用高濃度的間充質干細胞分泌的多種細胞因子用于皮膚各種問題的修復、保濕，使皮膚細膩有光澤。
為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種基于人間充質干細胞分泌的活性因子提取物的身體霜的制備方法，包括以下步驟:
(1)人間充質干細胞培養：從細胞庫中選取p2-p6的人間充質干細胞復蘇，接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培養細胞所用完全培養基為無酚紅dmem/df12和體積比濃度為10％胎牛血清；細胞接種完成，放于二氧化碳培養箱培養，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)第一批次細胞融合度達到70％-80％時，以生理鹽水清洗細胞2次，用復方電解質注射液進行饑餓培養；
(3)饑餓培養12-24小時后，第一批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(4)取培養的第二批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，用步驟(3)中細胞培養上清進行饑餓培養；
(5)饑餓培養12-24小時后，第二批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(6)取培養的第三批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，用步驟(5)中細胞培養上清進行饑餓培養；
(7)饑餓培養12-24小時后，第三批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清,得到高濃度間充質干細胞提取物；
(8)高濃度間充質干細胞提取物與身體霜基礎配方液按照質量比1:5到1:100配比得到身體霜；
所述身體霜基礎配方液的配方如下，百分比為質量百分比：
所述人間充質干細胞包括人臍帶間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、骨髓間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、月經血間充質干細胞或牙髓間充質干細胞。
上述的制備方法制得的基于人間充質干細胞分泌活性因子的身體霜。
本發明有益效果：將細胞進行饑餓培養，使得細胞分泌的各種活性成分的濃度都得到了提高，并且在短時間內使用饑餓上清重復饑餓間充質干細胞，使細胞提取物濃度進一步增加。而高濃度的間充質干細胞提取物可促進內膜組織分化、血管新生、肉芽組織生長，促使損傷皮膚組織結構再生修復，減少疤痕結締組織的產生，調節皮膚免疫微環境，減少創面組織的細菌感染及炎癥反應，另外添加促進皮膚修復的寡肽能更好的解決肌膚問題。
附圖說明
圖1為本發明的方法培養的間充質干細胞圖。
具體實施方式
下面結合附圖和具體實施方式對本發明作進一步詳細說明：
本發明的基于人間充質干細胞分泌的活性因子提取物的身體霜的制備方法，包括以下步驟:
(1)人間充質干細胞培養：從細胞庫中選取p2-p6的人間充質干細胞復蘇，接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的50％-60％、35％-45％、20％-30％；培養細胞所用完全培養基為無酚紅dmem/df12和體積比濃度為10％胎牛血清；細胞接種完成，放于二氧化碳培養箱培養，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)第一批次細胞融合度達到70％-80％時，以生理鹽水清洗細胞2次，用復方電解質注射液進行饑餓培養；
(3)饑餓培養12-24小時后，第一批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(4)取培養的第二批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，用步驟(3)中細胞培養上清進行饑餓培養；
(5)饑餓培養12-24小時后，第二批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清備用；
(6)取培養的第三批次細胞，當細胞融合度達到70％-80％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，用步驟(5)中細胞培養上清進行饑餓培養；
(7)饑餓培養12-24小時后，第三批次細胞融合度達90％-95％，收取細胞培養上清，3000-4500g條件下離心5-8min除去沉淀，取離心后上清,得到高濃度間充質干細胞提取物；
(8)高濃度間充質干細胞提取物與身體霜基礎配方液按照質量比1:5到1:100配比得到身體霜；
所述身體霜基礎配方液的配方如下，百分比為質量百分比：
所述人間充質干細胞包括人臍帶間充質干細胞、脂肪間充質干細胞、骨髓間充質干細胞、胎盤間充質干細胞、月經血間充質干細胞或牙髓間充質干細胞。
上述的制備方法制得的基于人間充質干細胞分泌活性因子的身體霜。
本發明間充質干細胞在培養過程中會分泌多種細胞因子，這些人間充質干細胞分泌的活性細胞因子能夠促進損傷皮膚組織的結構重建與再生修復，減少疤痕組織的產生；可調節局部組織微環境，促進血管新生，改善局部供血，從而達到緩解缺血癥狀、促進組織新生的效果；還可調節局部組織的免疫功能，減少創面組織的細菌感染及炎癥反應，對于皮膚狀態的調節，皮膚各種問題的解決修復有很好的效果。
其中人間充質干細胞活性因子為饑餓培養后提取，其余成分為身體霜基礎配方成分，另外添加促進皮膚修復的寡肽-1能促進細胞的增殖分化，以新生細胞代替衰老細胞和死亡細胞，使肌膚保持最佳生理狀態，是決定肌膚活力和健康的源泉，寡肽-2能夠促進成纖維細胞增殖分化，具有深層修復作用，可用于新產生的痘坑、激光后、點斑點痣祛痘后修復，紅血絲修復。調理膚質：改善細胞生長的內環境，促進彈性纖維和膠原蛋白的合成，調理肌膚紋理，還原膚色紅潤光澤，使皮膚柔軟潤滑、富有彈性，寡肽-5能夠促進表皮角質細胞生長，修復受損細胞，加速細胞的新陳代謝，增加皮膚的免疫力和抵抗力，使肌膚回復健康，亮白狀態。可用于皮膚的緊致修復，解決各種皮膚問題。
實施例1
(1)人臍帶間充質干細胞培養：從細胞庫中選取p4的人臍帶間充質干細胞復蘇。接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的60％(每瓶接種細胞數：9*106,接種細胞十瓶)、40％(每瓶接種細胞數：6*106，接種細胞十瓶)、20％(接種細胞數：3*106，接種細胞十瓶),培養體系均為40ml。培養細胞所用完全培養基為無酚紅dmem/df12和體積比濃度為10％胎牛血清，接種細胞瓶為t-175培養瓶。細胞接種完成，放于二氧化碳培養箱培養，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)培養30小時,此時第一批次細胞融合度達到75％時，見(圖1)，以生理鹽水清洗細胞2次，每瓶用40ml復方電解質注射液(中國大冢制藥有限公司生產的復方電解質葡萄糖mg3注射液)進行饑餓培養；
(3)饑餓培養18小時后，第一批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(4)取培養的第二批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，每瓶用步驟(3)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(5)饑餓培養18小時后，第二批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(6)取培養的第三批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，每瓶用步驟(5)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(7)饑餓培養24小時后，第三批次細胞融合度達90％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清,得到高濃度間充質干細胞提取物；
(8)高濃度間充質干細胞提取物與身體霜基礎配方液按照質量比1:49配比得到身體霜。
身體霜基礎配方液為：
實施例2
(1)人脂肪間充質干細胞培養：從細胞庫中選取p3的人脂肪間充質干細胞復蘇。接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的60％(每瓶接種細胞數：9*106,接種細胞十瓶)、40％(每瓶接種細胞數：6*106，接種細胞十瓶)、20％(接種細胞數：3*106，接種細胞十瓶),培養體系均為40ml。培養細胞所用完全培養基為無酚紅dmem/df12和體積比濃度為10％胎牛血清，接種細胞瓶為t-175培養瓶。細胞接種完成，放于二氧化碳培養箱培養，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)培養24小時,此時第一批次細胞融合度達到75％時，見(圖1)，以生理鹽水清洗細胞2次，每瓶用40ml復方電解質注射液進行饑餓培養；
(3)饑餓培養20小時后，第一批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(4)取培養的第二批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，每瓶用步驟(3)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(5)饑餓培養20小時后，第二批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(6)取培養的第三批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，每瓶用步驟(5)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(7)饑餓培養20小時后，第三批次細胞融合度達90％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清,得到高濃度間充質干細胞提取物；
(8)高濃度間充質干細胞提取物與身體霜基礎配方液按照質量比1:60配比得到身體霜。
身體霜基礎配方液為：
實施例3
(1)人臍帶間充質干細胞培養：從細胞庫中選取p6的人臍帶間充質干細胞復蘇。接種批次記為第一批次、第二批次、第三批次，接種密度分別為最大融合度的60％(每瓶接種細胞數：9*106,接種細胞十瓶)、40％(每瓶接種細胞數：6*106，接種細胞十瓶)、20％(接種細胞數：3*106，接種細胞十瓶),培養體系均為40ml。培養細胞所用完全培養基為無酚紅dmem/df12和體積比濃度為10％胎牛血清，接種細胞瓶為t-175培養瓶。細胞接種完成，放于二氧化碳培養箱培養，溫度37℃，二氧化碳體積比濃度5％；
(2)培養30小時,此時第一批次細胞融合度達到75％時，見(圖1)，以生理鹽水清洗細胞2次，每瓶用40ml復方電解質注射液進行饑餓培養；
(3)饑餓培養18小時后，第一批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(4)取培養的第二批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第二批次細胞2次，每瓶用步驟(3)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(5)饑餓培養18小時后，第二批次細胞融合度達95％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清放于4℃備用；
(6)取培養的第三批次細胞，此時細胞融合度達到70％，以生理鹽水清洗第三批次細胞2次，每瓶用步驟(5)中細胞培養上清40ml進行饑餓培養；
(7)饑餓培養24小時后，第三批次細胞融合度達90％，收取細胞培養上清，4000g條件下離心8min除去沉淀，取離心后上清,得到高濃度間充質干細胞提取物；
(8)高濃度間充質干細胞提取物與身體霜基礎配方液按照質量比1:80配比得到身體霜。
身體霜基礎配方液為：
制備的基于細胞饑餓培養的活性細胞因子的身體霜可用于皮膚的修復、保濕以及促進皮膚的新陳代謝解決各種皮膚問題。
例1，向xx，女性，47歲，由于平時只注重臉部保養，而忽視了身體的護理，導致皮膚干燥，頸部有幾條比較淡的小細紋，經朋友介紹使用了這款身體霜，使用一個月后，小細紋明顯變淡，皮膚干燥問題得到解決，連續使用三個月以后頸紋淡到幾乎看不到。
例2，游xx，女性，32歲，由于剛剛生完二胎，腹部妊娠紋特別明顯，而且面積較大，分布不均。修完產假出來工作時正好為夏天，由于日曬的因素更加重了妊娠斑的顏色，開始使用各種大牌子的美白產品，效果甚微。偶然的機會了解了本款產品，抱著試試看的態度使用大約5周，妊娠斑明顯變淡。大約兩個月后妊娠斑幾乎消失。
綜上所述，本發明的內容并不局限在上述的實施例中，相同領域內的有識之士可以在本發明的技術指導思想之內可以輕易提出其他的實施例，但這種實施例都包括在本發明的范圍之內。