本發(fā)明涉及一種具有解酒保肝作用的中藥組合物及其制備方法。
背景技術：
中國是酒生產(chǎn)消費大國，每年消費酒類飲料達2000余萬噸，嗜酒或酒精依賴人群2億左右，急慢性酒精中毒率日益增高。
酒精中毒主要是由酒中的主要成分乙醇及其代謝絮亂引起的。肝臟是乙醇代謝的主要場所。乙醇進入肝臟后，首先由乙醇脫氫酶(adh)代謝生成乙醛，繼而由乙醛脫氫酶(aldh)代謝成為乙酸，最后分解為二氧化碳和水。在乙醛的代謝過程中，aldh起著很重要的作用，但在人體中具有氧化作用的只有aldh1和aldh2兩種同工酶，其中aldh2是aldh中生理活性最強的一種同工酶。據(jù)資料顯示，50％中國人缺乏aldh2，飲酒后極易造成乙醛濃度增高及蓄積，使肝細胞膜抗原發(fā)生改變、肝細胞代謝紊亂，產(chǎn)生自由基和脂質過氧化物等。體內不能產(chǎn)生正常的乙醛脫氫酶是引起中國人急性酒精中毒和酒精性肝病的主要原因之一。
目前，市場上的解酒藥按功效主要可以分為三類。第一類是酒精吸收抑制劑，以乙醇脫氫酶為主要成分，將酒精在胃腸道內代謝掉。這類解酒藥的特點是在酒前服用以減少進入血液內的酒精量，酒后服用則不能清除乙醇及其代謝產(chǎn)物乙醛。第二類為保肝類藥物，主要是針對肝臟系統(tǒng)有保護作用，而對其他系統(tǒng)，如心血管系統(tǒng)，沒有明顯的保護作用。第三類是興奮劑型，該藥進入機體產(chǎn)生類皮質激素應激效應，中和酒精對中樞神經(jīng)的抑制作用，達到醒酒的目的，但這類解酒藥僅治標不治本，長期使用還會對人體中樞神經(jīng)造成傷害。此外，這三種解酒藥都沒有治療酒精過敏的功效。因此，研制一種符合中國人體質特點的、作用全面的、副作用少的快速解酒護肝藥具有重要的社會意義和經(jīng)濟價值。
技術實現(xiàn)要素：
為克服以上缺陷，本發(fā)明提供了一種具有提高乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶活性以解酒保肝的組合物及其制備方法。
本組合物按重量份計主要由葛根10-15份、枳椇子10-15份、山楂4-8份、菊花4-8份和木糖醇19-30份制成。
優(yōu)選配比為，葛根10份、枳椇子10份、山楂6份、菊花5份、木糖醇19份。
所述組合物的制備方法，包括以下步驟：取原料葛根、枳椇子、山楂和菊花，按料液比1g：5～10ml，加入水或50％～95％乙醇回流提取，提取液制成浸膏粉，粉碎后加入木糖醇，制成食品或適合于口服的藥物制劑。
食品可制成果凍、茶劑或飲料；藥物制劑可制成沖劑、膠囊、顆粒、咀嚼片、片劑或口服液體制劑。
所述組合物也可用于制備提高乙醛脫氫酶活性、抑制酒精引起谷丙轉氨酶或谷丙轉氨酶異常升高的藥物或食品中的應用。
本發(fā)明的中藥組合物，通過各組份協(xié)同發(fā)揮顯著的解酒保肝作用，提高小鼠肝組織中乙醇脫氫酶(adh)和乙醛脫氫酶(aldh)的活性，降低血清中乙醇和乙醛的濃度，減輕酒精所致的肝損傷。所用原料既是食品又是中藥材或食品添加劑，安全易得且價格低廉。可用于制備提高乙醇脫氫酶和乙醛脫氫酶活性以解酒保肝的藥物或保健食品，用于急性酒精性肝損害的預防和治療。
具體實施方式
下面結合實施例對本發(fā)明做進一步的說明。
各實施例中所涉及的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt、vol/vol、wt/vol計算，除非另有說明。
實施例1：本發(fā)明組合物解酒保肝作用研究
1、材料
1.1實驗動物
spf級雄性昆明小鼠，體質量18～20g，由廣東省醫(yī)學實驗動物中心提供，合格證號：scxk(粵)2013-0002。
1.2藥物與試劑
本發(fā)明組合物的制備，取葛根100g、枳椇子100g、山楂60g、菊花50g、木糖醇190g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，每次1小時，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉，干燥粉碎后再加入木糖醇，混勻。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為650mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人5g生藥量/天，生藥量是指葛根、枳椇子、山楂、菊花、木糖醇的總量。
葛根提取物：取葛根100g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為130mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人1g生藥量/天。
枳椇子提取物：取枳椇子100g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為130mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人1g生藥量/天。
山楂提取物：取山楂60g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為78mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人0.60g生藥量/天。
菊花提取物：取菊花50g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為65mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人0.5g生藥量/天。
木糖醇：實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為247mg/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人1.9g/天。
對比組合物1：取葛根100g、枳椇子100g、山楂60g、菊花50g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，每次1小時，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為403mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人3.1g生藥量/天，生藥量是指葛根、枳椇子、山楂、菊花的總量。
對比組合物2：取葛根100g、枳椇子100g、山楂60g、菊花50g、l-丙氨酸30g、l-谷氨酰胺40g，加入8倍體積50％乙醇回流提取兩次，每次1小時，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉，粉碎后再加入l-丙氨酸和l-谷氨酰胺，混勻。實驗時用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量650mg生藥量/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人5g生藥量/天，生藥量是指葛根、枳椇子、山楂、菊花、l-丙氨酸和l-谷氨酰胺的總量。
陽性對照(pepp清醒咀嚼片)：購自山德士公司。取pepp清醒咀嚼片，碾碎，用生理鹽水配制成相應濃度的溶液供小鼠灌胃使用。小鼠給藥劑量為8320mg/kg，按體表面積換算，相當于70kg的成年人64g/天(相當于臨床等效劑量的8倍)。
56度紅星二鍋頭(北京紅星股份有限公司)；無水乙醇(天津市大茂化學試劑廠)；40％乙醛(成都科龍化工試劑廠)；丁酮(天津市百世化工有限公司)；乙醇脫氫酶(adh)和乙醛脫氫酶(aldh)試劑盒(南京建成生物工程有限公司)；谷丙轉氨酶(alt)試劑盒和谷草轉氨酶(ast)試劑盒(南京建成生物工程有限公司)；生理鹽水(昆明市宇斯藥業(yè)有限公司)
1.3主要儀器
氣相色譜儀：variancp-3800；工作站：ctcanalytic；色譜柱：cp-wax52cb、cpsil5cb-2毛細管柱；檢測器：fid檢測器；北京uv-1普析通用紫外分光光度計。
2、方法
取spf級健康昆明種小鼠隨機分為11組：正常對照組、模型對照組，本發(fā)明組合物組、葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組、對比組合物1組、對比組合物2組、陽性對照組，每組12只。各組動物灌胃給藥，空白對照組、模型對照組給等體積蒸餾水，1次/d。每次給藥后1h，除空白對照組外的其余各組小鼠按0.12ml/10g灌胃給予56度紅星二鍋頭造成急性酒精性肝損傷模，連續(xù)給藥和造模6d。最后一次造模后1.5h，各組摘眼球取血0.5～1ml，3000rpm離心10min分離血清，采用氣相色譜儀測定血清中乙醇和乙醛的濃度，按照試劑盒操作方法測定血清ast和alt活性。摘眼球取血后，立即頸椎脫臼處死小鼠，取新鮮肝臟0.5g加入預冷的生理鹽水溶液制成10％肝組織勻漿，3000rpm離心10min，取上清測定adh和aldh活性。
統(tǒng)計學處理方法采用spss13.0統(tǒng)計軟件，數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標準差
3、結果
3.1本發(fā)明組合物對小鼠血清中乙醇和乙醛濃度的影響
由表1可見，與正常對照組比較，模型組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本造模方法能成功引起小鼠血清中乙醇和乙醛濃度顯著升高。
與模型對照組比較，本發(fā)明組合物組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本發(fā)明組合物能顯著抑制乙醇的吸收或促進乙醇的代謝、減少乙醛的蓄積。與模型對照組比較，對比組合物1組、對比組合物2組、陽性對照組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)；而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度與模型對照組差異不顯著，不具有統(tǒng)計學意義(p>0.05)，說明對比組合物1、對比組合物2、陽性對照能顯著抑制乙醇的吸收或促進乙醇的代謝、減少乙醛的蓄積，而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇未能顯著抑制乙醇的吸收或促進乙醇的代謝，不能減少乙醛的蓄積。
與本發(fā)明組合物組比較，葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組、對比組合物1組、對比組合物2組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度顯著較高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)；陽性對照組的小鼠血清中乙醇和乙醛濃度與本發(fā)明組合物組差異不顯著(p>0.05)，說明本發(fā)明組合物在抑制乙醇吸收或促進乙醇代謝、減少乙醛的蓄積方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2，與陽性對照相當。
3.2本發(fā)明組合物對小鼠血清ast和alt活性的影響
由表2可見，與正常對照組比較，模型組的小鼠血清ast和alt活性顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本造模方法能成功造成小鼠肝功能損害。
與模型對照組比較，本發(fā)明組合物組的小鼠血清ast和alt活性顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本發(fā)明組合物能顯著抑制酒精引起的肝功能損害。與模型對照組比較，對比組合物1組、對比組合物2組、陽性對照組的小鼠血清中ast和alt活性顯著降低，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)；而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組的小鼠血清中ast和alt活性與模型對照組差異不顯著，不具有統(tǒng)計學意義(p>0.05)，說明對比組合物1、對比組合物2、陽性對照能顯著抑制酒精引起的肝功能損害，而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇不能顯著抑制酒精引起的肝功能損害。
與本發(fā)明組合物組比較，葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組、對比組合物1組、對比組合物2組、陽性對照組的小鼠血清ast和alt活性明顯較高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)，說明本發(fā)明組合物在抑制酒精引起的肝功能損害方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2和陽性對照。
3.3本發(fā)明組合物對小鼠肝臟中adh和aldh活性的影響
由表3可見，與正常對照組比較，模型組的小鼠肝臟中adh和aldh活性顯著下降，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本造模方法能成功造成小鼠肝臟對乙醇和乙醛的代謝能力下降。
與模型對照組比較，本發(fā)明組合物組的小鼠肝臟中adh和aldh活性顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.01)，說明本發(fā)明組合物能顯著提高肝臟中adh和aldh活性，顯著促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝。與模型對照組比較，對比組合物1組、對比組合物2組的小鼠肝臟中adh和aldh活性顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)；而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組、陽性對照組的小鼠肝臟中adh和aldh活性與模型對照組差異不顯著，不具有統(tǒng)計學意義(p>0.05)，說明對比組合物1、對比組合物2能顯著提高肝臟中adh和aldh活性，顯著促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝，而葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、陽性對照不能顯著提高肝臟中adh和aldh活性，不能顯著促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝。
與本發(fā)明組合物組比較，葛根提取物組、枳椇子提取物組、山楂提取物組、菊花提取物組、木糖醇組、對比組合物1組、對比組合物2組和陽性對照組的小鼠肝臟中adh和aldh活性明顯較低，差異具有統(tǒng)計學意義(p<0.05或p<0.01)，說明本發(fā)明組合物在提高肝臟中adh和aldh活性、促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2和陽性對照。
表1小鼠血清中乙醇、乙醛含量
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，#p<0.05，##p<0.01；與本發(fā)明組合物組相比，△p<0.05，△△p<0.01。
表2小鼠血清ast和alt活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，#p<0.05，##p<0.01；與本發(fā)明組合物組相比，△p<0.05，△△p<0.01。
表3小鼠肝組織adh和aldh活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，#p<0.05，##p<0.01；與本發(fā)明組合物組相比，△p<0.05，△△p<0.01。
4、總結
在本實施例的劑量下，本發(fā)明組合物能顯著抑制乙醇的吸收或促進乙醇的代謝、減少乙醛的蓄積，且本發(fā)明組合物在抑制乙醇吸收或促進乙醇代謝、減少乙醛的蓄積方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2，與陽性對照相當；本發(fā)明組合物能顯著抑制酒精引起的肝功能損害，且本發(fā)明組合物在抑制酒精引起的肝功能損害方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2和陽性對照；本發(fā)明組合物能顯著提高肝臟中adh和aldh活性，促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝，且本發(fā)明組合物在提高肝臟中adh和aldh活性、促進肝臟對乙醇和乙醛的代謝方面，要優(yōu)于葛根提取物、枳椇子提取物、山楂提取物、菊花提取物、木糖醇、對比組合物1、對比組合物2和陽性對照。
實施例2不同提取方法藥效比較
取四味藥材與木糖醇。藥材分成5份，每份葛根100g、枳椇子100g、山楂60g、菊花50g，分別采用8倍量的水、25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇回流提取，均分別提取兩次，每次1小時，過濾，合并兩次濾液，濃縮，加入糊精制成浸膏粉，干燥粉碎后再加入190克木糖醇，混勻。備用，按照實施例2的實驗方法進行實驗。設正常對照組、模型對照組、水、25％乙醇、50％乙醇、75％乙醇、95％乙醇提取樣品組。
結果表明采用水提與醇提取，對作用效果沒有顯著影響。結果如下：
表4小鼠血清中乙醇、乙醛含量
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01。
表5小鼠血清ast和alt活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01。
表6小鼠肝組織adh和aldh活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01。
實施例3不同原料配比的藥效比較
取四味藥材與木糖醇。分成三份：①為葛根100g、枳椇子100g、山楂40g、菊花40g、木糖醇300克；②為葛根150g、枳椇子150g、山楂80g、菊花80g、木糖醇250克；③為葛根100g、枳椇子100g、山楂60g、菊花50g、木糖醇190克。分別采用述實施例2與實施例3的方法處理，作為供試樣品。按照實施例2的實驗方法進行實驗。設正常對照組、模型對照組、①、②、③提取樣品組。樣品的給藥量按生藥量折算均同前。
結果表明采用水提與醇提取，各樣品均有較好保肝解酒效果。但是，從數(shù)據(jù)上比較，③提取樣品組，即當葛根10份，枳椇子10份，山楂6份，菊花5份，木糖醇19份時，效果較優(yōu)，尤其是在提高肝組織adh和aldh活性方面，與③提取樣品組比較，①提取樣品、②提取樣品組adh和aldh活性較低，具有統(tǒng)計學差異(p<0.05或p<0.01)，說明①、②、③提取樣品組中，③提取樣品的解酒保肝作用較強。結果如下：
表7小鼠血清中乙醇、乙醛含量
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01。
表8小鼠血清ast和alt活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01。
表9小鼠肝組織adh和aldh活性
注：與正常對照組相比，**p<0.01；與模型對照組相比，##p<0.01；與③提取組相比，△p<0.05，△△p<0.01。