本發(fā)明屬于茶多酚納米乳材料研究技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種復(fù)方茶多酚納米乳及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

茶多酚，是茶葉中所有含多羥基酚類化合物的總稱,是茶葉的主要有效成分，占茶葉干重20％～30％。茶多酚具有清除自由基、抗衰老、抗腫瘤、降血脂、抑菌、美容等多種生理功能和功效，但茶多酚為水溶性，其脂溶性較差且極不穩(wěn)定，生物利用度低，易被氧化，限制了其生理功效不能充分發(fā)揮及在食品和醫(yī)藥等行業(yè)的應(yīng)用。

納米乳，也稱微乳。它是一個由油相、水相、表面活性劑、無水乙醇四部分組成的，粒徑在10-100nm范圍，液滴多為球形，大小均勻，透明或半透明、熱力學穩(wěn)定、各向同性、熱壓滅菌和高速離心穩(wěn)定、不分層的膠體分散系統(tǒng)。納米乳作為一種新型載體，具有良好的穩(wěn)定性和滲透性、黏度低、易于制備和保存等優(yōu)點，能提高受試物的穩(wěn)定性、分散性和溶解度，起到緩釋和靶向作用，已廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、美容、化工和農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域，其可分為油包水型(waterinoil,w/o)和水包油型(oilinwater,o/w)。其中，w/o型納米乳可以增加水溶性包裹物質(zhì)的脂溶性及穩(wěn)定性。

因此，本發(fā)明首次提出了茶多酚納米乳的概念，并進一步為了提高其抗氧化性，特開發(fā)了w/o型復(fù)方茶多酚納米乳。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷與不足，本發(fā)明的目的之一在于提供一種脂溶性、性質(zhì)穩(wěn)定、粒徑小于100nm、抗氧化性增強的w/o型復(fù)方茶多酚納米乳。

同時，本發(fā)明還提供了上述復(fù)方茶多酚納米乳的制備方法和應(yīng)用。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

該復(fù)方茶多酚納米乳，其按照以下質(zhì)量配比的原料制成：

茶多酚1％-20％

石榴皮多酚1％-15％

復(fù)合表面活性劑15％-50％

無水乙醇1％-15％

油10％-25％

其余成分為去離子水

上述原料的質(zhì)量百分比之和為100％。

上述復(fù)方茶多酚納米乳中還包括蘋果多酚，其所占質(zhì)量比為1％-15％。

上述復(fù)方茶多酚納米乳原料的優(yōu)選質(zhì)量配比如下：

茶多酚占10％-20％

石榴皮多酚1％-5％

蘋果多酚1％-5％

復(fù)合表面活性劑15％-27％

無水乙醇5％-10％

油15％-20％

其余成分為去離子水

上述原料的質(zhì)量百分比之和為100％。

進一步限定，所述復(fù)合表面活性劑為大豆卵磷脂、tween80、聚氧乙烯20、聚山梨酯、單硬脂酸甘油酯中的任意一種與span80混合而成的混合物，并且按照2:1～5:1比例混合。

進一步限定，所述油是食品級液體石蠟、大豆油、花生油、菜籽油、橄欖油、肉豆蔻酸異丙酯中的任意一種或任意比例的混合。

進一步限定，所述復(fù)方茶多酚納米乳是w/o型，其粒徑是介于40.07～60.4nm之間,平均粒徑為44.5nm，乳包封率是96％～98％，粘度是236.39～412.9。

上述的復(fù)方茶多酚納米乳的制備方法是將復(fù)合表面活性劑、無水乙醇與油按照比例混合，在室溫下緩慢攪拌，待成分混勻后，向體系中逐滴添加茶多酚、石榴多酚和去離子水，攪拌混勻，靜置至溶液澄清不變，得到復(fù)方茶多酚納米乳。

上述的復(fù)方茶多酚納米乳作為抗氧化劑在保健品方面的應(yīng)用。

上述的復(fù)方茶多酚納米乳作為抗氧化劑在美容產(chǎn)品方面的應(yīng)用。

本發(fā)明提供的復(fù)方茶多酚納米乳制備方法簡單，將茶多酚與石榴皮多酚復(fù)配，使其產(chǎn)生協(xié)同效果，所形成的納米乳乳滴顆粒小、分布均勻、粘度小、流動性好，大大提高茶多酚在食品和藥物制劑中的穩(wěn)定性，擴充其使用范圍，原料無毒性，安全，無刺激，同時本發(fā)明的茶多酚納米乳分布均勻，體系透明、穩(wěn)定性好，平均粒徑為44.5nm，形成的復(fù)方茶多酚納米乳含茶多酚達4.8％以上，此外通過加入石榴皮多酚，使得本復(fù)方納米乳的抗氧化性更顯著及持久，是水溶液狀態(tài)的2.78倍，而且脂溶性更好，適于在食品、醫(yī)藥、美容、等領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。

附圖說明

圖1為不同濃度的復(fù)方茶多酚納米乳的顏色對比圖。

圖2為經(jīng)蘇丹紅和亞甲基藍染色后的復(fù)方茶多酚納米乳對比圖。

圖3為經(jīng)水相和油相稀釋后復(fù)方茶多酚納米乳對比圖。

圖4為復(fù)方茶多酚納米乳微觀結(jié)構(gòu)。

圖5為復(fù)方茶多酚納米乳的粒徑分布圖。

圖6為茶多酚水溶液和納米乳的色度對比圖。

圖7為茶多酚水溶液和納米乳的抗氧化性對比圖。

圖8為茶多酚水溶液或/和石榴多酚水溶液及二者的納米乳對dpph自由基的清除率對比圖。

具體實施方式

現(xiàn)結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進行進一步說明，而且本發(fā)明不僅限于下述的實施情形。

本發(fā)明的復(fù)方茶多酚納米乳由以下方法制備：

將復(fù)合表面活性劑、無水乙醇以及油相按照比例添加進燒杯，并在室溫(25℃)條件下緩慢進行攪拌，待成分混勻后，向體系中逐滴地添加配方量的茶多酚、石榴多酚和去離子水，攪拌混勻后，靜置，待溶液澄清不變，得到復(fù)方茶多酚納米乳。

其中，茶多酚1％-20％，石榴皮多酚1％-15％，復(fù)合表面活性劑15％-50％，無水乙醇1％-15％，油10％-25％，余量為去離子水，總量為100％。

還可以在添加茶多酚和石榴多酚時，在配方中添加1～15％的蘋果多酚，蘋果多酚的加入進一步提高復(fù)方茶多酚納米乳的抗氧化性。

復(fù)合表面活性劑選用是大豆卵磷脂、tween80、聚氧乙烯20、聚山梨酯、單硬脂酸甘油酯中的任意一種與span80按照體積比為2～5：1的比例混合所形成的混合物。

無水乙醇選用無水乙醇。

上述的油選用食品級液體石蠟、大豆油、花生油、菜籽油、橄欖油、肉豆蔻酸異丙酯中的任意一種或任意比例的混合。

實施例1

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚15％，石榴皮多酚5％，復(fù)合表面活性劑20％，無水乙醇10％，肉豆蔻酸異丙酯20％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由tween80和span80按照體積比為2:1的比例混合形成。

實施例2

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚10％，石榴皮多酚3％，復(fù)合表面活性劑27％，無水乙醇5％，肉豆蔻酸異丙酯15％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由聚氧乙烯20和span80按照體積比為3:1的比例混合形成。

實施例3

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚20％，石榴皮多酚1％，蘋果多酚1％，復(fù)合表面活性劑15％，無水乙醇10％，橄欖油20％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由聚山梨酯和span80按照體積比為4:1的比例混合形成。

實施例4

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚1％，石榴皮多酚15％，蘋果多酚15％，復(fù)合表面活性劑15％，無水乙醇1％，大豆油和橄欖油混合油15％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由大豆卵磷脂和span80按照體積比為2:1的比例混合形成。

其中，大豆油和橄欖油的混合體積比為1:2。

實施例5

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚15％，石榴皮多酚10％，蘋果多酚10％，復(fù)合表面活性劑20％，無水乙醇5％，液體石蠟和花生油的混合10％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由單硬脂酸甘油酯和span80按照體積比為5:1的比例混合形成。

其中，液體石蠟是食品級液體石蠟，其與花生油的混合體積比為2:1。

實施例6

本實施例的復(fù)方茶多酚納米乳的原料配比(wt％)是：茶多酚18％，石榴皮多酚5％，蘋果多酚5％，復(fù)合表面活性劑50％，無水乙醇1％，肉豆蔻酸異丙酯和花生油的混合10％，余量為去離子水，總量為100％。

其中復(fù)合表面活性劑是由大豆卵磷脂和span80按照體積比為2:1的比例混合形成。

其中，肉豆蔻酸異丙酯和花生油的體積比為10:1。

以人肝細胞hl-7702為模型，運用高效液相色譜儀(hplc)分析比較hl-7702細胞分別對茶多酚水溶液及茶多酚納米乳以及復(fù)方茶多酚納米乳的吸收率，分別將同濃度茶多酚水溶液和茶多酚納米乳、復(fù)方茶多酚納米乳與hl-7702細胞在37℃，5％co2培養(yǎng)箱內(nèi)共培養(yǎng)24小時后，以茶多酚主要成分兒茶素為檢測對象。

經(jīng)hplc檢測后結(jié)果顯示，與復(fù)方茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度是茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度的1～2倍，而與茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度又是與茶多酚水溶液共培養(yǎng)細胞內(nèi)的3～4倍。

結(jié)果說明，體細胞對復(fù)方茶多酚納米乳具有更好的吸收率。此外，運用dpph法分析比較了茶多酚及茶多酚納米乳、復(fù)方茶多酚納米乳的抗氧化性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，復(fù)方茶多酚納米乳對dpph自由基清除率是單獨茶多酚水溶液的2.78倍。

因此，也可以說明復(fù)方茶多酚納米乳可以作為抗氧化劑在保健品和美容產(chǎn)品方面應(yīng)用，可以作為保健品和美容產(chǎn)品的有效成分，提高保健品或美容產(chǎn)品的抗氧化性能，同時，大大提高人體細胞吸收率，增強保健或美容效果。

為了驗證本發(fā)明的復(fù)方茶多酚納米乳的有益效果，發(fā)明人做了大量的實驗進行驗證，現(xiàn)以下述實驗為例進行說明。

1、茶多酚納米乳及復(fù)方茶多酚納米乳制備

將復(fù)合表面活性劑，無水乙醇，油相按比例添加進燒杯，并在室溫(25℃)條件下緩慢進行攪拌，待成分混勻后，向體系中逐滴地添加去離子水，待溶液澄清不變，便得到透明的空白納米乳試劑。之后再用不同比例茶多酚和石榴多酚水溶液替代去離子水，制備成w/o型復(fù)方茶多酚納米乳，復(fù)方茶多酚納米乳如圖(1)所示。

由圖1可知，茶多酚納米乳呈淡黃色，從左到右隨著茶多酚濃度增加，納米乳顏色變深。

通過測定包封率、粘度、ph評價本發(fā)明復(fù)方茶多酚納米乳質(zhì)量，本發(fā)明復(fù)方茶多酚納米乳包封率是96～98％，粘度是236.39-412.9(空白納米乳粘度233.87)，ph值為6.9～7.2(空白納米乳ph值為7)。

2、w/o型茶多酚納米乳鑒定

2.1染色法判斷納米乳的類型

亞甲基藍是水溶性染料呈藍色，易在水相中擴散；蘇丹紅是油溶性染料呈紅色，易在油相中擴散。根據(jù)亞甲基藍和蘇丹紅在納米乳中擴散快慢可以判斷納米乳的類型。在納米乳中，若藍色染料擴散比紅色染料快則為o/w型納米乳，反之則為w/o型納米乳，若兩者擴散一樣快則為雙連續(xù)相。本發(fā)明茶多酚納米乳分別經(jīng)蘇丹紅和亞甲基藍染色后如2所示。

由圖2可知，蘇丹紅溶液(圖2左)在茶多酚納米乳中的擴散速度明顯高于亞甲基藍溶液(圖2右)在茶多酚納米乳中的擴散速度，說明茶多酚納米乳溶液是w/o型的。

2.2稀釋法判斷納米乳的類型

將納米乳分別用水相和油相稀釋，若能被大量水相稀釋無分層且保持透明態(tài)則為o/w型納米乳；若被大量油相稀釋無分層且保持透明態(tài)則為w/o型納米乳。茶多酚納米乳經(jīng)水相和油相稀釋后如圖3所示。

由圖3可知，水相稀釋的茶多酚納米乳溶液(圖3左)出現(xiàn)了明顯的分層，而用油相稀釋的茶多酚納米乳溶液(圖3右)則沒有此現(xiàn)象，據(jù)此可以判斷茶多酚納米乳溶液是w/o型。

3、茶多酚納米乳微觀結(jié)構(gòu)及粒徑檢測

分被采用透射電子顯微鏡和激光粒度儀檢測茶多酚納米乳微觀結(jié)構(gòu)和粒徑。結(jié)果如圖4,5所示。

經(jīng)透射電子顯微鏡檢測后(圖4)，液滴呈類球形，分散性好，無粘連。經(jīng)激光粒度分析儀檢測(圖5)其直徑分布在40.07～60.4nm之間,平均粒徑為44.5nm。

4、光穩(wěn)定性試驗

將適量制備好的茶多酚納米乳裝入透明好的無色、透明小玻璃瓶中，密封，放置于正常光照條件下30小時后，觀察是否出現(xiàn)分層、渾濁或晶體析出等不穩(wěn)定現(xiàn)象，并用色度儀測定其l(亮度)、a(紅-綠)、b(黃-藍)值。結(jié)果如圖6所示。

由圖6對比可知，放置30小時后，各水溶液和納米乳均未出現(xiàn)分層、渾濁或晶體析出。茶多酚納米乳的l、a、b值下降值均小于茶多酚水溶液，且復(fù)配石榴多酚后，下降值更小。茶多酚水溶液為黃色，光照后會被光解，黃色變淺，b值下降劇烈，制備為納米乳后b值下降值減小，說明茶多酚納米乳較茶多酚水溶液光穩(wěn)定性好。

5、抗氧化性實驗

5.1hl-7702人肝細胞內(nèi)兒茶素濃度

通過測定hl-7702人肝細胞內(nèi)兒茶素濃度，分析比較茶多酚水溶液、茶多酚納米乳以及復(fù)方茶多酚納米乳的吸收率，試驗結(jié)果如圖7所示。

從圖7可知，與復(fù)方茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度是茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度的1～2倍，而與茶多酚納米乳共培養(yǎng)的hl-7702細胞內(nèi)兒茶素濃度又是與茶多酚水溶液共培養(yǎng)細胞內(nèi)的3～4倍。

以上結(jié)果說明，肝細胞對復(fù)方茶多酚納米乳具有更好的吸收率。

5.2對dpph自由基的清除率

通過測定對dpph自由基的清除率，分析比較茶多酚水溶液或/和石榴多酚水溶液及二者納米乳的抗氧化能力，試驗結(jié)果如圖8所示。

從圖8可知，茶多酚水溶液和納米乳可有效清除dpph自由基，且茶多酚納米乳對dpph自由基清除率是茶多酚水溶液的2.78倍。復(fù)配石榴多酚后均可增加茶多酚水溶液和納米乳的抗氧化性。

以上結(jié)果說明，復(fù)方茶多酚納米乳較茶多酚水溶液具有更強的抗氧化性。