專利名稱：肽合成的新偶聯(lián)劑的制作方法
政府支持本項(xiàng)工作受到國家衛(wèi)生研究院基金GM-09706和國家科學(xué)基金(CHE-9003190)的支持。政府對(duì)本發(fā)明享有一定權(quán)利。
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及影響酰胺形成，特別是肽合成中的酰化步驟的新方法。
現(xiàn)有技術(shù)描述多肽，特別是蛋白質(zhì)在活細(xì)胞的基礎(chǔ)生化過程中起重要作用。由蛋白質(zhì)構(gòu)成的酶催化生化反應(yīng)，包括代謝反應(yīng)。這些蛋白質(zhì)是手性分子，可能經(jīng)常存在的各種立體異構(gòu)體中，其中一種通常是最有效的。
此外，多肽也用作藥物。近年來，發(fā)現(xiàn)多肽可用于抵御各種疾病，包括癌癥、糖尿病、植物毒素等。另外，肽顯示出作為生長促進(jìn)劑、抑制劑、抗生素、殺蟲劑、避孕藥、抗高血壓藥、安眠藥、抗抑郁藥、鎮(zhèn)痛藥等的特定活性。
蛋白質(zhì)合成始終是化學(xué)家所面臨的挑戰(zhàn)。然而，化學(xué)合成可提供遺傳工程或其它生物方法，例如分離天然蛋白質(zhì)所不具有的優(yōu)勢(shì)。首先，化學(xué)合成可用于確定蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)。此外，蛋白質(zhì)合成對(duì)于合成類似物是必需的。這使得科學(xué)家能評(píng)估與分子結(jié)構(gòu)相關(guān)的生物活性和/或藥理作用。
肽化學(xué)合成的成功部分取決于使用合適的偶聯(lián)劑與合適的保護(hù)基團(tuán)。特別是在肽合成中，兩個(gè)氨基酸之間形成肽鍵需要在反應(yīng)開始之前活化其中一個(gè)氨基酸的羧基。然而，與偶聯(lián)反應(yīng)相關(guān)聯(lián)的活化步驟導(dǎo)致在被活化的羧基處喪失構(gòu)型的嚴(yán)重問題。因此，設(shè)計(jì)肽的化學(xué)合成的目標(biāo)是提供良好產(chǎn)率并保持羧基部分的構(gòu)型完整性，即外消旋化最低的肽產(chǎn)物。由于最佳方法需要將酸轉(zhuǎn)化為攜帶良好離去基團(tuán)的衍生物，因此難以同時(shí)實(shí)現(xiàn)良好的產(chǎn)量和最低或沒有外消旋化。所以在常規(guī)偶聯(lián)條件下，構(gòu)型會(huì)喪失。
此外，當(dāng)前的合成方法也易于發(fā)生降低產(chǎn)率的副反應(yīng)。
當(dāng)前通過傳統(tǒng)或各種重復(fù)方法在溶液中合成肽。或者可在固體載體上合成肽(Merrifield方法)。這些都是通常的技術(shù)，從偶聯(lián)兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸來合成肽，從偶聯(lián)氨基酸與較小的肽或偶聯(lián)較小的肽來合成較大的肽。溶液方法具有易于監(jiān)測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，從而可在任何階段純化中間體(如果需要的話)。然而，其主要缺點(diǎn)在于相對(duì)較慢的合成速度以及每步需手工操作。
Merrifield方法的優(yōu)點(diǎn)是易于自動(dòng)化，從而可進(jìn)行無人的、計(jì)算機(jī)控制的機(jī)器合成。不幸的是，由于在其上進(jìn)行合成的載體的不可溶性質(zhì)使得該方法有固有的缺陷。除非每一酰化步驟以約100％的效率發(fā)生，混合物不可避免地會(huì)累積于聚合物上。鏈越長越可能被不利的副反應(yīng)所污染。在這種反應(yīng)中產(chǎn)生的副產(chǎn)物持續(xù)污染所需產(chǎn)物直至其在循環(huán)結(jié)束時(shí)從聚合基質(zhì)上除去。這些現(xiàn)有技術(shù)不能用于制備大于40-50個(gè)殘基的肽；當(dāng)合成較大的肽時(shí)，從所需產(chǎn)物中分離副產(chǎn)物的困難驟增。
因此，就非常長的片段而言(50或更多個(gè)氨基酸)，現(xiàn)有方法不令人滿意。獲得的混合物經(jīng)常具有如此糟糕的復(fù)雜性以至于難于或不能分離所需肽。
如果可發(fā)現(xiàn)基礎(chǔ)氨基酸的合適的衍生物和/或偶聯(lián)反應(yīng)的合適條件，則可解決以上本文列舉的問題。保護(hù)基團(tuán)，例如叔丁氧羰基(t-Boc)或N-α-(9-芴基甲基)氧羰基(Fmoc)用于盡可能減少副反應(yīng)。
最常用的偶聯(lián)試劑是與各種添加劑一起使用的碳二亞胺，例如二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、1-乙基-3-(3’-二甲基氨基丙基)碳二亞胺。
添加劑通常抑制副反應(yīng)并降低外消旋化。迄今為止，在用于肽合成的肽偶聯(lián)過程中最常用的肽偶聯(lián)添加劑是1-羥基苯并三唑(HOBt)。該試劑既可與碳二亞胺也可與其它偶聯(lián)劑聯(lián)用，或者作為獨(dú)立試劑，例如1-苯并三唑基氧三(二甲基氨基)六氟磷酸(BOP)或類似的脲鹽的組成部分。HOBt適用于分步或片段縮合。然而，許多時(shí)候遇到HOBt無效的情況，可能是因?yàn)榘被糠值奈蛔栊?yīng)或堿性弱。由于可能有嚴(yán)重的外消旋化問題，在除甘氨酸或脯氨酸以外的氨基酸單元處的片段偶聯(lián)尤其有問題。相關(guān)的N-羥基苯并三唑酮(HOOBt)可提供抗外消旋化的較好保護(hù)，但由于參與開環(huán)的競(jìng)爭(zhēng)性副反應(yīng)，它極少使用。使用BOP的一個(gè)缺點(diǎn)在于它產(chǎn)生毒性副產(chǎn)物，六甲基磷酸三酰胺。
近來，其它偶聯(lián)劑得到介紹，例如N-[1-H-苯并三唑-1-基](二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨(methanaminium)-六氟磷酸鹽N-氧化物(HBTU)、N-[(1-H-苯并三唑)二甲基氨基]亞甲基]N-甲基甲銨四氟硼酸鹽N-氧化物(TBTU)、O-(苯并三唑-1-基)-1，3-二甲基-1，3-二亞甲基脲六氟磷酸鹽(HBMDU)、O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-雙(四亞甲基)脲六氟磷酸鹽(HBPyU)和O-(苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-雙(五亞甲基)脲六氟磷酸鹽(HBPipU)。
用于肽合成的另一種添加劑是3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-1，2，3-苯并三嗪(HODhbt)。HODhbt已證實(shí)一般優(yōu)于HOBt。此外，使用它可通過酰化完成時(shí)的顏色變化來目測(cè)追蹤反應(yīng)完成。然而，由于固有的副反應(yīng)，HODhbt具有與之相關(guān)的問題。
其它添加劑也適用于肽偶聯(lián)，包括O-(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽、O-(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，1-四甲基脲四氟硼酸鹽和[3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3基]氧]三(吡咯烷基)六氟磷酸鹽。
有助于肽偶聯(lián)的其它試劑也已有描述。例如，Tetrahedron Letters，1994，2279-2282，Carpino等公開了分別命名為HAPyU和AOP的1-羥基-7-氮雜苯并三唑及其相應(yīng)的脲鹽和鹽在固相肽片段偶聯(lián)方法模型中有效促進(jìn)肽偶聯(lián)并避免外消旋化。此外，例如Carpino等，在J.Org.Chem.，1994，59，695-698中公開了命名為HBTU、HATU、HAPyU和HAMDU的氮雜苯并三唑基脲鹽用在肽合成中。
授予Carpino的美國專利號(hào)5,644,029公開了下式所示化合物或其N-氧化物或其鹽等在促進(jìn)肽偶聯(lián)中的應(yīng)用
其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳基環(huán)，其中所述雜芳基環(huán)是含有從3個(gè)到最多總共13個(gè)環(huán)碳原子的含氧、硫或氮的雜芳環(huán)，所述雜芳基可以是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4、CR4R5；R5獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基；X可以是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基；或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代基團(tuán)或當(dāng)n＝0時(shí)，R4和R6結(jié)合在一起，在Y的氮或碳原子和X的氮或碳原子之間形成鍵；Q是(CR8R9)或(NR8)；當(dāng)n＝1時(shí)，R4和R8結(jié)合在一起，在Q的環(huán)碳或氮原子和R8的環(huán)碳或氮原子之間形成鍵；n是0或1；R3是氫低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、 一種帶正電的吸電子基團(tuán)、SO2R14或 R14是低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳基烷基；q是0-3；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳結(jié)合在一起，形成芳環(huán)，AA1是氨基酸，BLK是氨基保護(hù)基團(tuán)，m是0或1。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了其它偶聯(lián)劑，所述偶聯(lián)劑可提供相對(duì)純的產(chǎn)物和少許一起產(chǎn)生副產(chǎn)物(如果有的話)以及最低的外消旋化(如果有的話)。此外，反應(yīng)條件非常溫和并且所用試劑易于制備。因此通過使用本發(fā)明的化合物作為添加劑可提高肽產(chǎn)率并且發(fā)生極少的外消旋化(如果有的話)。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及式I所示化合物及其在肽合成的肽鍵制備中的應(yīng)用，所述化合物如下式所示 或式I所述化合物的N-氧化物或鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有至少1個(gè)最多達(dá)4個(gè)選自氧、氮和硫的雜環(huán)原子并且含有3到最多共13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳基和雜芳基可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)或吸電子基團(tuán)取代；Q是CR8R9或NR8；Y是O、NR4或CR4R5；X是CR6R7或NR6；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基或當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q不存在時(shí)，R4和R6在X和Y之間可形成鍵；或者當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q存在時(shí)，R4和R8可在Y和Q之間形成鍵，或者當(dāng)Q存在時(shí)，R6和R8可在Q和X之間形成鍵；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者當(dāng)Q存在時(shí)，R8與R4結(jié)合在一起，可在Q和Y之間形成鍵，當(dāng)Y是NR4或CR4R5或當(dāng)Q存在時(shí)，R8和R6可在Q和X之間形成鍵；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；或者當(dāng)Q不存在并且Y是NR4或CR4R5時(shí)，R6與R4結(jié)合在一起，可在Y和X之間形成鍵，或者當(dāng)Q存在時(shí)，R6和R8結(jié)合在一起，可在Q和X之間形成鍵；當(dāng)X和Q與Q和Y之間不能同時(shí)具有雙鍵；n是0或1；R3是 或 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基或雜環(huán)基低級(jí)烷基環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基，或者R10和R11可通過S、O、NR30或(CHR30)m組成的橋連基團(tuán)相連，其中R30是低級(jí)烷基或H，m是1-3，從而使得R10和R11與磷原子結(jié)合在一起，形成5或6元環(huán)；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；T是CHR31、O、S或NR31；R31是低級(jí)烷基或H；和Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及式II所示的化合物或其中陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu)的鹽和該化合物或鹽的應(yīng)用
或其N氧化物或式II所述化合物的鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳基環(huán)，其中所述雜芳基含有至少1個(gè)最多4個(gè)選自O(shè)、S和N的環(huán)雜原子并且含有3個(gè)到最多總共13個(gè)環(huán)碳原子，所述雜環(huán)基可以是未取代的或用低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)或吸電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；和R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、BLK1AA1， 或 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基；或R10和R11可任選通過由O、NR30或(CHR30)m構(gòu)成的橋連基團(tuán)T1相連，其中R30是低級(jí)烷基或H，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；T是O、S、NR31或CHR31；R31是H或低級(jí)烷基；和Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；R17是芳基、低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基，AA1是氨基酸或在N-末端少一個(gè)氫原子在C-末端少一個(gè)OH的肽，BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)。此外，本發(fā)明涉及式II所示化合物或當(dāng)R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)時(shí)，其陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu)的鹽在制備肽中的應(yīng)用。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，該方法包括使所述氨基化合物與所述羧酸的酰化衍生物在存在有效量的式I或式II所示化合物或陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu)的鹽時(shí)，在有效形成肽鍵的條件下反應(yīng)。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及從具有游離氨基的有機(jī)胺和羧酸的酰化衍生物的反應(yīng)形成酰胺的方法，該方法包括使所述胺和羧酸的酰化衍生物與有效量的式I或II所示化合物或當(dāng)R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)時(shí)，與陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu)的鹽在有效形成酰胺的條件下反應(yīng)。
本發(fā)明的其它實(shí)施方案涉及合成肽的方法，包括(a)使第一Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸與肽合成樹脂在將氨基酸有效共價(jià)連接至樹脂的條件下反應(yīng)，(b)將保護(hù)基團(tuán)從氨基酸上切除以形成具有游離氨基的胺，(c)在存在肽形成有效量的式I或II所示化合物或陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu)的鹽(當(dāng)R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)時(shí))時(shí)使所述胺與第二Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸反應(yīng)，所述反應(yīng)在肽形成條件下進(jìn)行，(d)重復(fù)步驟(b)和(c)直至獲得所需肽，和(e)從樹脂上取下肽。
發(fā)明詳述本文使用的術(shù)語“式II的鹽”或任何涉及式II的鹽的術(shù)語表示由陰離子和陽離子構(gòu)成的式II的鹽，其中陽離子部分帶正電荷。正電荷可得自式II所示化合物例如在酸的存在下的質(zhì)子化，或可得自R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)。如果涉及到式II的鹽，其中式II所示結(jié)構(gòu)含有帶正電荷的吸電子基團(tuán)，可使用術(shù)語“式II的陽離子”或其等價(jià)術(shù)語。
如上所述，本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案涉及式I或式II所示化合物或其鹽或其N-氧化物或式I的陽離子以及它們?cè)陔呐悸?lián)中的應(yīng)用。換言之，在存在式I或II所示化合物或其鹽或其N-氧化物或式II的陽離子時(shí)，在酰胺形成條件下使各具有游離氨基的第一氨基酸或第一肽與第二氨基酸或第二肽的酰化衍生物偶聯(lián)以形成肽鍵從而形成更大的肽。
本文使用的術(shù)語“雜芳基”是含有至少一個(gè)、最多4個(gè)選自氮、硫和氧的環(huán)雜原子的雜芳基。雜芳基含有5-14個(gè)環(huán)原子、最多總共13個(gè)環(huán)碳原子和總共18個(gè)碳原子。雜芳基可以是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)，但是優(yōu)選雜芳基是雙環(huán)并且特別優(yōu)選單環(huán)。該表達(dá)方式也包括苯并雜環(huán)。所述雜芳基優(yōu)選含有不超過兩個(gè)環(huán)雜原子，最優(yōu)選含有一個(gè)環(huán)雜原子。最優(yōu)選的環(huán)雜原子是氧和氮，最優(yōu)選氮。
如果氮是環(huán)原子，也可形成N-氧化物。本發(fā)明考慮了含有氮的雜芳基的N氧化物。
雜芳基的例子包括噻吩基、苯并噻吩基、1-萘并噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、吲哚基、異吲哚基、吲唑基、嘌呤基、異喹啉基、喹啉基、1，5-二氮雜萘基(napthyridinyl)、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基(pteridinyl)、咔啉基、異噻唑基、異噻唑基等。雜芳基優(yōu)選是吡啶基、吡咯基、呋喃基、吲哚基、喹啉基(quninolyl)、異喹啉基或苯并呋喃基。特別優(yōu)選的是吡啶基。
當(dāng)R1和R2與和它們相連的碳結(jié)合在一起，形成三環(huán)雜芳基時(shí)，則式I或II所示化合物是四環(huán)的；如果當(dāng)R1和R2與和它們相連的碳結(jié)合在一起，形成雙環(huán)雜芳基時(shí)，則式I或II所示化合物是三環(huán)的。最后如果R1和R2的結(jié)合在一起，形成單環(huán)雜芳基時(shí)，式I或II所示化合物是雙環(huán)的。式I或II所示化合物優(yōu)選是三環(huán)，特別是雙環(huán)的。
當(dāng)本文使用的術(shù)語“雜環(huán)基”單獨(dú)使用或與其它基團(tuán)聯(lián)用時(shí)，表示含有至少一個(gè)、最多4個(gè)選自氮、硫和氧的雜原子，5-14個(gè)環(huán)原子和最多共18個(gè)碳原子的雜環(huán)基環(huán)。雜環(huán)基可是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)。它可以是完全飽和的或可以是部分不飽和的，即，它可在環(huán)原子之間含有一個(gè)或多個(gè)雙鍵。雜環(huán)基優(yōu)選含有0、1、2、3或4個(gè)雙鍵。術(shù)語雜環(huán)基也包括本文定義的雜芳基。此外，雜環(huán)基部分優(yōu)選含有不超過兩個(gè)環(huán)雜原子，最優(yōu)選不超過一個(gè)環(huán)雜原子。例子包括四氫呋喃、嗎啉基、哌嗪基、2-四氫喹啉基、3-四氫喹啉基、6-四氫喹啉基或7-四氫喹啉基等。
當(dāng)術(shù)語“低級(jí)烷基”單獨(dú)使用或與其它基團(tuán)聯(lián)用時(shí)，表示含有1-6個(gè)碳原子的碳鏈。它可以是直鏈或支鏈的，包括甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、戊基、己基等。優(yōu)選的低級(jí)烷基含有1-3個(gè)碳原子，最優(yōu)選甲基。
單用或聯(lián)用的本文使用的術(shù)語“芳基”表示含有6-10個(gè)環(huán)碳原子和最多共15個(gè)碳原子的芳環(huán)。包括苯基、α-萘基、β-萘基等。優(yōu)選的芳基是苯基。該術(shù)語不包括雜芳基。
芳烷基是通過亞烷基橋與主鏈相連的芳基。這種基團(tuán)包括芐基、苯乙基等。
“低級(jí)烷基羰基”表示通過羰基與主鏈相連的低級(jí)烷基。類似地，“芳基羰基”指通過羰基與主鏈相連的芳基。
本文使用的“低級(jí)環(huán)烷基”指含有3-10個(gè)碳環(huán)原子和最多共15個(gè)碳原子的環(huán)烷基。環(huán)烷基可以是單環(huán)、雙環(huán)或三環(huán)。例子包括環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、降冰片烷基、金剛烷基、萘烷基等。低級(jí)環(huán)烷基優(yōu)選環(huán)戊基和環(huán)己基。
“低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基”是通過亞烷基橋與主鏈相連的低級(jí)環(huán)烷基。這種基團(tuán)包括環(huán)己基甲基、環(huán)戊基乙基等。
“環(huán)烯基”指含有至少一個(gè)雙鍵和最多6個(gè)碳碳雙鍵的本文所定義的低級(jí)環(huán)烷基。它不是完全芳香族的；但可包括芳香族部分。它可包含一個(gè)環(huán)或稠合到一起的兩個(gè)或多個(gè)環(huán)。雙鍵可位于一個(gè)環(huán)或兩個(gè)環(huán)中。一個(gè)或多個(gè)環(huán)可以是完全芳香族的，而結(jié)構(gòu)中剩余的環(huán)(如果有的話)可各自是完全飽和的或含有1或2個(gè)雙鍵。然而，應(yīng)該注意的是，本文定義的環(huán)烯基不包括芳基。例子包括環(huán)己烯基，環(huán)辛烯基，1-、2-、3-、4-、5-、6-、7-或8-茚滿基等。
本文使用的“供電子基團(tuán)”表示如果處于分子中相同的位置，比氫釋放或提供更多電子的基團(tuán)。參見J.March，《高等有機(jī)化學(xué)》(Advanced OrganicChemistry)，第三版，John Wiley & Sons第237頁，(1985)。這些類型的基團(tuán)是本領(lǐng)域熟知的。例子包括低級(jí)烷基氨基、二低級(jí)烷基氨基、氨基、鹵素、芳基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)芳烷氧基(aralkoxy)、芳氧基(aryloxy)、巰基、低級(jí)烷硫基(alkylthio)等。優(yōu)選的供電子基團(tuán)是氨基、羥基、低級(jí)烷氧基、低級(jí)烷基氨基和二低級(jí)烷基氨基。
本文定義的術(shù)語“吸電子基團(tuán)”指如果處于分子中相同位置比氫原子向自身拉電子更多的基團(tuán)。參見J.March，《高等有機(jī)化學(xué)》(Advanced OrganicChemistry)，第三版，John Wiley & Sons第237頁，(1985)。這些基團(tuán)包括硝基、單鹵代烷基、二鹵代烷基、三鹵代烷基(例如，CF3)、鹵素、甲酰基、低級(jí)烷酰基、低級(jí)烷基磺酰基、低級(jí)烷基亞硫酰基、羧基、低級(jí)烷氧基羰基、亞磺酰氨基、酰氨基、CONR50R51，其中R50和R51獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、環(huán)烯基環(huán)烯基低級(jí)烷基等。
“帶正電荷的吸電子基團(tuán)”是帶有正電荷并與N-氫氧化物(N-O)形成穩(wěn)定的鍵的吸電子基團(tuán)。這些基團(tuán)的類型是本領(lǐng)域熟知的。例子包括脲(uronium)基團(tuán)，例如 亞氨基陽離子，例如 或陽離子，例如 等，其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者如果形成亞氨基陽離子，R18和R20與和它們相連的氮原子和它們之間的碳原子結(jié)合在一起，可形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多5個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)；或者R18和R19與和它們相連的氮原子在一起，或R20和R21與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，可形成含有最多共5個(gè)環(huán)碳原子的5或6元雜環(huán)基環(huán)；或者如果形成脲陽離子，R20和R18可與和它們相連的氮結(jié)合在一起，形成含有最多5個(gè)環(huán)碳原子的5或6元雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R19與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，或R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，可各自同時(shí)形成每個(gè)環(huán)含有最多共5個(gè)環(huán)碳原子的5或6元雜環(huán)基環(huán)。在脲和亞氨基陽離子中，當(dāng)存在R18、R19、R20和R21時(shí)，優(yōu)選它們是相同的。特別優(yōu)選只要存在R18、R19、R20、R21時(shí)均是相同的。還更優(yōu)選與脲、亞氨基和陽離子相關(guān)的形成的環(huán)是5或6元環(huán)。
就陽離子而言，R18和R19和/或R20和R21和/或R22和R23可各自獨(dú)立與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起以形成環(huán)。因此，陽離子可包含一個(gè)環(huán)、兩個(gè)環(huán)或三個(gè)環(huán)。R18和R19、或R20和R21、或R22和R23優(yōu)選是相同的。特別優(yōu)選R18、R19、R20、R21、R22和R23是相同的。
就式II的陽離子而言，優(yōu)選的環(huán)狀脲和亞氨基分別如下式所示 和 其中R19和R20如上定義，n1和n2獨(dú)立為0或1，U1和U2獨(dú)立為O、CH2或NH或N-Alk，其中Alk是低級(jí)烷基。
在以上式中，R18、R19、R20、R21、R22和R23優(yōu)選獨(dú)立為甲基、乙基、正丁基、戊基和-CH2CH2-OCH2CH3。R18、R19、R20(對(duì)全部)和當(dāng)R21存在時(shí)(就亞氨基而言)，與當(dāng)R22和R23(就而言)存在時(shí)，它們優(yōu)選是相同的。
當(dāng)R18、R19、R20、R21存在時(shí)，當(dāng)R22存在時(shí)和當(dāng)R23存在時(shí)，它們優(yōu)選獨(dú)立為低級(jí)烷基，特別是甲基。當(dāng)R18、R19、R20和R21存在時(shí)，當(dāng)R22存在時(shí)和當(dāng)R23存在時(shí)，它們優(yōu)選是相同的。還優(yōu)選它們均是甲基。
就脲和/或亞氨基而言，當(dāng)R18和R19或R20和R21結(jié)合在一起形成環(huán)時(shí)，它們可形成如下式所示的雜環(huán)基部分 或 其中U＝CH2、O、NH或N-Alk，其中Alk是低級(jí)烷基，特別是甲基。
陽離子中的環(huán)狀基團(tuán)也優(yōu)選如下式所示 或 其中U如上定義。
優(yōu)選R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起以形成芳基或雜芳基環(huán)，其中芳基環(huán)是苯基或萘基，雜芳基環(huán)含有5-10個(gè)環(huán)原子，一個(gè)或兩個(gè)選自O(shè)、S、N的環(huán)雜原子和3-8個(gè)環(huán)碳原子。
就式I所示化合物而言，優(yōu)選以下情況。當(dāng)n是1時(shí)，優(yōu)選R7和R8是氫或低級(jí)烷基，但最優(yōu)選氫。
Y優(yōu)選是S、O、NR4或CR4R5，其中R4和R5獨(dú)立為氫或甲基。Y特別優(yōu)選O、CH2和NH。然而，也優(yōu)選不存在Q并且Y與X形成雙鍵。
X優(yōu)選是CR6R7或NR6。R6和R7優(yōu)選是氫或低級(jí)烷基。
就式I所示化合物而言，優(yōu)選Q不存在并且Y和X獨(dú)立為N或CH。更優(yōu)選Y和X中至少一個(gè)是N而另一個(gè)是CH。甚至更優(yōu)選Y是N，X是CH或N，或者Y和X均是N。
當(dāng)R6和R7結(jié)合在一起形成氧代基團(tuán)時(shí)，X成為C＝O。最優(yōu)選的是X是C＝O、CH2、NH或N(CH3)。此外，式I所示的一個(gè)具體形式如下式所示 或
當(dāng)n是0時(shí)，則R4和R6結(jié)合在一起，可在X和Y之間形成鍵，即在X的環(huán)碳原子和Y的環(huán)碳原子之間、在X的環(huán)氮原子和Y的環(huán)氮原子之間、或在X的環(huán)氮原子和Y的環(huán)碳原子之間或在X的環(huán)碳原子和Y的環(huán)氮原子之間形成鍵。換言之，在這些情況下，當(dāng)n是0時(shí)且R4和R6結(jié)合在一起，在X和Y之間形成鍵時(shí)，式I所示化合物變?yōu)橐韵禄衔?或 其中R1、R2、Y、X和R3如上定義。在這些條件下，優(yōu)選Y是CH或N，X是CH或N。最優(yōu)選Y和X是N。
當(dāng)n是1時(shí)，式I所示化合物變?yōu)橐韵禄衔?其中R1、R2、Q、R8、R9、Y、R4、R5、X、R6、R7和R3、R10、R11、R12和R13如上定義。優(yōu)選R8和R9是氫。
如上所述，當(dāng)n是1時(shí)，R4和R8結(jié)合在一起，可在Q和Y之間形成鍵，即R4的環(huán)碳原子和R8的環(huán)碳原子可形成鍵，或R4的環(huán)碳原子和R8的環(huán)氮原子可形成鍵，或R4的環(huán)氮原子和R8的環(huán)碳原子可形成鍵或R4的環(huán)氮原子和R8的環(huán)氮原子可形成鍵。例如，在這些條件下式I所示化合物變?yōu)橐韵禄衔?或 在該式中X優(yōu)選是C＝O或NH或CH2。
當(dāng)n是1時(shí)，Q優(yōu)選CH2或NH。然而，式I所示化合物也優(yōu)選如下式所示
其中Q是CR9或N，和R9是氫或低級(jí)烷基且R1、R2、X、OR3和Y如上定義。式I所示化合物的例子包括 或 其中R1、R2和R3如上定義。
式I所示化合物也優(yōu)選如下式所示 或 其中R1、R2、R3、Y和X如上定義。
最優(yōu)選的式I所示化合物如下式所示
或其N-氧化物，其中Q、Y、X、R3、n如上定義，A是N或CR24；D是CR25或N；E是CR26或N；G是CR27或N；和R24、R25、R26和R27獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；或者R25和R26或R24和R25或R26和R27分別與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)。優(yōu)選A、D、E或G均是CH，更優(yōu)選A、D、E、G中至少一個(gè)是N。
優(yōu)選A、D、E、G中不超過兩個(gè)是N。最優(yōu)選A、D、E、G中僅有一個(gè)是N。還優(yōu)選R24、R25、R26或R27是氫或如上定義的供電子基團(tuán)。供電子基團(tuán)優(yōu)選低級(jí)二烷基氨基，特別是N，N-二甲基氨基和低級(jí)烷氧基，例如甲氧基。
優(yōu)選的式III所示化合物如下式所示
或它們的N-氧化物，其中Y、X、n、Q和R3如上定義，R24和R25獨(dú)立為低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)。
當(dāng)n是1時(shí)，式IV-VII所示化合物中最優(yōu)選的化合物是式IVa所示 或其N-氧化物其中Q、Y、X和R3如上定義，R24和R25獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫或供電子基團(tuán)。
優(yōu)選的式I所示化合物也如下式所示 或 或其N-氧化物，其中n、Q、D、E、X和Y如上定義，J是NR28、O、CR28R29或S(O)p，p是0、1、2。
R28是氫、低級(jí)烷基或如上定義的供電子基團(tuán)，R29是氫或低級(jí)烷基。R29優(yōu)選氫。R28優(yōu)選供電子基團(tuán)或氫。
J優(yōu)選O或S(O)p；p優(yōu)選的值為1。
當(dāng)n是1時(shí)，優(yōu)選的式VIII所示化合物如下式所示 或其N-氧化物，
J、Y、R8、R9、n和R3如上定義，X是C＝O。
在上述式VIII、IX和VIIIa所示化合物中，D、E或J中至少一個(gè)是雜原子。此外，更優(yōu)選J、E和D中最多兩個(gè)是雜原子。最優(yōu)選J、E和D中僅一個(gè)是雜原子。
當(dāng)n是1時(shí)，優(yōu)選的式I所示化合物變?yōu)橐韵禄衔?或 因此，本發(fā)明包括下式所示化合物 或它們的N-氧化物，其中A、D、E、G、Y、X、R3和J如上定義更優(yōu)選的式I所示化合物為下式所示化合物
或它們的N-氧化物。
在上式中，當(dāng)環(huán)含有Y＝X時(shí)意味著Y的R4和X的R6結(jié)合在一起，在Y環(huán)原子和X環(huán)原子之間形成環(huán)鍵，從而如上所述在Y環(huán)原子和X環(huán)原子之間形成雙鍵。
此外，在上式中，當(dāng)環(huán)含有Y＝N時(shí)，則Y的R4和Q的NR8的R8結(jié)合在一起，形成環(huán)鍵，從而在氮環(huán)原子和Y原子之間存在雙鍵。因此，在這些情況下Y是CR5或N。
最優(yōu)選的式I的具體形式如下式所示 其中A、D、E、G中的一個(gè)或兩個(gè)是N，剩下的是CH，X是CH或N。最優(yōu)選X是N。也優(yōu)選A、D、E和G中最多一個(gè)是N，剩下的是CH。最優(yōu)選A是N，特別是G是N。
式I所示化合物的優(yōu)選具體形式包括
或它們的N-氧化物。
就式I所示化合物而言，R3如上定義。R10、R11、R12和R13上的各種基團(tuán)，例如烷基、芳基、芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基或低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基可以是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)或吸電子基團(tuán)取代。優(yōu)選未取代或由低級(jí)烷基取代的基團(tuán)。
就式I所示化合物而言，優(yōu)選R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。最優(yōu)選R10是OR12或芳基。
也優(yōu)選R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。最優(yōu)選R11是OR13或芳基。R12和R13優(yōu)選各自獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基或芳基低級(jí)烷基。R12和R13最優(yōu)選是具有1-3個(gè)碳原子的烷基或苯基。也優(yōu)選R12和R13相同。
也優(yōu)選R10和R11通過橋連基團(tuán)，T1相互連接。當(dāng)R30是低級(jí)烷基，更優(yōu)選H時(shí)，T1優(yōu)選O、CH2、S或NR30。當(dāng)R10和R11相連時(shí)，則R3變?yōu)?br> 其中R10、R11和T1如上定義。R3在本文中可定義為 優(yōu)選環(huán)A1和B獨(dú)立為芳香族，特別是苯基。
優(yōu)選R3是 或 或 其中R10′和R11′，R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基，Rb1、Rc1、Rb2和Rc2獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基。也優(yōu)選R12和R13通過橋連基團(tuán)T1相連形成以下R3部分 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，如上定義的，R10和R11通過橋連基團(tuán)T1相連。T1優(yōu)選CH2、O、S和NH，最優(yōu)選CH2和O。
R3的具體形式包括
其中R16和R17獨(dú)立為低級(jí)烷基，Rb1和Rc1獨(dú)立為H或低級(jí)烷基，T如上定義并優(yōu)選O、NH或CH2。
R3的例子包括 和 本發(fā)明當(dāng)然也考慮了本文所述各式的各種組合與排列。此外，本發(fā)明也考慮了含有不超過所有上述元素的馬庫什分組(Markush grouping)以及它們的各種排列。
可通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備式I所示化合物。下文描述了說明性的技術(shù)。
例如，下式所示化合物 可通過使
和 在取代反應(yīng)條件下反應(yīng)來制備，其中R1、R2、Y、Q、n、R3、R10和R11如上定義，L是離去基團(tuán)，例如鹵素等。
反應(yīng)優(yōu)選在惰性極性有機(jī)溶劑中進(jìn)行并且優(yōu)選室溫下反應(yīng)物可溶于該溶劑。也優(yōu)選室溫下該取代(反應(yīng))的產(chǎn)物不溶于該溶劑。適用于反應(yīng)的溶劑的例子包括氯仿、四氯化碳、乙醚、二烷、四氫呋喃和二氯甲烷等。反應(yīng)在有效溫度發(fā)生，所述溫度可從溶劑的熔點(diǎn)到其回流溫度但反應(yīng)優(yōu)選在約室溫或?qū)囟嚷晕⑸咧寥軇┑幕亓鳒囟忍幇l(fā)生。反應(yīng)特別優(yōu)選在室溫或略微升高的溫度處發(fā)生，例如升至60℃。
式100所示化合物可根據(jù)以下專利所述制備美國專利號(hào)RE 37,686；RE38,073；5,580,981；5,644,029；5,698,675；這些專利的內(nèi)容引作參考。
例如，式100所示化合物，如 和 可通過使肼分別與 或 或
反應(yīng)來制備，其中R’是鹵素、NH-NH2或OR”，和R”是低級(jí)烷基，例如甲基。該反應(yīng)在略微升高的溫度，例如70-100℃進(jìn)行，雖然該反應(yīng)也可在從室溫到溶劑的沸點(diǎn)的溫度進(jìn)行。
反應(yīng)通常在室溫下反應(yīng)物不可溶，但在略微升高的溫度下反應(yīng)物和產(chǎn)物可溶的有機(jī)溶劑中進(jìn)行。有用的溶劑的例子包括乙醇、DMF等。在許多情況中，反應(yīng)混合物中有顏色變化，這說明產(chǎn)物形成。后處理(work-up)，例如除去溶劑，然后酸化得到所需產(chǎn)物。
可通過使相應(yīng)的鹵化物，例如氯化物或溴化物在取代反應(yīng)的條件下與肼反應(yīng)制備肼基衍生物(R′＝NH-NH2)。可通過使相應(yīng)的醇在形成醚的條件下與烷化試劑，例如Me2SO4/Na2CO3反應(yīng)制備醚衍生物(R1＝OR″)。
式100a、100b或100c所示化合物用于制備式I所示化合物。也可通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備后者化合物。例如，通過使式100a、100b或100c所示化合物在取代反應(yīng)條件下分別與 反應(yīng)來制備式I所示化合物，其中R10和R11如上定義，L是離去基團(tuán)，例如鹵素(如Cl、Br、I)等。
可從在雜芳基中具有氮環(huán)雜原子的式I所示化合物制備N-氧化物。這些N-氧化物可通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)，例如通過它們的氧化來制備，例如用過酸，如過乙酸或間-氯過苯甲酸來氧化。
就式II所示化合物而言，優(yōu)選Y1是N或CR15，其中R15是氫或甲基。Y1特別優(yōu)選CH和N。
Q1也優(yōu)選N或CR16，其中R16是氫或低級(jí)烷基。Q1優(yōu)選是N或CH。
就式II所示化合物而言，Y1和Q1優(yōu)選是CH或N。在一優(yōu)選的實(shí)施方案中，式II所示化合物如下式所示
其中R1和R2和R14如上定義，Q1是N或CH，但特別(優(yōu)選)是N。
式II所示化合物或具有該式所示陽離子(部分)的式II的鹽的另一具體形式為 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳基環(huán)，其中所述雜芳基環(huán)是含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子的氧、硫、氮雜芳香族。所述雜芳基環(huán)可以是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是氨基酸或在N-末端少一個(gè)氫原子、在C-末端少一個(gè)OH的肽；
BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；和R10與R11可任選通過橋連基團(tuán)相連，該橋連基團(tuán)選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m，其中各R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR30；和R31是氫或低級(jí)烷基。
式II所示化合物或具有該式所示陽離子(部分)的式II的鹽的另一具體形式是 或其N-氧化物或鹽，其中Y1和Q1之一是CR15，另一個(gè)是N或CH；R15是H或低級(jí)烷基；R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子的氧、硫、氮雜芳香族，所述雜芳基環(huán)可以是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、
SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；和R10與R11可任選通過橋連基團(tuán)相連，該橋連基團(tuán)選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m，其中各R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；AA1是氨基酸或在N-末端少一個(gè)氫原子、在C-末端少一個(gè)OH的肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
如本文所定義的，在式II的一些具體形式中，R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基環(huán)。芳基環(huán)優(yōu)選是萘基，特別是苯基。
此外，如本文所定義的，在式II中R14優(yōu)選H或以上定義的帶正電荷的吸電子基團(tuán)，或
其中R10和R11如本文所定義，吸電子基團(tuán)如上定義。R14最優(yōu)選 就式I而言，優(yōu)選的R10和R11如上定義。
式II的優(yōu)選結(jié)構(gòu)如下式所示 其中Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)，R16是H或低級(jí)烷基； SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；AA1是氨基酸或在N-末端少一個(gè)氫原子、在C-末端少一個(gè)OH的肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；
R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；和R10與R11可任選通過橋連基團(tuán)相連，該橋連基團(tuán)選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m，其中各R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；和R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；和Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31，其中R31是氫或低級(jí)烷基；A是N或CR24；D是N或CR25；E是N或CR26；G是CR27或N；R24、R25、R26和R27獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；或者R25和R26或R24和R25或R26和R27與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基環(huán)，但是A、D、E和G中至少一個(gè)是N。
式II所示結(jié)構(gòu)優(yōu)選如下式所示 或 其中Y1、Q1和R14如上定義；D是CR25或N；G是CR26或N；J是NR28、O、CR28R29或S(O)p；
R25和R26獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)，或者R25和R26與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基；R28是氫或供電子基團(tuán)或低級(jí)烷基；R29是氫或低級(jí)烷基，和p是0、1或2。
式II所示結(jié)構(gòu)更優(yōu)選如下式所示 或 其中A是/N或CR24；D是CR25或N；E是CR26或N；G是CR27或N；J是NR28、O、CR28、R29或S(O)p；和R24、R25、R26、R27、R28、R29、p、Q1和R14如上定義。
就式II和其所有上述各種具體形式而言，優(yōu)選A、D、E和G中不超過兩個(gè)是N。最優(yōu)選A、D、E和G中僅有一個(gè)是N。此外，R24、R25、R26或R27優(yōu)選獨(dú)立為氫或如上定義的供電子基團(tuán)。優(yōu)選的供電子基團(tuán)是低級(jí)二烷基氨基、特別是N，N-二甲基氨基和低級(jí)烷氧基，例如甲氧基。
此外，T優(yōu)選是CH2、O、S或NH，更優(yōu)選CH2或O。式X的優(yōu)選結(jié)構(gòu)如下式所示
或它們的N-氧化物，其中R24、R25、Q1和R14如上定義。
在式XI-XIV所示結(jié)構(gòu)中，最優(yōu)選的化合物是XIa所示，即 其中R24、R25、Q1和OR14如本文定義。
式II所示結(jié)構(gòu)也優(yōu)選如下式所示 或 其中J、E、D、Q1和R14如上定義。優(yōu)選R24是氫、低級(jí)烷基或如上定義的供電子基團(tuán)，R25是氫或低級(jí)烷基。最優(yōu)選R25是氫，且最優(yōu)選R24是供電子基團(tuán)或氫。
J優(yōu)選O或S(O)p或NH；p的值優(yōu)選是1。
式II所示結(jié)構(gòu)也優(yōu)選如下式所示

或其N-氧化物。
在本文所述的各種結(jié)構(gòu)中，無論是式I或II所示的化合物或是本文所述本發(fā)明的任何其它實(shí)施方案，T優(yōu)選O、S、NH或CH2。此外，在上述各種結(jié)構(gòu)中，m優(yōu)選是1，R30優(yōu)選是H。
式II所示化合物或鹽(特別是其陽離子部分具有式II所示結(jié)構(gòu))可通過本領(lǐng)域已知的技術(shù)制備。例如，當(dāng)R14是氫時(shí)，可通過使式XVII所示化合物 與R14L反應(yīng)來制備式II所示化合物，其中R1、R2、Q1和R14如本文定義，L是離去基團(tuán)，例如鹵素(如，氯、溴或碘)。然而，如果R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)，則式II所示結(jié)構(gòu)是陽離子，這時(shí)就需要與該陽離子部分結(jié)合的陰離子。例如，當(dāng)R14是 時(shí)，式XVII所示化合物在取代反應(yīng)的條件下與 反應(yīng)，其中R12、R11和L如上定義。該反應(yīng)優(yōu)選在室溫下反應(yīng)物可溶的惰性極性有機(jī)溶劑中進(jìn)行。也優(yōu)選室溫下產(chǎn)物不溶于該溶劑。可用溶劑的例子包括氯仿、四氯化碳、乙醚、二烷、四氫呋喃和二氯甲烷等。反應(yīng)在有效溫度發(fā)生，所述溫度可從溶劑的熔點(diǎn)到其回流溫度，但反應(yīng)優(yōu)選約在室溫或?qū)囟嚷晕⑸咧寥軇┑幕亓鳒囟忍幇l(fā)生。反應(yīng)特別優(yōu)選在室溫或略微升高的溫度處發(fā)生，例如升至60℃。
也可通過本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的技術(shù)制備式XVII所示化合物。示范性方法如下
例如，式VII所示化合物在酸酐形成條件下與乙酸酐回流得到對(duì)應(yīng)的酸酐。然后在酰胺形成條件下用乙酰胺處理酸酐產(chǎn)物得到對(duì)應(yīng)的環(huán)狀二酰亞胺XIX。環(huán)狀二酰亞胺XIX經(jīng)有效進(jìn)行霍夫曼重排的條件，例如通過使之與次溴酸鈉(或氫氧化鈉和溴)反應(yīng)然后水解。例如，環(huán)狀二酰亞胺XIX與NaOBr、乙酸銅(II)和H2S反應(yīng)得到少一個(gè)碳原子的氨基羧酸(XX)。酸XX在酯化條件下酯化得到對(duì)應(yīng)的酯XXI。在酯化反應(yīng)條件下用酸配制的羥胺(羥基銨鹽)處理XXI得到異羥肟酸衍生物XXII。重氮化，然后分子內(nèi)環(huán)化得到偶氮衍生物XXIII。另一方面，異羥肟酸在有效條件下與甲酸反應(yīng)得到產(chǎn)物XXIV，所述條件例如是在有效溫度下加熱異羥肟酸與甲酸，所述有效溫度例如是剛超過室溫至回流溫度，包括回流溫度，優(yōu)選甲酸的回流溫度。
本發(fā)明當(dāng)然也考慮了本文所述各式的各種組合與排列。此外，本發(fā)明也考慮了含有不超過所有上述元素的馬庫什分組以及它們的各種排列。
如本文所述，上述化合物或鹽或N-氧化物用于促進(jìn)肽偶聯(lián)，即在第一氨基酸或第一肽的游離氨基和第二氨基酸或肽的游離羧基或酰化基團(tuán)之間的反應(yīng)。本發(fā)明的方法是通用的；它用于偶聯(lián)氨基酸的二肽、三肽和氨基酸、二肽、五肽、更高的肽、多肽等。
當(dāng)式I所示化合物或式II所示結(jié)構(gòu)與氨基化合物，例如氨基被保護(hù)(blocked)的氨基酸或式BLK1-AA1所示蛋白質(zhì)反應(yīng)時(shí)，以下化合物之一取決于所用的偶聯(lián)劑而形成相應(yīng)的氨基酸酯 或 其中AA1是氨基酸或本文定義的蛋白質(zhì)，BLK1是本文定義的保護(hù)基團(tuán)(blockinggroup)，Y、Q、Q1、n、X、R1和R2如上定義。該氨基酸酯然后可與具有游離氨基的化合物反應(yīng)得到下式所示的化合物 所述游離氨基例如是以R33R34NH表示的芳基氨基、烷基氨基、低級(jí)芳基氨基、雜環(huán)基氨基、雜環(huán)基低級(jí)烷基氨基、低級(jí)環(huán)烷基氨基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基氨基等，其中R33和R34獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、芳基或低級(jí)芳基烷基。
通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)除去保護(hù)基團(tuán)得到產(chǎn)物AA1NR33R34。
當(dāng)?shù)诙被衔锸前被峄蚓哂杏坞x氨基的肽(稱為AA2)時(shí)，該技術(shù)極其有用。例如，如果偶聯(lián)劑是式I所示化合物，可在AA1和AA2之間形成以下的肽，例如 其中AA1、AA2、BLK1、R1、R、Y、Q、n和X如本文定義的。
如果偶聯(lián)劑含有式II所示結(jié)構(gòu)， (無論是化合物或鹽的陽離子部分)，則反應(yīng)變?yōu)?br> 在反應(yīng)中，AA1、AA2、BLK1、R1、R2和Q1入本文所定義。
保護(hù)基團(tuán)可以是本領(lǐng)域已知的任何保護(hù)基團(tuán)，但優(yōu)選的保護(hù)基團(tuán)是FMOC、BOC、芐氧羰基BSMOC和Bspoc。
本文使用的術(shù)語“氨基酸”或AA、AA1或AA2指含有堿性氨基(NH2)和酸性羧基(COOH)的有機(jī)酸。
因此，所述分子是兩性的并以偶極離子存在于水溶液中。(參見《縮合化學(xué)詞典》(The Condensed Chemical Dictionary)，第10版，Gessner G.Hawley編，Van Nostrand Reinhold Company，London，England，第48頁，(1981))。優(yōu)選的氨基酸是α-氨基酸。包括但不限于確認(rèn)為蛋白質(zhì)成分的25種氨基酸。它們?cè)诎被岱肿又斜仨氈辽俸幸粋€(gè)羧基和一個(gè)伯氨基或仲氨基。該術(shù)語包括蛋白原性(proteinogenic)氨基酸，例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、脯氨酸、羥脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、2，4-二氨基丁酸、甲硫氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酸、賴氨酸、羥賴氨酸、鳥氨酸、精氨酸、組氨酸、青霉胺、萘胺、α-苯基甘氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、精氨酸、酪氨酸等。
本文使用的術(shù)語“肽”指由酰胺鍵化學(xué)結(jié)合在一起的氨基酸單元組成的一類化合物。肽最少可含有兩個(gè)氨基酸殘基或可由氨基酸殘基的聚合物組成(多肽)。
本文使用的術(shù)語“氨基酸”和“肽”也包括分別含有保護(hù)基團(tuán)的氨基酸或肽。為防止不利的副反應(yīng)，這些保護(hù)“基團(tuán)”保護(hù)涉及或參與偶聯(lián)的氨基酸或肽的氨基或羧基。這些保護(hù)基團(tuán)也保護(hù)側(cè)鏈上的反應(yīng)基團(tuán)。
許多氨基的保護(hù)試劑是本領(lǐng)域已知的并且已用于合成肽。這些保護(hù)基團(tuán)討論于美國專利號(hào)3,835,175；4,508,657；3,839,396；4,581,167；4,394,519；4,460,501和4,108,846；所有這些專利的內(nèi)容如同全文列出一樣引作參考。其它氨基保護(hù)基團(tuán)討論于美國專利號(hào)5,221,754；5,510,491和5,637,719；所有這些專利的內(nèi)容也引作參考。其它氨基保護(hù)基團(tuán)描述于《肽》(THEPEPTIDE)，第二卷中G.Barany和R.B.Merrifield的題目為“固相肽合成”(Solid Phase Peptide Synthesis)的文章，E.Gross和J.Meienhoffer編，AcademicPress，N.Y.，N.Y.，100-118，(1980)和《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS)，T.W.Green，JohnWiley & Sons，New York，所有文獻(xiàn)的內(nèi)容引作參考。
本文使用的術(shù)語氨基酸保護(hù)基團(tuán)(BLK，BLK1)表示本領(lǐng)域已知、用于保護(hù)氨基酸是氨基(NH2)的保護(hù)基團(tuán)。保護(hù)基團(tuán)，例如9-低級(jí)烷基-9-芴基氧羰基、2-氯-1-茚滿基甲氧基-羰基(CLIMOC)和苯并[f]茚-3-甲氧基羰基(BIMOC)和dbd-TMOC討論于上述的美國專利號(hào)3,835,175；4,508,657；3,839,396；4,581,167；4,394,519；4,460,501和4,108,846；它們的內(nèi)容引作參考。此外，其它氨基保護(hù)基團(tuán)，例如有2-(叔丁基磺酰基)-2-丙烯氧基羰基(Bspoc)和苯并噻吩砜-2-甲氧基羰基(Bsmoc)。其它N-氨基保護(hù)基團(tuán)包括有，例如叔丁氧基羰基(BOC)、叔戊氧基羰基(Aoc)、β-三甲基甲硅烷基-乙氧基羰基(TEOC)、金剛烷基-氧羰基(Adoc)、1-甲基-環(huán)丁氧基羰基(Mcb)、2-(對(duì)-聯(lián)苯基)丙基-2-氧羰基(Bpoc)、2-(對(duì)-苯基苯偶氮基)丙基-2-氧羰基(Azoc)、2，2-二甲基-3，5-二甲氧基芐氧基羰基(Ddz)、2-苯基丙基-2-氧羰基(Poc)、芐氧基羰基(Cbz)、對(duì)甲苯磺酰基氨基羰基(Tac)、鄰-硝基苯基亞磺酰基(Nps)、二硫代琥珀酰基(Dts)、鄰苯二甲酰基、哌啶-氧羰基、甲酰基、三氟乙酰基等。
這些保護(hù)基團(tuán)可分為4類1)堿不穩(wěn)定的Nα-氨基保護(hù)基團(tuán)，例如FMOC等。
2)可用酸除去的基團(tuán)，例如Boc、TEOC、Aoc、Adoc、Mcb、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Cbz、2-呋喃甲氧基羰基(Foc)、對(duì)-甲氧基芐氧基羰基(Moz)、Nps等。
3)可通過氫化除去的保護(hù)基團(tuán)，例如Dts、Cbz。
4)通過親核試劑除去的保護(hù)基團(tuán)，例如Bspoc、Bsmoc和Nps等。
5)可通過酸、堿或親核試劑除去的衍生自羧酸的保護(hù)基團(tuán)，例如甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基等。
可采用本領(lǐng)域已知的各種羧基保護(hù)基團(tuán)。許多這種可能的基團(tuán)的例子見《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(Protective Groups in Organic Synthesis)，T.W.Green，John Wiley & Sons，1981，其內(nèi)容引作參考。這些例子包括，例如甲酯、叔丁酯、β-三甲基甲硅烷基乙酯、芐酯等。
此外，在蛋白質(zhì)合成期間，可能需要保護(hù)氨基酸的某些側(cè)鏈以防止不利的副反應(yīng)。美國專利號(hào)5,360,920描述了各種保護(hù)基團(tuán)，其內(nèi)容納入本文作為參考。
術(shù)語“氨基酸或肽的酰化基團(tuán)”指在氨基酸或肽的游離羧基末端上、有助于酰化反應(yīng)，即在酰基碳處的親核取代反應(yīng)的基團(tuán)。例子包括游離酸；酰基鹵；酯；例如低級(jí)烷酯、未取代的或用本文定義的1-5個(gè)吸電子基團(tuán)取代的苯氧基酯；或酸酐等。優(yōu)選的酰化衍生物是酸、酰基鹵，特別是酰基氯或酰基氟和苯氧基酯。
優(yōu)選的酰化氨基酸是BLK-AA-M所示的氨基酸基團(tuán)，其中BLK是氨基保護(hù)基團(tuán)，AA是在COOH部分少一個(gè)H的氨基酸，M是鹵素或 其中Ra獨(dú)立為鹵素、低級(jí)烷基、硝基、氰基或其它吸電子基團(tuán)，b是0-5。當(dāng)b是0時(shí)，苯基是未取代的。
氨基酸的酰化基團(tuán)最優(yōu)選氨基酰基氯(amino acid chloride)或氨基酰基氟(amino acid fluoride)。Carpino等在J.Org.Chem.，1986，51，3734-3736的文章中討論了氨基酰基氯的制備及其用作酰化衍生物的應(yīng)用，其內(nèi)容納入本文作為參考。簡言之，可通過使氨基酸與亞硫酰氯反應(yīng)并從重結(jié)晶試劑，例如CH2Cl2-己烷中重結(jié)晶制備氨基酰基氯。
美國專利號(hào)5,360,920討論了氨基酰基氟的制備及其在肽合成中的應(yīng)用，其內(nèi)容納入本文作為參考。如其所述，可通過使N-保護(hù)的氨基酸與試劑氰脲酰氟(cyanuric fluoride)反應(yīng)來制備氨基酰基氟。該反應(yīng)可在低至0℃高至溶劑的回流溫度進(jìn)行，但優(yōu)選在室溫進(jìn)行。該反應(yīng)也可在惰性溶劑，例如吡啶/CH2Cl2等中進(jìn)行。氰脲酰氟可在升高的溫度下(150-250℃)根據(jù)以下方程式在存在氟化鉀時(shí)從對(duì)應(yīng)的氯化物制備 根據(jù)本發(fā)明制備肽的典型過程包括以下步驟1)保護(hù)第一氨基酸或第一肽的游離羧基直至氨基酸或肽錨定(anchor)到固相上。
2)保護(hù)第二氨基酸或肽的游離氨基。
3)如果需要，可保護(hù)側(cè)鏈。
4)在存在式I所示化合物時(shí)偶聯(lián)第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽。
5)除去保護(hù)基團(tuán)。
步驟1-3可以任何順序進(jìn)行。
在偶聯(lián)步驟中，式I或II所示化合物或鹽或其N-氧化物或式II的陽離子以有效量存在。第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽通常以等摩爾量存在。此外，式I或II所示化合物的用量取決于以最低量存在的肽或氨基酸(即，限制性試劑)的量；因此，式I或II所示化合物和以最低摩爾量存在的氨基酸或肽的摩爾比是約1∶3到3∶1，雖然優(yōu)選使用約等摩爾量的式I或II所示化合物(或其鹽或N-氧化物或式II所示的陽離子)和第一氨基酸或肽和第二氨基酸或肽。
偶聯(lián)反應(yīng)通常在惰性有機(jī)溶劑，例如二甲基甲酰胺(DMF)或醚類，如乙醚，THF或二烷中進(jìn)行。事實(shí)上，DMF由于其有利的溶解性能是固相合成中優(yōu)選的溶劑。反應(yīng)在溫和條件下進(jìn)行，通常是約0℃-30℃。肽形成后，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)除去保護(hù)基團(tuán)。
以下順序是對(duì)偶聯(lián)反應(yīng)的說明；雖然該方法對(duì)氨基酸和/或肽均通用，以下實(shí)施例使用的是氨基酸(AA)
在以上方案中，BLK是氨基酸保護(hù)基團(tuán)，AA1、AA2和AA3分別是第一、第二和第三氨基酸，P是羧基保護(hù)基團(tuán)。
如以上方案所示，N-α氨基受保護(hù)的氨基酸與羧基受保護(hù)的第二氨基酸反應(yīng)。
第一氨基酸和第二氨基酸之間形成肽。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的技術(shù)除去α氨基保護(hù)基團(tuán)，然后使相應(yīng)的二肽在存在式I所示化合物與另一N-α氨基受保護(hù)的氨基酸反應(yīng)形成相應(yīng)的三肽來增長該肽鏈。除去該三肽的N-α氨基保護(hù)基團(tuán)并重復(fù)上述循環(huán)直至獲得所需肽。
本發(fā)明不難用于固相肽合成。固相肽合成基于肽鏈的分步驟裝配，而肽鏈的一端連接于固體載體或固相肽樹脂上。本領(lǐng)域通常熟知這兩種方法。
其一，Merrifield方法利用固體載體來連接氨基酸或肽殘基。該方法利用N-保護(hù)的氨基酸作為構(gòu)建單元(building block)，這些構(gòu)建單元加入通過分子的酰基(酸)端連接于固體載體上的氨基酸或肽殘基。肽鍵形成后，除去保護(hù)基團(tuán)并重復(fù)該循環(huán)。具有所需序列的肽合成后從載體上取下。
第二種方法是反向Merrifield方法，該方法利用連接于一系列柱上的固體載體上的試劑。氨基酸或肽殘基連續(xù)流過這些柱形成所需氨基酸序列。
這些本領(lǐng)域熟知的方法討論于美國專利號(hào)4,108,846；3,839,396；3,835,1175；4,508,657；4,623,484；4,575,541；4,581,167；4,394,519以及Advances in Enzymology，32，221，(1969)和《肽》(PEPTIDES)，第二卷，Erhard Gross和Johannes Meienhoffer編，Academic Press，New York，第3-255頁，(1980)，這些文獻(xiàn)的內(nèi)容如同全部列出一樣納入本文作為參考。
本發(fā)明的化合物在肽偶聯(lián)中可用作偶聯(lián)劑或堿。然而，它們的效果也受用于溶解反應(yīng)物的溶劑體系和偶聯(lián)反應(yīng)所用的堿的影響。如果本發(fā)明的化合物在偶聯(lián)方法所采用的溶劑中溶解不佳，則應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為在該溶劑中易溶的形式或?qū)⑷軇Q為可溶解該化合物的。在溶液中進(jìn)行的肽偶聯(lián)中這一般不是問題。但使用肽合成儀時(shí)不能更換溶劑。例如，一些合成儀采用的溶劑是DMF或N-甲基吡咯烷酮。然而，本發(fā)明的化合物在所采用的溶劑，例如DMF或N-甲基吡咯烷酮中可能溶解不佳。因此，為克服該問題，本發(fā)明的化合物應(yīng)轉(zhuǎn)化為可溶解于所采用的溶劑，例如DMF或N-甲基吡咯烷酮中的化合物。例如，如果本發(fā)明的偶聯(lián)劑或堿(base)是式I所示并且如果R10或R11是芳基或雜芳基或者如果A1或B是芳基或雜芳基，則克服該問題的訣竅在于加上叔丁基或叔戊基或其中與芳基或雜芳基環(huán)相連的碳原子是叔碳的任何其它基團(tuán)。
如果R10或R11或A1或B含有多個(gè)環(huán)，則叔丁基或叔戊基或其它叔碳基團(tuán)，例如叔烴基(僅含碳和氫原子)優(yōu)選連接于和磷原子相連的環(huán)上。如果有多個(gè)這種基團(tuán)與環(huán)相連，這些基團(tuán)優(yōu)選相同。
以下實(shí)施例進(jìn)一步說明了本發(fā)明。
以下縮寫用于實(shí)施例中HOAt 1-羥基-7-氮雜苯并三唑DIEA 二異丙基乙胺TEA 三乙胺CBZ或Cbz 芐氧基羰基EDC N-乙基-N′-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺鹽酸鹽Aib 氨基異丁酸THF 四氫呋喃DMF 二甲基甲酰胺TCFH 1，1，3，3-四甲基氯亞胺甲基銨六氟磷酸鹽(1，1，3，3-tetramethylchloroformamidinium hexafluorophosphate)PyClu 1，1，3，3-雙(四亞甲基)氯代脲六氟磷酸鹽(1，1，3，3-bis(tetramethylene)chlorouroniumhexafluorophosphate)
PyBrop三(吡咯烷基)溴代六氟磷酸鹽(tris(pyrrolindino)bromophosphonium hexafluorophosphate)TFA 三氟乙酸TMP 2，4，6-三甲基吡啶PCA 對(duì)-氯苯胺DPOPOAt 二苯氧基磷酰基氧-7-氮雜苯并三唑HDATU O-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲-六氟磷酸鹽N-HATU1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-1，2，3-三唑-[4，5-b]吡啶六氟磷酸鹽3-氧化物O-Dhad3-氧-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪O-HATUN-[(1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基氧)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨六氟磷酸鹽(N-[(1H-1，2，3-triazolo[4，5-b]pyridin-1-yloxy)(dimethylamino)methylmethanaminium hexafluorophosphate)HDTU O-(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(O-(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate)HODhat3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪HODhbt3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-1，2，3-苯并三嗪DEPOAt二乙氧基磷酰基氧-7-氮雜苯并三唑DtpOAt二(鄰-甲苯基)氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑HODhad3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，3-二嗪Odhad 3-氧-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，3-二嗪HDADU O-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(O-(3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，3-diazin-3-yl)-1，1，3，3-tetr
amethyluronium hexafluorophosphate)HDAPyUO-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-雙(四亞甲基)脲六氟磷酸鹽(O-(3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，2，3-triazin-3-yl)-1，1，3，3-bis(tetramethylene)uronium hexafluorophosphate)PyDAOP[(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷基)六氟磷酸鹽[3，4-dihydro-4-oxo-5-azabenzo-1，2，3-triazin-3-yl]oxy]-tris(pyrrolidino)phosphonium Hexafluorophosphate)DtpOBt二(鄰-甲苯基)氧膦基氧苯并三唑DtpODhbt 3-[二-鄰-甲苯基)氧膦基氧]-3，4-二氫-4-氧代-2，3苯并三嗪DEPDBt3-(二乙氧基磷酰基氧)-3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪DPOPDBt 3-(二苯氧基磷酰基氧)-3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪DPOPOAt 二苯氧基磷酰基氧-7-氮雜苯并三唑PyDOP [(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷基)六氟磷酸鹽[(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)oxy]tris(pyrrolidino)phosphonium Hexafluorophosphate)HDPyU O-(3，4-二氫-4-氧代-1，2，3-苯并三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(O-(3，4-dihydro-4-oxo-1，2，3-benzotriazin-3-yl)-1，1，3，3-tetramethyluronium hexafluorophosphate)DIC 二異丙基碳二亞胺DCHMA N，N-二環(huán)己基甲基胺DmppOAt 2，8-二甲基吩氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑Bt苯并三唑Pfp 五氟苯基酯N-HBTU1-[雙(二甲基氨基)亞甲基]-1H-苯并三唑六氟磷酸鹽-3-
氧化物1-[bis(dimethylamino)mythylene]-1-H-benzotriazoliumhexafluorophosphate-3-oxideO-HBTUN-[1H-苯并三唑-基氧](二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨六氟磷酸鹽N-[1H-benzotriazol-1-yloxy](dimethylamino)mythylene]-N-methylmethanaminium hexafluorophosphate實(shí)施例1二乙氧基磷酰基氧-7-氮雜苯并三唑(DEPOAt)HOAt(1.36g，10mmol)和三乙胺(TEA)(1.39mL，10mmol)的15ml干燥苯溶液在冰浴中冷卻。在N2氣氛中向該溶液滴加氯代磷酸二乙酯(1.72g，1.45ml，10mmol)的在10ml干燥苯中的溶液，同時(shí)攪拌。在10分鐘內(nèi)加入完畢，繼續(xù)在冰浴上攪拌1小時(shí)，然后于室溫再攪拌4小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至5-10℃，經(jīng)過濾快速除去TEA HCl。無色的澄清溶液在溫度維持低于35℃時(shí)蒸發(fā)至干。將干燥己烷加入油狀殘留物，在N2氣氛中給該體系緊密蓋上蓋子并置于冰箱中(-20℃)2小時(shí)。油狀殘留物固化為白色固體，然后經(jīng)干燥CH2Cl2-己烷重結(jié)晶得到1.74g(63％)無色片狀的酯熔點(diǎn)48-50℃；1H NMR(CDCl3)δ8.77(dd，1H)，8.40(dd，1H)，7.44(dd，1H)，4.57(m，4H，2CH2)，1.47(2t，2CH3)；IR(在NaCl板上的膜)2987(m)，1596(m)，1395(m)，1306(s)，1026(vs)，838(m)，775(s)，699(m)cm-1。
C9H13N4O4P的分析計(jì)算值C，39.71；H，4.81；N，20.58。
實(shí)測(cè)值C，39.84；H，4.72；N，20.54。
實(shí)施例2二(鄰-甲苯基)氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑(DtpOAt)
在冰浴中冷卻HOAt(0.136g，1mmol)和DIEA(0.21mL，1.2mmol)在10ml干燥CH2Cl2中的溶液，在N2氣氛中向該溶液分批滴加0.2647g(1mmol)二(鄰-甲苯基)膦酰(phosphinoyl)氯(DTP-Cl)，同時(shí)攪拌。溶液繼續(xù)在冰浴上攪拌30分鐘，然后于室溫再攪拌5小時(shí)。除去溶劑后，用冷的飽和NaHCO3溶液(2×10ml)和鹽水(2×10ml)洗滌得到的無色溶液，MgSO4干燥得到0.26g(69％)白色固體。經(jīng)CH2Cl2-己烷重結(jié)晶得到0.21g無色塊狀晶體的酯的分析純樣品熔點(diǎn)170-172℃；1H NMR(CDCl3)δ8.74(dd，1H)，8.32(d，1H)，7.99(dd，1H)，7.56(m，2H，Ar-H)，7.35(m，6H，Ar-H)，2.70(d，6H，2CH3)；IR(KBr)3064(w)，1592(s)，1458(m)，1379(m)，1334(m)，1238(sh，s)，1113(s)，928(m)，811(s)，770(s)，691(s)cm-1。
C19H17N4O2P的分析計(jì)算值C，62.62；H，4.70；N，15.37。
實(shí)測(cè)值C，62.23；H，4.72；N，15.47。
實(shí)施例3合成3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪(HODhat)A.喹啉酰亞胺(Quinolinimide).將2，3-吡啶二羧酸(22.5g，0.135mol)加入到25ml乙酸酐中，混合物在蒸氣浴上加熱回流，同時(shí)攪拌。約1小時(shí)后得到澄清無色的溶液，繼續(xù)加熱2小時(shí)。然后蒸餾除去乙酸和過量的的酸酐(約12.6g)直至殘留溶液的溫度達(dá)到165℃。冷卻至室溫后留在燒瓶中的殘留物固化得到灰紅色固體。
向上述固體中加入乙酰胺(14g，0.237mol，1.75當(dāng)量)，用油浴加熱混合物使之維持于120-125℃過夜。冷至室溫后，收集固體并用乙酸(2×10ml)和水(3×50ml)洗滌。將灰色的固體懸浮于250ml熱水中，攪拌混合物15分鐘，過濾得到15g(75％)灰色固體的上述酰亞胺熔點(diǎn)237-239℃(文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)233℃)。
B.3-氨基吡啶甲酸.在冰浴冷卻的條件下將喹啉酰亞胺(50g，0.344mol)溶解于1000ml 10％NaOH，在攪拌并冷卻的條件下向溶液中緩慢加入冷的NaOBr溶液，該NaOBr溶液通過在冰浴中混合56g(18ml，0.344mmol)Br2和350ml 15％NaOH獲得。加入完畢后，繼續(xù)在冰浴中攪拌15分鐘，室溫中攪拌1小時(shí)。然后將得到的混合物加熱至85℃并攪拌，持續(xù)1小時(shí)。冷卻后，用50％H2SO4中和混合物至pH 5-6，整體維持于室溫過夜。
加熱得到的白色混濁混合物，用22g(0.11mol)一水乙酸銅(II)在400mlH2O和10ml乙酸中的熱溶液處理澄清的溶液。蒸氣浴加熱混合物15分鐘，然后于室溫冷卻，收集銅鹽并用冷水洗滌兩次。
銅鹽重懸于500ml水中，向懸液通H2S 2-3小時(shí)，同時(shí)攪拌。過濾除去混合物中黑色的CuS，濾液用活性炭脫色。除去水得到灰黃色固體，用水-乙醇(1∶1體積/體積)重結(jié)晶得到29g(60％)奶黃色固體的上述酸熔點(diǎn)212-214℃(文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)210℃)。
C.3-氨基吡啶甲酸乙酯.3-氨基吡啶甲酸(5.07g，36mmol)、無水乙醇(20ml)和濃H2SO4(6ml)的混合物回流48小時(shí)。冷卻后，將混合物濃縮至約15ml并倒入15g冰中。在冰浴冷卻下，用濃氨水將混合物堿化至pH 8-9，過濾收集分離出的白色沉淀物。濾液用乙醚(4×50ml)萃取，乙醚層用鹽水洗滌(4×50ml)，MgSO4干燥。蒸發(fā)醚溶液得到另一固體。合并兩部分并經(jīng)苯-己烷重結(jié)晶得到4.05g(68％)白色針狀的上述乙酯熔點(diǎn)126-127.5℃(文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)131-133℃，產(chǎn)率42％)；1H NMR(CDCl3)δ8.09(dd，1H)，7.23(dd，1H)，7.04(dd，1H)，5.76(s，2H，NH2)，4.46(q，2H，CH2)，1.45(t，3H，CH3)。
D.3-氨基-2-甲基吡啶異羥肟酸.向用18.7g(0.467mol)NaOH配制的110ml NaOH水溶液中緩慢加入鹽酸羥胺(16.3g，0.233mol)，同時(shí)攪拌并冷卻。向該溶液中分批加入以上C節(jié)制備的乙酯19.4g(0.116mol)，然后加入110ml甲醇，混合物于室溫?cái)嚢?8小時(shí)。溶液減壓濃縮至約100ml，在冷卻下用25％HCl中和至pH 5-6。過濾收集分離出的白色沉淀物，用少量冷水洗滌，經(jīng)P2O5真空干燥得到17.8g(100％)白色固體的3-氨基-2-甲基吡啶-異羥肟酸，該物質(zhì)純度足夠用于下一步。從MeNO2-MeOH-EtOAc重結(jié)晶兩次后得到產(chǎn)率為90％的白色塊狀晶體的該酸分析樣品熔點(diǎn)131-133℃(文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)143-145℃，產(chǎn)率49％)；1H NMR(DMSO-d6CDCl3)δ10.91(s，1H，OH)，8.89(s，1H，NH)，7.74(t，1H)，7.16(d，2H)，6.71(s，2H，NH2)；IR(KBr)3443(m)，3334(s)，1660(s，CON)，1606(s)，1262(w)，1017(w)，805(m)cm-1。
E.3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪(HODhat).在攪拌下，向以上步驟D產(chǎn)生的細(xì)粉產(chǎn)物(7.3g，47.6mmol)在28ml水中的懸液中加入8.5ml濃鹽酸。在冰浴中冷卻的條件下，向該混合物中滴入5mlNaNO2(4.93g，71.4mmol)的冷水溶液，溫度維持低于5℃。加入完畢后，繼續(xù)在冰浴中再攪拌30分鐘，過濾收集沉淀的固體，少量冷水洗滌并空氣干燥得到黃色固體的2.52g(32％)三嗪熔點(diǎn)195℃(爆炸(explodes))[文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)195℃(爆炸)]。在乙醇水(9∶1體積/體積)中重結(jié)晶得到淡橙色-黃色針狀的分析樣品(2.1g)熔點(diǎn)203℃(爆炸)；1H NMIR(DMSOd6)δ9.13(dd，11H)，8.65(dd，111)，8.08(dd，11H)；IR(KBr)2600(寬峰，OH)，1713(vs，C(O)N)，1574(s)，1420(m)，1230(sh，s)，1185(s)，1066(sh，s)，974(sh，m)，794(m)cm-1。
從母液中分離淡粉色針狀的3-羥基吡啶甲酸(1.6g，20％)熔點(diǎn)222-224℃(文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)220-222℃)。C6H5NO3的分析計(jì)算值C 51.80，H 3.62，N 10.07；實(shí)測(cè)值C 51.52，H 3.58，N 9.98。
實(shí)施例43-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，3-二嗪(HODhad)實(shí)施例3中步驟D產(chǎn)生的1.224g(8mmol)產(chǎn)物和3ml 98％甲酸的混合物加熱回流15分鐘，然后加入8ml水，整個(gè)體系煮沸15分鐘，冷卻至室溫。過濾收集分離出的沉淀物，用水洗滌(2×5ml)。用乙醇煮沸兩次后，得到0.71g(55％)黃色固體的分析純形式的HODhad熔點(diǎn)318.5-320℃(分解)；1H NMR(DMSO-d6)δ12.15(br，1H，OH)，8.85(dd，1H)，8.69(s，1H，CH)，8.17(dd，1H)，7.84(dd，1H)；IR(KBr)2625(寬峰，OH)，1683(sh，vs，CON)，1600(w)，1446(m)，1410(s)，1359(s)，1223(s)，990(s)，902(m)，791(s)cm-1。
C7H5N3O2的分析計(jì)算值C，51.53；H，3.09；N，25.76。
實(shí)測(cè)值C，51.46；H，3.00；N，25.80。
實(shí)施例5CBA-AiB-ODhat在冰浴中向CBZ-Aib-OH(0.3555g，1.5mmol)和HODhat(實(shí)施例4的產(chǎn)物)(0.246g，1.5mmol)在10ml THF和5ml DMF的懸液中加入0.3168gEDC HCl(1.65mmol)，同時(shí)攪拌。得到的混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)。真空除去溶劑，用40ml EtOAc萃取油狀殘留物。用5％檸檬酸水溶液(3×10ml)、10％NaHCO3溶液(3×10ml)和鹽水(3×10ml)洗滌EtOAc溶液，MgSO4干燥。
蒸發(fā)溶劑得到奶黃色油狀殘留物，該殘留物在真空中用P2O5干燥過夜后固化。粗品固體經(jīng)快速層析用EtOAc洗脫純化得到0.46g(80％)奶黃色固體的上述酯熔點(diǎn)57-59℃；1H NMR(CDCl3)δ9.05(dd，1H)，8.49(dd，1H)，7.86(dd，1H)，7.26(m，5H，C6H5)，5.47(s，1H，NH)，5.10(s，2H，CH2)，1.73(s，6H，2CH3)；IR(KBr)1813(m，COO)，1735(vs，NCO)，1267(s)，1052(s)cm-1。
C18H17N3O5的分析計(jì)算值C，56.39；H，4.47；N，18.27。
實(shí)測(cè)值C，56.10；H，4.56；N，18.08。
實(shí)施例6CBZ-Aib-ODhad如實(shí)施例6所述，在存在EDC HCl在15ml THF-DMF中的混合物(2∶1)時(shí)，用0.3555g(1.5mmol)的CBZ-Aib-OH處理0.2447g(1.5mmol)的HODhad(實(shí)施例5的產(chǎn)物)得到0.52g(90％)白色固體的以上產(chǎn)物熔點(diǎn)48-50℃；1H NMR(CDCl3)δ8.89(dd，1H)，8.13(dd，1H)，7.92(s，1H，CH)，7.71(dd，1H)，7.36(m，5H，C6H5)，5.47(s，1H，NH)，5.15(s，2H，CH2)，1.75(s，6H，2CH3)；IR.(KBr)1809(s，COO)，1718(vs，NCO)，1590(sh，m)，1522(sh，m)，1468(m)，1274(sh，s)，1059(s)，974(w)cm-1。
C19H18N4O5的分析計(jì)算值C，59.68；H，4.74；N，14.65。
實(shí)測(cè)值C，59.43；H，4.80；N，14.58。
實(shí)施例7Me3C-COODhat 在干燥N2氣氛中，向HODhat(0.3282g，2mmol)的10ml干燥二氯甲烷懸液中加入TEA(0.42ml，3mmol)。得到的混合物冷卻至0℃，攪拌下滴入新戊酰氯(0.27ml，2.2mmol)在5ml干燥二氯甲烷中的溶液。在冰浴中繼續(xù)攪拌30分鐘，使溫度回升至室溫。4小時(shí)后，用30ml CH2Cl2稀釋混合物，整個(gè)體系用飽和的NaHCO3(3×20ml)、鹽水(2×20ml)和水(2×20ml)洗滌，最后用無水MgSO4干燥。蒸發(fā)溶劑得到淺黃色固體，該固體從EtOAc-己烷重結(jié)晶得到0.31g(61％)無色針狀的分析純的酯產(chǎn)物熔點(diǎn)137-139℃；1H NMR(CDCl3)δ9.16(dd，1H)，8.57(dd，1H)，7.95(dd，1H)，1.51(s，9H，3CH3)；IR(KBr)3056(s)，1797(vs，COO)，1735(vs，CONO)，1566(s)，1479(m)，1215(s)，1181(m)，1056(sh，s)，1016(s)，974(m)，831(s)cm-1。
C11H12N4O3的分析計(jì)算值C，53.21；H，4.87；N，22.57。
實(shí)測(cè)值C，53.08；B，4.74；N，22.51。
實(shí)施例8Me3C-COODhad
使用實(shí)施例8所述的方法，在存在TEA(0.48ml，3.45mmol)時(shí)，用新戊酰氯(0.31ml，2.53mmol)在15ml干燥二氯甲烷中的溶液處理如實(shí)施例5所述制備的HODhad(0.3708g，2.3mmol)得到0.37g(65％)白色固體的Me3C-COODhad。從EtOAc-己烷中兩次重結(jié)晶后得到無色晶體的分析樣品(0.26g)熔點(diǎn)125-126.5℃；1H NMR(CDCl3)δ8.91(dd，1H)，8.13(dd，1H)，8.07(s，1H，CH)，7.73(dd，1H)，1.48(s，911，3CH3)；IR(KBr)3036(w)，1794(s，COO)，1715(vs，CONO)，1583(sh，m)，1464(m)，1427(m)，1296(s)，1059(vs)，1018(s)，824(m)cm-1。
C12H13N3O3的分析計(jì)算值C，58.29；H，5.29；N，17.00。
實(shí)測(cè)值C，58.34；B，5.28；N，17.02。
實(shí)施例9O-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HDATU)在干燥N2氣氛中，向?qū)嵤├?制備的HODhat(0.246g，1.5mmol)在10ml干燥二氯甲烷的懸液中加入TEA(0.22ml，1.65mmol)。攪拌5分鐘后，得到的淺黃色澄清溶液在冰浴中冷卻至0℃，在攪拌下分批加入0.4209g(1.5mmol)1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(TCFH)。在冰浴中繼續(xù)攪拌30分鐘，然后于室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。過濾收集分離出的沉淀物，用二氯甲烷洗滌兩次，MeCN-乙醚重結(jié)晶兩次得到0.42g(69％)白色固體的分析純六氟磷酸鹽產(chǎn)物熔點(diǎn)152℃(爆炸)；1H NMR(CD3CN)δ9.19(dd，1H)，8.69(dd，1H)，8.13(dd，1H)，3.21(s，12H，4CH3)；IR(KBr)1738(vs)，1702(vs，CON)，1526(m)，1457(m)，1412(s)，1266(m)，1165(sh，s)，1072(m)，964(s)，850(sh，vs)，708(s)cm-1。
C11H15N6O2PF6的分析計(jì)算值C，32.36；H，3.70；N，20.58。
實(shí)測(cè)值C，32.14；H，3.79；N，20.47。
實(shí)施例10O-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，3-二嗪-3-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸鹽(HDADU)使用實(shí)施例10的方法，在存在TEA(0.30ml，2.1mmol)時(shí)用10ml干燥CH2Cl2配制的TCFH(0.4209g，1.5mmol)處理實(shí)施例5制備的HODhad(0.2447g，1.5mmol)得到0.55g(90％)白色固體的上述六氟磷酸鹽產(chǎn)物，MeCN-乙醚重結(jié)晶兩次得到0.48g(79％)白色固體的分析純的鹽熔點(diǎn)203-205℃(分解)；1H NMR(CD3CN)δ8.91(dd，1H)，8.64(s，1H，CH)，8.22(dd，1H)，7.88(dd，1H)，3.17(s，12H，4CH3)；IR(KBr)1701(vs，CON)，1605(sh，m)，1528(s)，1471(s)，1416(sh，s)，1266(s)，1171(m)，1068(w)，965(s)，852(sh，vs)，718(s)cm-1。
C12H16N5O2PF6C，35.38；H，3.96；N，17.19。
實(shí)測(cè)值C，35.51；H，3.86；N，17.33。
實(shí)施例11O-(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪-3-基)-1，1，3，3-雙(四亞甲基)脲六氟磷酸鹽(HDAPyU)在干燥N2氣氛中，于0℃向25ml干燥CH2Cl2配制的0.4923g(3mmol)HODhat(如實(shí)施例4所述制備)和0.46ml(3.3mmol)TEA的混合物中分批加入1.0g(3mmol)PyClu，同時(shí)攪拌。在冰浴中繼續(xù)攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。用CH2Cl2稀釋澄清的淡黃色混合物至50ml。用冰冷的水(2×15ml)洗滌，MgSO4干燥。除去溶劑，油狀殘留物溶解于5mlMeCN，加入30ml乙醚，整個(gè)體系于-20℃保存幾天直至油狀物固化。過濾收集固體，重新溶解于20ml CH2Cl2，用冰冷的水(2×5ml)洗滌溶液，MgSO4干燥。除去溶劑得到粉-黃色的固體，MeCN-乙醚重結(jié)晶得到0.42g(30％)白色晶體的上述脲鹽產(chǎn)物熔點(diǎn)136.5℃(爆炸)；1H NMR(CD3CN)δ9.17(dd，1H)，8.67(dd，1H)，8.11(dd，1H)，3.75(t，8H，4NCH2)，1.97(m，8H，4CH2)；IR(KBr)2985(m)，1734(vs，CON)，1679(vs)，1448(sh，s)，1341(m)，1169(m)，1072(m)，964(m)，846(sh，vs)cm-1。
C5H19N6O2PF6C，39.13；H，4.16；N，18.26。
實(shí)測(cè)值C，38.94；B，4.08；N，18.30。
實(shí)施例12[(3，4-二氫-4-氧代-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪-3-基)氧]三(吡咯烷基)六氟磷酸鹽(PyDAOP)在干燥N2氣氛中，于0℃向10ml干燥CH2Cl2配制的0.2462g(1.5mmol)HODhat(如實(shí)施例4所述制備)和0.24ml(1.65mmol)TEA的混合物中分批加入0.6993g(1.5mmol)PyBrOP(三(吡咯烷基)溴代六氟磷酸鹽)，同時(shí)攪拌。在冰浴中繼續(xù)攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。用CH2Cl2稀釋澄清的淡黃色混合物至25ml，用冰冷的水(2×10ml)洗滌溶液，MgSO4干燥。用50ml乙醚處理得到的淡黃色澄清溶液，過濾收集分離出的固體，MeCN-乙醚重結(jié)晶后得到0.45g(54％)白色固體的分析純的PyDAOP熔點(diǎn)149℃(分解)；1H NMR(CD3CN)δ9.20(dd，1H)，8.67(dd，1H)，8.13(dd，1H)，3.42(td，12H，6NCH2)，1.96(td，12H，6CH2)；IR(KBr)2982(m)，2893(m)，1742(vs，CON)，1566(m)，1462(sh，w)，1270(s)，1224(s)，1140(s)，1110(s)，1049(sh，m)，960(s)，839(sh，vs)cm-1。
C18H27N7O2P2F6的分析計(jì)算值C，39.34；H，4.95；N，17.84。
實(shí)測(cè)值C，39.36；H，5.09；N，17.90。
實(shí)施例13
方法A.在磁力攪拌下，向0.42g(3.054mmol)HOAt的20mL無水CH2Cl2懸液中加入0.43mL(1當(dāng)量)三乙胺。得到的澄清黃色溶液在N2氣氛下于冰浴中冷卻并用0.85g(1當(dāng)量)2，8-二甲基吩次膦酰氯(2，8-dimethylphenoxaphosphinic chloride)緩慢處理。
反應(yīng)混合物于0℃攪拌30分鐘，然后于室溫?cái)嚢?小時(shí)。用30mlCH2Cl2稀釋后，用水、飽和的NaCl水溶液(30mL)洗滌有機(jī)相，MgSO4干燥。借助水泵用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑后，殘留物經(jīng)CH2Cl2-己烷重結(jié)晶得到0.65g(56.3％)白色晶體的上述次膦酸酯熔點(diǎn)164-166℃(分解)；1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ2.472(s，6)，7.218-7.559(m，5)，8.056-8.130(d，2)，8.319-8.368(d，2)，8.319-8.368(d，1)，8.698-8.729(d，1)。IR(KBr)1128-(P＝O)。C19H15N4PO3的分析計(jì)算值C，60.32；H，4.0N，14.81。HREIMSM+378.0882；實(shí)測(cè)值378.0877。
方法B在磁力攪拌下，向1.25g HOAt的20mL無水CH2Cl2懸液中加入0.623g(1當(dāng)量)咪唑。得到的白色懸液在N2氣氛中于冰浴中冷卻并用2.56g(1當(dāng)量)2，8-二甲基吩次膦酰氯緩慢處理。反應(yīng)混合物于0℃攪拌30分鐘，然后于室溫?cái)嚢?小時(shí)，用30ml CH2Cl2稀釋。反應(yīng)混合物在N2氣氛中在燒結(jié)的玻璃漏斗中過濾，無水MgSO4干燥。借助水泵用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑后，殘留物經(jīng)CH2Cl2-己烷重結(jié)晶得到2.86g(82.3％)白色晶體的上述次膦酸酯，其熔點(diǎn)和NMR數(shù)據(jù)與以上報(bào)道的數(shù)據(jù)相同。
實(shí)施例14還使用本文的上述方法制備以下化合物
(白色固體)
其中吩次膦酸(phenoxophosphinic acid)產(chǎn)物具有以下取代基。
實(shí)施例15
采用實(shí)施例14的方法B并用4-Me-HOAt替代HOAt制備白色固體的上述化合物。
實(shí)施例162-鄰-甲苯基-氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑(DtpOAt)
A.二-鄰-甲苯基膦氧化物.在氮?dú)猸h(huán)境中向配有冷凝器、磁力攪拌器和滴液漏斗的3-頸燒瓶中的100ml無水乙醚中加入鎂屑(13.96g)。向混合物中緩慢加入100ml乙醚配制的鄰-溴代甲苯(100g，0.579mol)。在加入過程中，格利雅反應(yīng)開始，該反應(yīng)變得非常劇烈需要頻繁用冰浴冷卻。加入完畢后(40分鐘)，反應(yīng)混合物回流15分鐘，然后用冰浴冷卻并緩慢用40ml乙醚配制的亞磷酸二乙酯(30.8ml，0.232mol)處理。混合物再回流15分鐘，用冰浴冷卻。在磁力攪拌下，向冷卻的混合物中緩慢加入250ml 10％HCl和200ml水。蒸發(fā)乙醚，過濾收集不溶的氧化膦，CH2Cl2-己烷重結(jié)晶(加入幾滴甲醇以幫助溶解固體)得到39.47g(73.9％)淺黃色固體的氧化膦熔點(diǎn)94℃，文獻(xiàn)報(bào)道熔點(diǎn)93-94℃，產(chǎn)率57％；1H-NMR(60MHz，CDCl3)δ2.376(s，6)，4.234(s，1)，7.19-7.94(m，8)；IR(KBr)2369(P-H)，1168(P＝O)cm-1。
B.二-鄰-甲苯基次膦酸.用40ml 30％H2O2突然處理80ml 5N NaOH水溶液配制的15.04g二-鄰-甲苯基膦氧化物的懸液，得到的混合物在蒸氣浴上加熱20分鐘。得到澄清的溶液并趁熱過濾。濾液在冰浴中冷卻，用濃HCl緩慢酸化導(dǎo)致白色固體沉淀，該沉淀物經(jīng)MeOH-乙醚重結(jié)晶得到13.4g(83.3％)次膦酸熔點(diǎn)174-176℃，文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)175-177℃，產(chǎn)率58-74％；1H-NMR(60MHz，TFA)δ2.369(s，6)，7.245-8.124(m，8)；IR(KBr)1143(P＝O)cm-1。
C.二-鄰-甲苯基次膦酰氯(DtpCl).在冰浴冷卻條件下，向50ml亞硫酰氯中緩慢加入二-鄰-甲苯基次膦酸(13.5g)。混合物在使用CaCl2干燥試管的條件下回流3小時(shí)。用水泵在通風(fēng)廚中除去剩余的亞硫酰氯后，分餾油狀殘留物得到13.55g(93.4％)快速固化的無色油狀的次膦酰氯(沸點(diǎn)158-165℃/0.1mmHg)，文獻(xiàn)報(bào)道沸點(diǎn)150-160℃，產(chǎn)率80.5％；1H-NMR(60MHz，CDCl3)δ2.449(s，6)，7.05-8.08(m，8)；IR(KBr)1220(P＝O)cm-1。
實(shí)施例17二-鄰-甲苯基-氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑(DtpOAt)
根據(jù)以下實(shí)施例16方法的改變方案制備上述化合物 方案1.
A.制備二-鄰-甲苯基膦氧化物(1).在氮?dú)猸h(huán)境中向配有有效的冷凝器、磁力攪拌器和兩個(gè)滴液漏斗的1L的3-頸燒瓶中的100ml無水乙醚中加入鎂屑(13.96g)。向混合物中緩慢加入鄰-溴代甲苯(72ml)。調(diào)節(jié)加入速度使得乙醚緩慢沸騰。在加入過程中無需冰浴冷卻。加入完畢后(40分鐘)，反應(yīng)混合物回流2小時(shí)，然后用冰浴冷卻。從第二滴液漏斗緩慢加入50ml乙醚配制的亞磷酸二乙酯(30.8ml)，反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。亞磷酸二乙酯在使用前蒸餾，沸點(diǎn)62-64℃(5mmHg)。向冷卻的混合物中緩慢加入250ml 10％HCl和200ml水，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去乙醚。過濾分離不溶物質(zhì)，干燥并經(jīng)甲苯重結(jié)晶得到30.7g(57.4％)淺黃色晶體的氧化膦熔點(diǎn)95-97℃，文獻(xiàn)報(bào)道熔點(diǎn)94-95℃。
B.制備二-鄰-甲苯基次膦酸(2).用40ml 30％H2O2處理二-鄰-甲苯基膦氧化物(15g)和80ml的5N NaOH。懸液在蒸氣浴上溫和加熱20分鐘。加熱應(yīng)小心進(jìn)行，因?yàn)榉磻?yīng)可能很劇烈。如果反應(yīng)變得劇烈，在大燒杯中進(jìn)行反應(yīng)以防產(chǎn)物損失。(反應(yīng)混合物不會(huì)爆炸，但會(huì)產(chǎn)生許多泡沫和氣體)。將熱的反應(yīng)混合物加入到冰冷的HCl溶液中(90ml濃HCl加上30g冰)。通過氯仿(3×75ml)萃取分離得到的白色固體。用水洗滌氯仿層，硫酸鎂干燥。真空除去溶劑后，得到的固體經(jīng)95％乙醇重結(jié)晶。以上量的氧化膦分兩批氧化(每批15g)。兩次的純次膦酸平均產(chǎn)率是79％熔點(diǎn)174-175℃，文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)175-177℃。
C.制備二-鄰-甲苯基次膦酰氯(3).在用冰浴冷卻條件下，向75ml亞硫酰氯中一次性加入二-鄰-甲苯基次膦酸(22.5g)，反應(yīng)混合物加熱回流3小時(shí)。除去過量的亞硫酰氯后，殘留的油狀物溶解于干燥的二氯甲烷(DCM)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去DCM，以上操作重復(fù)三次。得到的油狀物的酰基氯靜置后固化，可直接使用無需進(jìn)一步純化。
D.制備Dtp-OAt-向12.7g HOAt的300mL無水DCM懸液中加入16.7mL DIEA。得到的澄清黃色溶液在氮?dú)鈿夥罩杏诒≈欣鋮s，用25.8g溶解于300ml DCM的二-鄰-甲苯基次膦酰氯處理。反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢?小時(shí)。用600ml DCM稀釋反應(yīng)混合物，用水和飽和的NaCl水溶液洗滌，MgSO4干燥。借助水泵用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑后，殘留物經(jīng)CH2Cl2/乙酸乙酯重結(jié)晶得到30.1g(88％)白色晶體的活性酯，熔點(diǎn)175-177℃，文獻(xiàn)報(bào)道的熔點(diǎn)170-172℃。
應(yīng)注意，該物質(zhì)在DMF中溶解度極低。一些自動(dòng)的肽合成儀，例如AIB 433A肽合成儀需要將DMF配制的活化物溶液放置于一個(gè)試劑瓶中，然后該試劑瓶將活化的物質(zhì)遞送至反應(yīng)容器。溶液中試劑的濃度必須為0.3-0.8M以保證活化物質(zhì)的濃度合適。由于該試劑在DMF中的溶解度極低，如果使用這種自動(dòng)合成儀，偶聯(lián)兩個(gè)氨基酸形成肽的產(chǎn)率低。然而，將本實(shí)施例產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)稍作修飾使得其可溶于DMF便提高了它偶聯(lián)氨基酸形成肽的能力。以下實(shí)施例描述了極大提高Dtp-OAt在DMF和其它有機(jī)溶劑中溶解度的Dtp-Oat的結(jié)構(gòu)修飾。
實(shí)施例185-t-Bu-Dtp-Oat根據(jù)以下概述的方案合成新的偶聯(lián)劑。合成始于市售的4-叔丁基-甲苯，5步完成。
方案2A.制備2-溴-4-叔丁基甲苯(4).根據(jù)Reich等，J.Med.Chem.，1996，39，2781所述方法進(jìn)行溴化，該文獻(xiàn)的內(nèi)容引作參考。向4-叔丁基甲苯(90mL，0.518mol)和兩份I2晶體的溶液中滴加溴(27mL，0.524mol)。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?小時(shí)，然后倒入1L冷水中。混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗，收集下層。用飽和的NaHCO3、鹽水洗滌粗品2-溴-4-叔丁基甲苯，MgSO4干燥。減壓蒸餾粗產(chǎn)物，首先使用水泵然后用高真空油泵。借助水泵在達(dá)100℃沸點(diǎn)處收集第一餾份，在高真空中蒸餾殘留物得到90.5g(77％)無色液體的溴化物，沸點(diǎn)61-65℃(3-5mm/Hg)。
B.制備雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基)膦氧化物(5).根據(jù)實(shí)施例17所述化合物1的方法獲得該化合物。DCM/己烷重結(jié)晶氧化膦(5)得到15.8g(32％)白色晶體的氧化物，熔點(diǎn)178-180℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.317(18H，s)，2.334(6H，s)，7.715(2H，dd)，7.480(2H，dt)，7.779(2H，dd)，8.215(1H，d，JP-H474Hz)。IR(KBr)2336(PH)，1187和1168cm-1(P＝O)。C22H31OP的分析計(jì)算值C，77.16；H，9.12。實(shí)測(cè)值C，77.21；H，8.98。
C.制備雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基次膦酸(6).向60ml的雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基)膦氧化物(6g，17.5mmol)乙酸溶液中緩慢加入15ml的30％H2O2。反應(yīng)混合物于室溫?cái)嚢?天，然后倒入300ml冷水中。過濾分離白色沉淀物，乙醇/水重結(jié)晶得到6g(95％)白色晶體的純酸(6)，熔點(diǎn)182-183℃；1H-NMR(400MHz，DMSO-d6)δ1.230(18H，s)，2.172(6H，s)，7.034-7.902(6H)。IR(KBr)1162cm-1(P＝O)。C22H31O2P的分析計(jì)算值C，73.72；H，8.72。實(shí)測(cè)值C，74.00；H，9.01。
D.制備雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基)次膦酰氯(7).根據(jù)實(shí)施例17所述化合物(3)的方法制備該化合物。該酰基氯可用于下一步驟而無需純化。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.276(18H，s)，2.384(6H，s)，7.173-7.213(2H，m)，7.493(2H，dt)，7.903(2H，dd)。IR(KBr)1231cm-1(P＝O)。
E.制備雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基)氧膦基氧-7-氮雜苯并三唑.向30ml0.76g(5.58mmol)HOAt的無水DCM懸液中加入0.78mL(5.6mmol)TEA。得到的澄清黃色溶液在氮?dú)鈿夥罩杏诒≈欣鋮s，用溶解于20ml DCM的2g(5.27mmol)雙-(5-叔丁基-2-甲基苯基)-次膦酰氯處理。反應(yīng)混合物于0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢?-5小時(shí)。用40ml DCM稀釋反應(yīng)混合物，水和飽和的NaCl洗滌，MgSO4干燥。借助水泵用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去溶劑。用己烷、然后用含有少量乙酸乙酯的己烷重結(jié)晶后獲得白色固體的以上產(chǎn)物[2.3g(86％)]熔點(diǎn)86-87℃；1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ1.271(18H，s)，2.687(6H，s)，7.264-7.298(2H，m)，7.369(1H，dd)，7.545(2H，dt)，7.974(2H，dd)，8.309(1H，dd)，8.729(1H，dd)。IR(KBr)1242cm-1(P＝O)。C27H34N4O2P的HRFAB MS，m+477.2419，實(shí)測(cè)值477.2400。
小規(guī)模溶解度測(cè)試顯示該化合物(叔丁基-Dtp-OAt)在DMF中高度可溶，因此可用于自動(dòng)肽合成儀。
如上所示，不希望受束縛，據(jù)信在使用脲或膦鹽的肽合成期間，N-保護(hù)的羧酸首先與偶聯(lián)劑反應(yīng)形成活化的酯，然后與氨基部分反應(yīng)得到相應(yīng)的酰胺。因此，形成這種活化酯的速度是評(píng)價(jià)偶聯(lián)劑效率的重要因素之一。如下文的化學(xué)方程式所述，以下選擇的模型涉及N-芐氧基羰基-α-氨基異丁酸(CBZ-Aib-OH)在DMF和CDCl3中轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的活化酯。
偶聯(lián)劑
該項(xiàng)研究比較了HOBt、HOAt與HODhbt的衍生物 和 和 NMR檢測(cè)CBZ-Aib-OH(δ5.09)和活化酯(δ5.20)的芐型CH2單元。真實(shí)(authentic)合成證實(shí)活化酯的峰分配在δ5.20。
由于Aib羧基的空間位阻，以上方程式中的活化比蛋白原性氨基酸情況中的慢，從而更精密地區(qū)分不同的偶聯(lián)劑。
該方法描述于下文實(shí)施例19中。
實(shí)施例19(a)二-鄰-甲苯基氧膦基氧苯并三唑(DtpOBt).以類似于制備實(shí)施例16的產(chǎn)物的方法進(jìn)行制備在存在DIEA(0.21ml，1.2mmol)時(shí)，于10ml干燥CH2Cl2中用Dtp-Cl(0.267g，1mmol)處理HOBt(0.1251g，1mmol)5小時(shí)，后處理后得到0.24g(66％)白色固體。CH2Cl2-己烷重結(jié)晶得到0.18g酯的分析純樣品，為無色晶體熔點(diǎn)198-200℃；1H-NMR(CDCl3)δ8.06(m，3)，7.30(m，6)，2.62(s，6)；IR(KBr)3065(W)，1593(s)，1457(s)，1362(m)，1278(m)，1230(vs)，1151(s)，1084(sh，s)，812(vs)，774(sh，vs)，704(m)cm-1。C20H18N3O2P的分析計(jì)算值C，66.10；H，4.92；N，11.56。實(shí)測(cè)值C，65.75；H，4.97；N，11.41。
(b)根據(jù)實(shí)施例14中所述制備DmppOAt的方法A使用HODhbt制備3-[二-鄰-甲苯基氧膦基氧]-3，4-二氫-4-氧代-2，3-苯并三嗪](DtpODhbt)，HODhbt以類似于實(shí)施例4所述方法使用HOBt替代HOAt并用二-鄰-甲苯基次膦酰氯制備。乙酸乙酯-乙醚重結(jié)晶后獲得白色晶體的產(chǎn)物(76.5％)熔點(diǎn)178-179℃(分解)；1H-NMR(200MHz，CDCl3)δ2.58(s，6)，7.28(m，4)，7.487-7.570(m，2)，7.75(m，1)，7.90-8.15(m，4)，8.351(dd，1)；IR(KBr)1709(C＝O)，1240(P＝O)cm-1。C21H18N3PO3的分析計(jì)算值C，64.45；H，4.64；N，10.74。實(shí)測(cè)值C，64.49；H，4.54；N，10.69。
(c)形成活化酯.向0.5ml的0.1mmol CBZ-Aib-OH和0.1mmol合適偶聯(lián)劑的CDCl3或DMF溶液中加入0.1mmol DIEA。混合物立即轉(zhuǎn)移至放在Hitachi R-1200(60MHz)NMR儀器的探測(cè)器(probe)上的NMR試管中。隨著反應(yīng)在探測(cè)溫度(37℃)的進(jìn)行，對(duì)δ5.1(酸)和5.2(活化酯)處的1H-NMR峰進(jìn)行積分可大致測(cè)定相對(duì)速率。結(jié)果示于表1，這些結(jié)果代表了表示至少兩次測(cè)定的平均值。
在以下實(shí)施例中，應(yīng)理解氨基酸序列是以氨基到羧基，自左向右表示。
實(shí)施例20為測(cè)試構(gòu)型控制，制備三種不同的肽，CBZ-Phe-Val-Pro-NH2、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH2和CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-GlyOMe(SEQ ID NO1)并測(cè)定偶聯(lián)期間的構(gòu)型喪失。以下給出了二肽的示范性方法
A.CBZ-Phg-Pro-NH2作為標(biāo)準(zhǔn)方案，于0℃用0.125mmol合適的偶聯(lián)劑處理1ml DMF或其它溶劑配制的35.6mg(0.125mmol)CBZ-Phg-OH、14.3mg(0.125mmol)H-Pro-NH2和0.25mmol堿。混合物于0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。用25ml EtOAc稀釋得到的混合物，用HCl(2×10ml)、10％NaHCO3溶液(2×10ml)和鹽水(2×10ml)洗滌，MgSO4干燥。除去溶劑后得到油狀肽殘留物。油狀殘留物溶解于1ml CH2Cl2并加入20ml己烷。過濾得到白色固體。通常含有LL-和DL-形式的CBZ-Phg-Pro-NH2的約5mg該粗產(chǎn)物溶解于4ml MeCN并如Wenschuh等在J.Org.Chem.，1995，62，405中所述通過HPLC直接分析，該文獻(xiàn)的內(nèi)容引作參考。
B.CBZ-Phe-Val-Pro-NH2.按照上述CBZ-Phg-Pro-NH2的方法制備。
C.CBZ-Gly-Phe-Pro-NH2.按照上述CBZ-Phg-Pro-NH2的方法制備。
D.CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe(SEQ ID NO 1.)如制備CBZ-Phg-Pro-NH2所述，于0℃用0.125mmol合適的偶聯(lián)劑處理45.6mg(0.125mmol)CBZ-Gly-Gly-Val-OH、31.7mg(0.125mmol)H-Ala-Gly-Gly-Ome·HCl和49.6μl(0.375mmol)TMP在1ml DMF中的溶液。得到的混合物于0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。蒸發(fā)溶劑，然后使用MeOH/CHCl3/HOAc(3∶7∶0.1)作為洗脫劑通過直接柱層析分離粗品六肽甲酯。柱上洗下含有LL-和DL-形式六肽的粗物質(zhì)通過如Carpino，J.Org.Chem.，1994，59，695所述的HPLC檢測(cè)，該文獻(xiàn)的內(nèi)容引作參考。
結(jié)果示于表2表2.偶聯(lián)劑在使用2當(dāng)量TMP作為堿，在DMF中進(jìn)行[2+1]偶聯(lián)(得到CBZ-Phe-Val-Pro-NH2、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH2)和[3+3]偶聯(lián)(得到CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe)過程中對(duì)構(gòu)型喪失的作用。
a括號(hào)內(nèi)的數(shù)字指用1當(dāng)量的合適的HOXt，例如加入HOAt、HOBt或HODhbt進(jìn)行的相同測(cè)定。
本文的數(shù)據(jù)證實(shí)本發(fā)明的新的基于磷的OAt衍生物在保持構(gòu)型中比其它測(cè)試的試劑，包括N-HATU更有效。以前描述的最好的脲/胍鹽(N-HAPyU)有時(shí)與新的磷酯的結(jié)果相同，但當(dāng)觀察到區(qū)別時(shí)，證實(shí)后者在迄今為止測(cè)試的每種情況中均更有效。
在涉及N-HAPyU的這些數(shù)據(jù)中獲得的結(jié)果中發(fā)現(xiàn)，就新試劑DEPOAt和DPOPOAt而言，過量1當(dāng)量的脯氨酸用作堿時(shí)，對(duì)于三肽CBZ-Phe-Val-Pro-NH2，在DMF中觀察到的最低差向異構(gòu)化水平(0.5％LDL-異構(gòu)體)。換用其它溶劑，在本發(fā)明的新磷試劑和相關(guān)的脲/胍鹽之間發(fā)現(xiàn)甚至更大的區(qū)別。例如，在使用特定的結(jié)構(gòu)破碎組合溶劑三氟乙醇/三氯甲烷(TFE，TCM，1∶3)中，對(duì)于DPOPOAt/TMP得到12.2％的LDL-形式，而NHATU/TMP是38.5％。在存在TMP時(shí)，在CH2Cl2中得到的2.2％(DEPOAt)和2.9％(DPOPOAt)明顯好于胍試劑NHATU(9.3％)和N-HAPyU(5.3％)觀察到的值。
為測(cè)定氯化二苯基偶磷氯化物(diphenylphosphorochloridate)(DPOPCl)的偶聯(lián)效率，使用了各種偶聯(lián)條件。注意到無添加劑時(shí)，對(duì)于二異丙基乙胺和三甲基吡啶，使用DPOPCl都得到極少量的所需肽。如果存在1當(dāng)量的HOAt(1-羥基-7-氮雜苯并三唑)，結(jié)果尚可。實(shí)際上，含有DPOPOAt作為活性物質(zhì)的混合物DPOPCl/HOAt/堿得到與單獨(dú)使用試劑DPOPOAt相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。
也選擇三肽CBZ-Phe-Val-Pro-NH2作為研究在固相條件下與使用本發(fā)明各種試劑相關(guān)的構(gòu)型喪失的模型。與溶液中獲得的結(jié)果相比，這些數(shù)據(jù)顯示在固相方式中要維持構(gòu)型有多困難。系統(tǒng)包括在存在8當(dāng)量的DMF配制的三甲基吡啶時(shí)，在H-Pro-PAL-PEG-PS上偶聯(lián)4當(dāng)量的CBZ-Phe-Val-OH過夜，用三氟乙酸/H2O(9∶1)在1小時(shí)期間從樹脂上切割三肽并如對(duì)溶液系統(tǒng)所述分離非對(duì)映體。雖然在所有情況中均發(fā)生普遍的構(gòu)型喪失，這些數(shù)據(jù)顯示各種偶聯(lián)劑的效果與在溶液中的順序相同偶聯(lián)劑/LDL(％)DEPOAt/11.6，N-HAPyU/13.0，N-HATU/13.6，DPOPODBt/19.4，DEPDBt/19.5，HDTU/24.2，N-HBTU/29.8。
實(shí)施例21在固相上經(jīng)分步偶聯(lián)的ACP裝配為證實(shí)基于有機(jī)磷的偶聯(lián)劑的適應(yīng)性并比較其與相應(yīng)的脲/胍類似物在固相合成中的性能，進(jìn)行了多次ACP十肽片段65-74(H-Val-Gln-Ala-Ala-Asp-Tyr-Ile-Asn-Gly-NH2)(SEQ.ID.NO.2)的合成。
方案如下用CH2Cl2(3×10ml)和DMF(3×10ml)洗滌裝在配有特氟隆過濾器的10-ml一次性注射器中的150mg Fmoc-Gly-PAL-PEG-PS樹脂(0.19mmol/g，0.0285mmol)，用DMF配制的20％哌啶(10ml)脫保護(hù)7分鐘。脫保護(hù)的樹脂用DMF(3×10ml)、CH2Cl2(3×10ml)洗滌，再用DMF(3×10ml)洗滌。在4-ml小瓶中的使用0.15ml DMF配制的25.5mg(0.04mmol，1.5當(dāng)量)Fmoc-Asn(Trt)-OH、15.75mg(0.04mmol，1.5當(dāng)量)DPOPOAt和14.89μl(0.09mmol，3當(dāng)量)DIEA(二異丙基乙胺)預(yù)活化七分鐘。在必需的預(yù)活化期間(7分鐘)后，活化的氨基酸的溶液加入到樹脂中。用0.04ml DMF洗滌小瓶，洗滌液也加入上述樹脂。得到的樹脂混合物于室溫反應(yīng)1.5分鐘。DMF(3×10ml)洗滌上樣的樹脂，用10ml DMF配制的20％吡啶進(jìn)行Fmoc基團(tuán)脫保護(hù)7分鐘。DMF(3×10ml)、CH2Cl2(3×10ml)和DMF(3×10ml)洗滌脫保護(hù)的樹脂，然后用Fmoc-Ile-OH進(jìn)行類似的偶聯(lián)步驟。其它氨基酸類似偶聯(lián)，在最終用Fmoc-Val-OH偶聯(lián)并用DMF配制的20％吡啶脫去Fmoc保護(hù)基團(tuán)后，用DMF(3×10ml)、CH2Cl2(3×10ml)、EtOH(5ml)和乙醚(5ml)洗滌上樣的樹脂。然后用10ml 90％三氟乙酸水溶液處理樹脂2小時(shí)，用10ml CH2Cl2配制的10％三氟乙酸和10ml CH2Cl2在過濾器上洗滌樹脂。合并的濾液蒸發(fā)至干。無水乙醚洗滌粗產(chǎn)物4次，離心分離。通過粗產(chǎn)物的重量計(jì)算產(chǎn)率。為了分析，將1mg粗產(chǎn)物溶解于1ml 0.1％三氟乙酸水溶液，直接注射到HPLC柱上分析。使用相同的偶聯(lián)劑重復(fù)該方法直至制備得到SEQ ID NO2所示肽。
使用表3所列每種偶聯(lián)劑重復(fù)該方法來制備SEQ ID NO2所示肽。結(jié)果示于表3。
表3.根據(jù)通過基于HOAt-和HODhbt-偶聯(lián)劑的ACP(65-74)裝配的HPLC分析確定的產(chǎn)物分布，包括各種缺失肽
*反相C-18柱，在20分鐘期間使用0.1％TFA的MeCN溶液和0.1％TFA(1∶19-1∶1)經(jīng)線性梯度洗脫，流速1.0ml/分鐘。b在存在2當(dāng)量的二異丙基乙胺/(當(dāng)量Fmoc-氨基酸/偶聯(lián)劑)時(shí)，在DMF中進(jìn)行偶聯(lián)。c僅得到痕量的所需產(chǎn)物。
在該實(shí)驗(yàn)中，為了在所研究的各種試劑中產(chǎn)生差異，縮短了偶聯(lián)時(shí)間并減少了試劑的過量。在這些條件下，檢測(cè)到Asn到Gly上、Ile到Asn上、Ile到Asp上、Val到Gln上和Ala到Ala或Asp上的不完全加入。色譜圖的分析表明，無論是否有預(yù)活化，新的基于HOAt的有機(jī)磷試劑在這些所謂的“1.5×1.5”條件下與N-HATU一樣有效。在正常偶聯(lián)條件下，例如過量4當(dāng)量的氨基酸/30分鐘偶聯(lián)時(shí)間，除HDTU外所有試劑工作良好。
實(shí)施例22
在以下實(shí)施例中，在CDCl3中研究了有位阻的活化酯CBZ-Aib-Oxt和對(duì)-氯苯胺(PCA)的反應(yīng)。根據(jù)活化酯的芐型CH2單元(δ5.2)的消失和產(chǎn)物的芐型CH2殘基(δ8.5)的出現(xiàn)通過質(zhì)子NMR分析確定大致的半衰期。
CBZ-Aib-Oxt酯.為通過NMR方案跟蹤氨基分解，將Z-Aib-Odhat和PCA的反應(yīng)用作闡述所用標(biāo)準(zhǔn)方法的例子向47.9mg(0.125mmol)CBZ-Aib-Odhat的0.5ml CDCl3溶液中加入15.6mg(0.125mmol)對(duì)-氯苯胺(PCA)。混合物立即轉(zhuǎn)移至放在Hitachi R-1200(60MHz)儀器的探測(cè)器上的NMR試管中。隨著反應(yīng)在NMR檢測(cè)溫度(37℃)的進(jìn)行，對(duì)δ1.8(酯CBZ-Aib-Odhat的CH3殘基)和1.57(酰胺CBZ-Aib-PCA的CH3殘基)處的1H-NMR峰[或δ5.2(酯CBZ-Aib-ODhat的芐型CH2單元)和5.05(酰胺產(chǎn)物的芐型CH2單元)處的峰]進(jìn)行積分可大致測(cè)定相對(duì)速率。示于表4的結(jié)果代表了至少兩次測(cè)定的平均值。
表4.存在對(duì)-氯苯胺時(shí)，CBZ-Aib-Oxt在CDCl3中消失的大致半衰期
發(fā)現(xiàn)Odhat酯甚至比OAt酯略微更有效，而以前發(fā)現(xiàn)OAt酯是這些酯中最有效的衍生物。有趣的是，盡管HODhat，即3-羥基-4-氧代-3，4-二氫-5-氮雜苯并-1，2，3-三嗪和HODhad，即3-羥基-4-氧代-3，4-二羥基-5-氮雜苯并-1，3-二嗪之間結(jié)構(gòu)類似，它們相應(yīng)的活化酯的反應(yīng)性極為不同。不希望受束縛，據(jù)信這可能是由于具有或沒有2-位的氮原子取代促使存在或缺乏額外的相鄰基團(tuán)作用。另一方面，OBt和ODhad酯的比較證實(shí)相鄰羰基的重要性。
實(shí)施例23本實(shí)施例使用了第二種模型。在存在各種比較偶聯(lián)劑時(shí)用芐胺和N-甲基芐胺處理新戊酰基酯，形成下式所示的酰胺
XXV(a)W＝H，W′＝芐基XXV(b)W＝甲基，W′＝芐基。
根據(jù)新戊酰基-Oxt的甲基峰(δ1.5)的消失和產(chǎn)物XXVa(δ1.2)或XXVb(δ1.3)的甲基峰的出現(xiàn)通過質(zhì)子NMR分析確定這些反應(yīng)的半衰期。該方案如下所示Me3CCOOXt酯.如實(shí)施例22的情況一樣，新戊酰基酯與N-甲基芐胺的反應(yīng)用作闡述所用方法的例子向31.0mg(0.125mmol)Me3CCOODhat的0.5ml CDCl3溶液中加入15.1mg(16.1μl，0.125mmol)PhCH2NHMe。混合物立即轉(zhuǎn)移至放在Hitachi R-1200(60MHz)儀器的探測(cè)器上的NMR試管中。隨著反應(yīng)在NMR檢測(cè)溫度(37℃)的進(jìn)行，對(duì)δ1.5(酯Me3CCOODhat的CH3殘基)和1.3(酰胺的CH3殘基)處的1H-NMR峰進(jìn)行積分可大致測(cè)定相對(duì)速率。示于表5的結(jié)果代表了至少兩次測(cè)定的平均值。
結(jié)果制成表5。
表5.Me3CCOODhat在CDCl3中消失的大致半衰期
用芐胺時(shí)，所有反應(yīng)速度快，而用位阻更大的N-甲基衍生物時(shí)，觀察到按照以下順序的明顯不同的反應(yīng)性O(shè)Dhat＞OAt＞ODhbt＞ODhad＞OBt。再次觀察到HODhat酯比衍生自HOAt的酯的反應(yīng)性強(qiáng)。
實(shí)施例24進(jìn)行另一比較研究來比較偶聯(lián)方法的相對(duì)速率，所述方法涉及在存在偶聯(lián)劑時(shí)CBZ-Aib-OH與對(duì)-氯苯胺(PCA)的反應(yīng)。由于中間體Z-Aib-OXt通常很快形成，除非另有指出，通過活化酯的芐型CH2殘基(δ5.2)的消失和產(chǎn)物CBZ-Aib-PCA的芐型CH2單元(δ5.05)的出現(xiàn)來測(cè)定半衰期。該產(chǎn)物的制備方案與實(shí)施例23所述相同。大致的半衰期見表6。在該情況中測(cè)試了各種溶劑系統(tǒng)。
表5.在存在對(duì)-氯苯胺時(shí)，[CBZ-Aib-Oxt]在各種溶劑系統(tǒng)中消失的大致半衰期
aDMF/CDCl3的1∶1混合物。b在該情況中，通過酸Z-Aib-OH的消失和中間體活性酯和酰胺CBZ-Aib-PCA的出現(xiàn)測(cè)定半衰期。
有趣的是，在除DMF外的所測(cè)試的所有溶劑系統(tǒng)中，發(fā)現(xiàn)新偶聯(lián)劑比N-HATU反應(yīng)性更高。在CDCl3中，HDATU是N-HATU的反應(yīng)性的至少6倍，是HDTU的反應(yīng)性的至少8倍。迄今為止，在每種情況中，所測(cè)試的HDATU顯示明顯比HDTU的反應(yīng)性強(qiáng)。
實(shí)施例25為測(cè)試添加劑HODhat和HODhad與偶聯(lián)劑HDATU、HDADU、HDAPyU、HDPyU、PyDAOP和PyDOP的構(gòu)型保持效果，檢測(cè)了以下模型肽系統(tǒng)。這些系統(tǒng)包括一次[1+1]分步偶聯(lián)、三次[2+1]和一次[3+3]片斷偶聯(lián)。
CBZ-Phg-Pro-NH2，CBZ-Phe-Val-Pro-NH2，CBZ-Gly-Phe-Pro-NH2XXVI XXVIIXXVIIICBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe(SEQ ID NO 1)，和H-Gly-Leu-Phe-OBzlXXIXXXX如以前實(shí)施例22和L.A.Carpino等，J.Org.Chem.1990，61，2463所述進(jìn)行測(cè)試偶聯(lián)，其中對(duì)于CBZ-Phg-ProNH2、CBZ-Phe-Val-Pro-NH2、CBZ-Gly-Phe-Pro-NH2和CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-Gly-OMe取代該文獻(xiàn)的表格和方案中的下文所列偶聯(lián)劑，這些測(cè)試的結(jié)果引作參考。就Boc-Gly-Leu-Phe-OBzl(Bzl＝芐基)而言，60.6mg(0.21mmol)的Boc-Gly-Leu-OH、85.45mg(0.20mmol)的H-Phe-OBzl·pTsOH和0.22mmol合適的偶聯(lián)添加劑(HOXt)溶解于1ml DMF或三氟乙醇/三氟甲烷(1∶3體積/體積)。向混合物中加入34.2mg(0.22mmol)EDC(1-乙基-3-3’-(二甲基氨基)-丙基)碳二亞胺的1ml DMF或三氟乙醇/三氟甲烷溶液，整個(gè)混合物于室溫?cái)嚢柽^夜。得到的混合物用25ml EtOAc稀釋，1N HCl(2×10ml)、10％NaHCO3(2×10ml)和鹽水(2×10ml)洗滌，MgSO4干燥。除去溶劑后，稱重固體來測(cè)定產(chǎn)率。然后將固體與2ml 50％的三氟乙酸的二氯甲烷溶液攪拌2小時(shí)以脫去BOC保護(hù)基團(tuán)。然后真空除去三氟乙酸和CH2Cl2，向油狀殘留物中加入20ml無水乙醚，混合物于室溫保存過夜。過濾收集分離出的白色沉淀物并用乙醚洗滌。含有LL-和DL-形式的XXX的約5mg粗產(chǎn)物溶解于4ml MeCN并直接通過HPLC分析，所述HPLC使用反相Waters C-18柱，在20分鐘期間以線性梯度(0.1％三氟乙酸的MeCN溶液和0.1％TFA水溶液，1∶9-11∶9)洗脫，流速1.0ml/分鐘。LL-和DL-形式的XXX的保留時(shí)間分別是17.3和17.9分鐘。結(jié)果如下就氨基甲酸乙酯保護(hù)CBZ-Phg-OH和H-Pro-NH2敏感性偶聯(lián)得到XXVI而言，HDATU在保持構(gòu)型方面比HDTU和N-HBTU更有效，但不如N-HATU。令人意外的是，該系統(tǒng)中使用堿二異丙基乙胺(DIEA)證明比2，4，6-三甲基吡啶(TMP)更令人滿意，該結(jié)果在相應(yīng)的片斷偶聯(lián)的情況中罕見。結(jié)果見表7。
表7.在通過[1+1]偶聯(lián)形成XXVI期間，偶聯(lián)劑、堿和溶劑對(duì)構(gòu)型保持的作用
a在該情況中，1.3ml三氟乙醇-氯仿(1∶3體積/體積)用作溶劑。
使用溶劑三氟乙醇/三氯甲烷配制的碳二亞胺試劑，HODhat甚至比HODhbt更有效。因此，EDC/HODhat得到0.5％的DL-異構(gòu)體，而EDC/HODhbt得到1.3％的DL-同種型。在存在1當(dāng)量的三甲基吡啶時(shí)，使用DCC/HODhat和DCC/HODhbt得到的數(shù)字分別為0.4％和0.8％。
獲得三肽XXVII的CBZ-Phe-Val-OH與H-Pro-NH2片斷偶聯(lián)已得到良好研究，其結(jié)果列于表8。
表8.在通過[2+1]偶聯(lián)形成XXVII期間，偶聯(lián)劑、堿和溶劑對(duì)構(gòu)型保持的作用
*DIEA＝二異丙基乙胺；TMP＝三甲基吡啶就相當(dāng)不敏感的Z-Gly-Phe-OH和H-Pro-NH2的片斷偶聯(lián)情況而言，結(jié)果與XXVII類似。這些結(jié)果列于表9。
表9.在通過[2+1]偶聯(lián)a形成XXVIII期間，偶聯(lián)劑、堿和溶劑對(duì)構(gòu)型保持的作用
a縮寫如上所述。b在這種情況中，1當(dāng)量的DIEA和1當(dāng)量的TMP聯(lián)用作堿。c1.3ml三氟乙醇-氯仿用作溶劑。
就制備三肽XXVIII而言，HDATU與N-HATU類似，甚至略微更有效。
就測(cè)試三肽XXX而言，在存在EDC/添加劑(偶聯(lián)劑)時(shí)在各種溶劑中偶聯(lián)H-Phe-OBzl TosOH和Boc-Gly-Leu-OH得到產(chǎn)物Boc-Gly-Leu-Phe-Obzl，該產(chǎn)物經(jīng)50％TFA/CH2Cl2處理BOC-脫保護(hù)得到可直接用HPLC分析的粗品三肽。
在三氟乙醇/氯仿(1∶3體積/體積)中進(jìn)行的EDC介導(dǎo)XXX合成中，發(fā)現(xiàn)3種添加劑HODhat、HODhbt、HOAt效果相同，均觀察到低于0.1％的差向異構(gòu)化。溶劑換作DMF，可注意到差異(雖然很小)。這些結(jié)果示于表10。
表10.在通過[2+1]偶聯(lián)形成XXX期間，偶聯(lián)劑、堿和溶劑對(duì)構(gòu)型保持的作用
b使用組合溶劑三氟乙醇-氯仿(1∶3體積/體積)。
用簡單的二肽和三肽模型XXVI、XXVII、XXVIII和XXX進(jìn)行初步研究后，裝配測(cè)試肽XXIX。就偶聯(lián)劑和堿的性質(zhì)而言，偶聯(lián)Z-Gly-Gly-Val-OH和H-Ala-Gly-Gly-OMe是敏感的測(cè)試。在存在三甲基吡啶時(shí)，在DMF中進(jìn)行反應(yīng)的結(jié)果總結(jié)于表11。發(fā)現(xiàn)HDATU比N-HATU和其它偶聯(lián)劑更有效地防止纈氨酸處的構(gòu)型喪失。按照以下順序，注意到了達(dá)8.2％的DL-形差向異構(gòu)化水平HDATU＜N-HATU＜HDTU＜N-HBTU。
表11.在通過[3+3]偶聯(lián)形成XXIX期間，偶聯(lián)劑、堿和溶劑對(duì)構(gòu)型保持的作用
實(shí)施例26為證實(shí)新的基于HODhat的偶聯(lián)劑HDATU的溶解度并比較其與相應(yīng)的胍/脲類似物N-HATU和HDTU在固相合成中的性能，按照實(shí)施例22所述的Fmoc/叔丁基保護(hù)方案進(jìn)行了30次ACP片斷H-Val-Gln-Ala-Ala-Ile-Asp-Tyr-Ile-Asn-GlyNH2，(SEQ.ID.No.2)的合成。攜帶Fmoc-甘氨酸的聚乙二醇-聚苯乙烯(PEGPS)樹脂用作固體載體。為在所研究的各種偶聯(lián)劑中造成差異，手工進(jìn)行肽延伸，這樣縮短了偶聯(lián)時(shí)間并降低試劑過量。在這些條件下，檢測(cè)到Asn到Gly上、Ile到Asn上、Ile到Asp上、Val到Gln上的不完全加入。在室溫下用TFA-H2O(9∶1)處理2小時(shí)將肽從樹脂上切割下后，通過反相HPLC檢測(cè)其純度。結(jié)果見表12。
表12.根據(jù)基于HODhat-HOAt-和HODhbt-偶聯(lián)劑b的ACP裝配的HPLC分析a確定產(chǎn)物，包括各種缺失肽的分配
a反相C-18柱，在20分鐘期間使用0.1％TFA的MeCN溶液和0.1％TFA水溶液(1∶19-1∶1)經(jīng)線性梯度洗脫，流速1.0ml/分鐘。b在所有HDATU-或HODhat-介導(dǎo)的合成中，在氨基酸(除Ile和Val外)偶聯(lián)期間，2-5分鐘內(nèi)觀察到亮黃色向橙紅色的變化。c在存在2當(dāng)量的二異丙基乙胺/(當(dāng)量Fmoc-氨基酸/偶聯(lián)劑)時(shí)，在DMF或CH2Cl2中進(jìn)行偶聯(lián)。dHPLC曲線上在20分鐘后出現(xiàn)的額外峰。e五氟苯基酯。f僅使用1當(dāng)量的HODhat作為催化劑。g僅使用1當(dāng)量的HODhbt作為催化劑。
圖譜分析表明，HDATU在所有檢測(cè)的條件下均遠(yuǎn)比HDTU有效，甚至在一些情況中比N-HATU更有效。發(fā)現(xiàn)二氯甲烷是特別適用于HDATU介導(dǎo)的ACP合成的溶劑。因此，在使用CH2Cl2的所謂“1.5×1.5”條件下，HDATU得到純度為47％的十肽，而N-HATU和HDTU分別僅得到純度為21％和4％的所需產(chǎn)物。當(dāng)采用4當(dāng)量過量的試劑和3分鐘偶聯(lián)時(shí)間時(shí)，用HDATU得到(純度)86％的酰基載體蛋白(ACP)，而用N-HATU和HDTU分別得到78％和31％。
在使用DMF的“1.5×1.5”條件下，無論是否有預(yù)活化，HDATU的性能可能不如N-HATU有效。此外，就制備含有位阻大的Aib-Aib單元的模型五肽H-Tyr-Aib-Aib-Phe-Leu-NH2(SEQ ID NO3)而言，HDATU無論在DCM或DMF中均不能得到與用N-HATU相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。例如采用4當(dāng)量過量的氨基酸、7分鐘預(yù)活化和30分鐘偶聯(lián)時(shí)間，HDATU在DMF中得到純度為31％的肽，而用N-HATU得到純度為91％的肽。
然而，在正常條件下發(fā)現(xiàn)HDATU總體上是更好的試劑。因此，當(dāng)采用2-當(dāng)量過量的試劑，無預(yù)活化的5分鐘偶聯(lián)時(shí)，使用HDATU得到純度97％的ACP，而用N-HATU和HDTU得到的相應(yīng)純度為94和81％。采用4當(dāng)量/30分鐘偶聯(lián)條件以及7分鐘預(yù)活化時(shí)間，使用HDATU獲得優(yōu)秀的純度(95％)，而用N-HATU和HDTU得到的ACP純度分別為86和62％。
使用DIC/HODhat作為偶聯(lián)劑也得到了滿意的結(jié)果。雖然HODhat在苛刻條件下(“1.5×1.5”)不合適，它可在正常條件下的Fmoc-氨基酸五氟苯基(Pfp)酯偶聯(lián)中用作優(yōu)秀的催化劑和指示劑。使用HODhbt觀察到比亮黃色-淡黃色更明顯的亮黃色-橙紅色顏色變化。在包括3當(dāng)量五氟苯基酯和30分鐘偶聯(lián)時(shí)間的條件下，HODhat和HODhbt在DMF中均得到純度超過85％的所需ACP產(chǎn)物。
實(shí)施例27Fmoc-Ile-Odhat方法A.在干燥N2氣氛中，F(xiàn)moc-Ile-OH(0.3534g，1mmol)、HODhat(0.1805g，1.1mmol)和SOCl2(0.73ml，10mmol)的8ml干燥CH2Cl2懸液回流過夜。蒸發(fā)CH2Cl2和過量的SOCl2得到黃色固體，該固體通過短硅膠柱以EtOAc-CH2Cl2(1∶1體積/體積)混合物作為洗脫劑經(jīng)快速層析純化，CH2Cl2-苯-乙醚-己烷重結(jié)晶兩次后得到0.42g(81％)白色固體的分析純酯熔點(diǎn)160.5-162℃；1H NMR(CDCl3)δ9.15(dd，1)，8.58(dd，1)，7.96(dd，1)，7.76(dd，2)，7.61(dd，2)，7.27-7.44(m，4)，5.20(d，1)，4.88(q，1)，4.49(d，2)，4.26(t，1)，2.21(m，1)，1.70(m，1)，1.34(m，1)，1.15(d，3)，1.05(t，3)；IR(KBr)1811(s，COO)，1738(vs，CONN)，1692(vs，NHCO)cm-1。C27H25N5O5的分析計(jì)算值為C，64.91；H，5.04；N，14.02。實(shí)測(cè)值C，64.77；H，5.23；H，13.94。
方法B.在干燥N2氣氛中，在0℃將0.1854g(0.5mmol)Fmoc-Ile-Cl加入HODhat(0.0821g，0.5mmol)和DIEA(95.8μl，0.55mmol)的10mlCH2Cl2溶液，同時(shí)攪拌。在0℃繼續(xù)攪拌30分鐘，然后于室溫?cái)嚢?小時(shí)。得到的淡黃色溶液用CH2Cl2稀釋至30ml并用冰冷的鹽水(2×15ml)快速洗滌。MgSO4干燥后除去溶劑，CH2Cl2-乙醚-己烷重結(jié)晶淡黃色粘性固體兩次得到白色固體的分析純的上述酯熔點(diǎn)161-162℃；NMR和IR圖譜與方法A所獲得樣品的相同。
實(shí)施例28采用Carpino等，J.Org.Chem.，1995，60，3561的文章(其內(nèi)容引作參考)中表2的腳注a所述方法來檢測(cè)使用各種偶聯(lián)劑偶聯(lián)CBZ-Phe-Val-OH和H Pro-NH2形成CBZ-Phe-Val-Pro-NH2。所用的一些偶聯(lián)劑是本領(lǐng)域其它地方所述的，而其它使用的是本發(fā)明的偶聯(lián)劑。更具體地說，就碳二亞胺偶聯(lián)而言，0.105mmol Z-Phe-Val-OH、0.1mmol H-Pro-NH2和0.11mmol本文下表所示的偶聯(lián)劑溶解于1mL DMF或1.3mL TFE/TCM(三氟乙醇/氯仿)(1∶3)，溶液在冰浴中冷卻并用0.11mmol EDC、EDC-HCl或DCC處理。如果加入堿，則要給出當(dāng)量值。混合物在0℃攪拌1小時(shí)，然后于室溫?cái)嚢柽^夜。混合物用25mL EtOAc稀釋，用1N NCl(2×5mL)、1NNaHCO3(2×5mL)和飽和的NaCl(2×5mL)萃取，MgSO4干燥，除去溶劑，粗品肽直接通過HPLC分析。就鹽偶聯(lián)而言，在0℃用0.125mmol偶聯(lián)劑處理1ml DMF配制的0.125mmol酸、0.125mmol酰胺和0.25mmol堿，反應(yīng)混合物在0℃攪拌1小時(shí)，再于室溫?cái)嚢钄嚢?-3小時(shí)，然后進(jìn)行本文所述的后處理。當(dāng)使用添加劑時(shí)，可加入一當(dāng)量或多當(dāng)量(括號(hào)中)的堿。測(cè)定以LDL差向異構(gòu)體的存在表示的構(gòu)型喪失的量。這些結(jié)果列于表13。
表13.溶液中的[2+1]片斷偶聯(lián)(CBZ-Phe-Val-OH+H-Pro-NH2)
實(shí)施例29使用Carpino等，Tetrahedron 1999，55，6813的文章(其內(nèi)容引作參考)所述的方法進(jìn)行Fmoc-Asp(叔丁基)-Phe-OH和F-moc-Lys(BOC)-PAL-PEG的偶聯(lián)以形成Fmoc-Asp-(叔丁基)-Phe-Lys(-Boc)-PAL-PEG。所用的一些偶聯(lián)劑是本領(lǐng)域其它地方所述的，而其它使用的是本發(fā)明的偶聯(lián)劑。偶聯(lián)反應(yīng)如下進(jìn)行通過用20％哌啶/DMF處理7分鐘對(duì)50mgH-Lys(Boc)-PAL-PEG-PS樹脂脫保護(hù)，用DMF、DCM和DMF(每種3×5mL)洗滌樹脂，然后加入5倍過量(5-fold excess)(0.0475mmol)的Fmoc-Asp(O-叔丁基)-Phe-OH(26.5mg)、5倍過量的表14所示的偶聯(lián)劑和11.5mg(0.095mmol)TMP或12.3mg DIEA(10倍過量)的堿(如果有的話)。在每種情況中，偶聯(lián)劑和堿溶解于0.2mL溶劑，得到的溶液加入用作反應(yīng)器的小注射器中的樹脂。溶解需要約1分鐘(或不到)，每樣物質(zhì)溶解后立即小心地加入溶液。該方法稱為“低預(yù)活化方法”。預(yù)活化開始即計(jì)時(shí)。每10分鐘用特氟隆棒輕柔攪拌混合物，共進(jìn)行約1小時(shí)，然后靜置12小時(shí)再用DMF和DCM(每種3×5mL)洗滌樹脂并通過在室溫下用3ml TFA/H2O(9∶1)處理1.5小時(shí)來脫保護(hù)。真空除去溶劑，殘留物溶解于CH3-CN并直接注射到以下條件的HPLC柱上4μ60A，C18 Waters Nova-pak柱，3.9×150mm；流速1mL/分鐘；Waters 996 PDA檢測(cè)器；在20分鐘內(nèi)用CH3CN/H2O/0.1％ TFA以線性梯度10/30洗脫，然后以等溶劑(isocratic)30/70洗脫20分鐘；Rt(LLL-)28.5分鐘，(LDL-)30.5分鐘。測(cè)定以LDL差向異構(gòu)體的存在表示的構(gòu)型喪失的量。這些結(jié)果列于表14。
表14.固相條件6下的[2+1]片斷偶聯(lián)(FmocAsp(叔丁基)-Phe-OH+H-Lys(BOC)-PAL-PEG)
實(shí)施例30采用實(shí)施例29的方法，使用本發(fā)明的叔丁基-DtP-OAt和O-HATU偶聯(lián)CBZ-Gly-Gly-Val-OH和H-Ala-Gly-Gly-PAL-Peg形成CBZ-Gly-Gly-Val-Ala-Gly-GlyPAL-PEG(序列ID 4)。測(cè)定形成的LDL差向異構(gòu)體的量來確定構(gòu)型喪失的量。這些結(jié)果列于下表15。
表15.固相條件下的[3+3]片斷偶聯(lián)(CBZ-Gly-Gly-Val-OH+H-Ala-Gly-Gly-PAL-PEG)
用所謂的“1.5×1.5”方案通過固相合成ACP十肽強(qiáng)調(diào)了本發(fā)明的偶聯(lián)劑，包括叔丁基-Dtp-OAt的高偶聯(lián)效率。在這些所要求的條件下不難得到各種偶聯(lián)劑的偶聯(lián)效率。在存在3當(dāng)量堿時(shí)，使用1.5當(dāng)量過量的受保護(hù)氨基酸和1.5當(dāng)量的偶聯(lián)劑進(jìn)行1.5分鐘的偶聯(lián)。
就采用1.5×1.5方案的手工固相合成ACP而言，利用Carpino等，J.Chem.Soc.Chem.Comm，1994，201(其內(nèi)容引作參考)的方法并使用O-HATU、Dtp-OAt和叔丁基-Dtp-OAt分別得到純度為76％、60％和74％的粗品肽。因此，鑒于以前所述最佳的試劑，新的基于磷的偶聯(lián)劑至少與O-HATU效率相當(dāng)。
給出以上優(yōu)選的實(shí)施方案和實(shí)施例是為了說明本發(fā)明的范圍和構(gòu)思。這些實(shí)施方案和實(shí)施例使得本領(lǐng)域技術(shù)人員不難想出其它實(shí)施方案和實(shí)施例。這些其它實(shí)施方案在本發(fā)明的考慮范圍內(nèi)。因此，本發(fā)明僅受限于附加的權(quán)利要求。
序列表序列表<110>L.A.卡爾皮諾(Carpino，Louis A.)夏舉松(Xia，Jusong)張重武(Zhang，Chongwu)C.D.斯弗迪恩(Sferdean，Calin Dan)<120>肽合成的新偶聯(lián)劑<130>P11588<160>4<170>PatentIn version 3.3<210>1<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成的肽，氨基末端的Gly被CBZ保護(hù)；Gly的甲酯位于羧基末端<400>1Gly Gly Val Ala Gly Gly1 5<210>2<211>9<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成的肽，Gly的酰胺位于羧基末端<400>2Val Gln Ala Ala Asp Tyr Ile Asn Gly1 5<210>3<211>5<212>PRT
<213>人工序列<220>
<223>合成的肽，兩種情況中Xaa均是Aib；Leu的酰胺位于羧基末端<220>
<221>misc_feature<222>(2)..(3)<223>Xaa是Aib<400>3Tyr Xaa Xaa Phe Leu1 5<210>4<211>6<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>合成的肽，氨基末端的Gly被CBZ保護(hù)；羧基末端的Gly與固相樹脂相連<400>4Gly Gly Val Ala Gly Gly1 權(quán)利要求
1.一種從氨基化合物和羧酸的酰基化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)含有6-14個(gè)環(huán)碳原子，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基；X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；Q是CR8R9或NR8；n是0或1；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；或者R8與R4結(jié)合在Q和Y之間形成鍵，或者R8可與R6結(jié)合在Q和X之間形成鍵；前提是X和Q與Q和Y之間不同時(shí)具有雙鍵；或者當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q不存在時(shí)，R4和R6可在X和Y之間形成鍵；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；T是O、S、NR31或(CHR31)；R31是氫或低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；和Rb1、Rc1、Rb2和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CH2、O、S或NR30，其中R30是氫或低級(jí)烷基。
2.一種從有機(jī)胺和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)形成酰胺的方法，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基；X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；Q是CR8R9或NR8；n是0或1；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；或者R8與R4結(jié)合在Q和Y之間形成鍵，或者R8可與R6結(jié)合在Q和X之間形成鍵；前提是X和Q與Q和Y之間不同時(shí)具有雙鍵；或者當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q不存在時(shí)，R4和R6可在X和Y之間形成鍵；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自S、O、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；T是O、S、NR31或(CHR31)；R31是氫或低級(jí)烷基；和Rb1、Rc1、Rb2和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)。
3.一種肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸與固相肽合成樹脂共價(jià)偶聯(lián)，切除Nα-氨基保護(hù)基團(tuán)，得到的游離氨基經(jīng)肽鍵與第二Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸的羧基偶聯(lián)，重復(fù)該循環(huán)直至獲得所需肽，然后從所述樹脂上切下肽，改進(jìn)之處包括向偶聯(lián)步驟加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基或X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；Q是CR8R9或NR8；n是0或1；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；或者R8與R4結(jié)合在Q和Y之間形成鍵，或者R8可與R6結(jié)合在Q和X之間形成鍵；前提是X和Q與Q和Y之間不同時(shí)具有雙鍵；或者當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q不存在時(shí)，R4和R6可在X和Y之間形成鍵；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31和R31是氫或低級(jí)烷基。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述化合物具有下式 或其N-氧化物或其鹽。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成苯環(huán)或雜芳基環(huán)，其中所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，至少一個(gè)硫環(huán)原子或至少1個(gè)氧環(huán)原子或至少兩個(gè)氮環(huán)原子，所述雜芳基環(huán)可以是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代。
6.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)含有6-14個(gè)環(huán)碳原子，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基；X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；n是0或1；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
7.如權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是N或CR5；R5是氫或低級(jí)烷基；X是CR7或N；R7是氫或低級(jí)烷基；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基或者R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH或(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連，和R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，R13是 其中R12和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
10.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，R13是 其中R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
11.如權(quán)利要求1或2所述從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，其特征在于，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自S、O、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；T是O、S、NR31或(CHR31)；R31是氫或低級(jí)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；
12.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，所述R3是 其中R10是低級(jí)烷基或芳基或OR12；R11是低級(jí)烷基或芳基或OR13；R12是低級(jí)烷基和R13是低級(jí)烷基。
13.如權(quán)利要求12所述的方法，其特征在于，所述化合物如下式所示；
14.如權(quán)利要求11所述的方法，其特征在于，T是(CH2)、O、S或NH。
15.如權(quán)利要求14所述的方法，其特征在于，T是CH2或O。
16.如權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述羧酸的酰化衍生物是BLK-AA-M，其中BLK是氨基保護(hù)基團(tuán)；AA是氨基酸，M是OH、鹵素或 每個(gè)Ra獨(dú)立為鹵素、低級(jí)烷基或吸電子基團(tuán)，b是0-5。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，所述BLK是FMOC、BOC、TEOC、Aoc、Adoc、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Foc、Moz、Nps、Dts、Cbz、Bspoc、Bsmoc、NPS、甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基。
18.如權(quán)利要求17所述的方法，其特征在于，所述BLK是Cbz、Bspoc或BOC。
19.如權(quán)利要求16所述的方法，其特征在于，Ra是氰基或硝基。
20.一種如下式所示化合物 或其N-氧化物或其鹽，其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自氧、氮和硫的雜原子，所述芳基和雜芳基環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基或X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；Q是CR8R9或NR8；n是0或1；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；或者R8與R4結(jié)合在Q和Y之間形成鍵，或者R8可與R6結(jié)合在Q和X之間形成鍵；前提是X和Q與Q和Y之間不同時(shí)具有雙鍵；或者當(dāng)Y是NR4或CR4R5并且當(dāng)Q不存在時(shí)，R4和R6可在X和Y之間形成鍵；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自S、O、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；R31是氫或低級(jí)烷基。
21.如權(quán)利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其鹽， 其特征在于，R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香族，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基；X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；Q是CR8R9或NR8；R8和R9獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R7和R8與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；或者R8與R4結(jié)合在Q和Y之間形成鍵，或者R8可與R6結(jié)合在Q和X之間形成鍵；前提是X和Q與Q和Y之間不同時(shí)具有雙鍵；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自S、O、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
22.如權(quán)利要求20和21所述的化合物，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是苯基或萘基，所述雜芳環(huán)是含有3-13個(gè)環(huán)碳原子的含氧、硫或氮的雜芳香族，并且含有至少1個(gè)硫環(huán)原子或至少1個(gè)氧環(huán)原子或至少2個(gè)氮環(huán)原子，所述芳環(huán)或雜芳環(huán)可各自為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代。
23.如權(quán)利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其鹽， 其特征在于，R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是O、NR4或CR4R5；R5是氫或低級(jí)烷基；R4是氫或低級(jí)烷基；X是CR6R7或NR6；R6和R7獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，或者R6和R7結(jié)合在一起，形成氧代；n是0或1；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
24.如權(quán)利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其鹽， 其特征在于，R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳基或雜芳基環(huán)，其中所述芳基環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳基環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可各自獨(dú)立是未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y是N或CR5；R5是氫或低級(jí)烷基；X是CR7或N；R7是氫或低級(jí)烷基；R3是 R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
25.如權(quán)利要求20-24中任一項(xiàng)所述的化合物，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH或(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連；且R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
26.如權(quán)利要求25所述的化合物，其特征在于，所述R3是 其中R10和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
27.如權(quán)利要求25所述的化合物，其特征在于，所述R3是 其中R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
28.如權(quán)利要求20所述的如下式所示化合物或其N-氧化物或其鹽
29.如權(quán)利要求28所述的化合物，其特征在于，所述R3是 其中R10是低級(jí)烷基或芳基或OR12；R11是低級(jí)烷基或芳基或OR10；R12是低級(jí)烷基和R13是低級(jí)烷基。
30.如權(quán)利要求29所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示
31.如權(quán)利要求28所述的化合物，其特征在于，所述化合物是 其中Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，T是O、S、NH或CH2。
32.一種從氨基化合物和羧酸的酰基化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或其陽離子部分如下式所示的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳環(huán)，其中所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基； R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
33.一種從有機(jī)胺和羧酸的酰基化衍生物之間的反應(yīng)形成酰胺的方法，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或含有如下式所示陽離子部分的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳環(huán)，其中所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是 氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
34.一種肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸與固相肽合成樹脂共價(jià)偶聯(lián)，切除Nα-氨基保護(hù)基團(tuán)，得到的游離氨基經(jīng)肽鍵與第二Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸的羧基偶聯(lián)，重復(fù)該循環(huán)直至然后從所述樹脂上切下所需肽，改進(jìn)之處包括向偶聯(lián)步驟加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示陽離子部分的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳環(huán)，其中所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、芳基低級(jí)烷基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
35.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，額外存在脫水劑。
36.如權(quán)利要求35所述的方法，其特征在于，所述脫水劑是DCC或EDC。
37.如權(quán)利要求32或33所述的方法，其特征在于，所述羧酸的酰化衍生物是BLK-AA-M，其中BLK是氨基保護(hù)基團(tuán)；AA是氨基酸；M是OH、鹵素或 Ra獨(dú)立為鹵素、低級(jí)烷基、氫或吸電子基團(tuán)；b是0-5。
38.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述BLK是Fmoc、BOC、TEOC、Aoc、Adoc、Bpoc、Azoc、Ddz、Poc、Foc、Moz、Nps、Dts、Cbz、Bspoc、Bsmoc、Nps、甲酰基、乙酰基或三氟乙酰基。
39.如權(quán)利要求38所述的方法，其特征在于，所述BLK是Cbz、Bspoc、Bsmoc或BOC。
40.如權(quán)利要求37所述的方法，其特征在于，所述吸電子基團(tuán)是硝基或氰基。
41.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述供電子基團(tuán)是低級(jí)烷基氨基、二低級(jí)烷基氨基、氨基、低級(jí)烷氧基、芳氧基、merchant、低級(jí)烷硫基或羥基。
42.如權(quán)利要求41所述的方法，其特征在于，所述供電子基團(tuán)是二低級(jí)烷基氨基或低級(jí)烷氧基。
43.如權(quán)利要求42所述的方法，其特征在于，所述供電子基團(tuán)是OMe或Me2N。
44.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述R14是如下式所示的帶正電荷的吸電子基團(tuán) 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者R18和R19與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳環(huán)原子的環(huán)；或者R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，形成含有最多共5個(gè)碳環(huán)原子的5或6元含氮雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R20可與和它們相連的氮原子和碳原子結(jié)合在一起，形成雜環(huán)基環(huán)；或者R22和R23與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)；或者R24和R25與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)。
45.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述R14是 其中R19、R20和R21、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；n1是0或1。
46.如權(quán)利要求45所述的方法，其特征在于，所述R19和R21或R24和R25是相同的。
47.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述R14是 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH2CH2OCH2CH3。
48.如權(quán)利要求47所述的方法，其特征在于，所述R23、R22、R20、R21、R24、R25是相同的，或者R18、R19和R20是相同的，或者R19和R21是相同的。
49.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述R14是 低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、芳基羰基、 其中U是 CH2或O。
50.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述R14是
51.如權(quán)利要求50所述的方法，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH和(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連，m是1-3；與R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
52.如權(quán)利要求51所述的方法，其特征在于，R14是 其中R12和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
53.如權(quán)利要求51所述的方法，其特征在于，R13是R14是 其中R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
54.如權(quán)利要求44所述的方法，其特征在于，所述化合物是其陽離子部分如下式所示的鹽
55.如權(quán)利要求32-34所述的方法，其特征在于，所述化合物如下式所示 其中Rb、Rb1、Rc和Rc1獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫；T是CH2、NH、O或S。
56.一種化合物或鹽，其中所述化合物或所述鹽的陽離子如下式所示 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成雜芳環(huán)，其中所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通選自過O、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR30；和R31是氫或低級(jí)烷基。
57.如權(quán)利要求56所述的鹽，其特征在于，R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)。
58.如權(quán)利要求57所述的鹽，其特征在于，所述R14是如下式所示的吸電子基團(tuán) 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者R18和R19與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳環(huán)原子的環(huán)；或者R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，形成含有最多共5個(gè)環(huán)碳環(huán)原子的5或6元含氮雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R20可與和它們相連的氮原子和碳原子結(jié)合在一起形成雜環(huán)基環(huán)；或者R22和R23與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)；或者R24和R25與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)。
59.如權(quán)利要求58所述的鹽，其特征在于，R14是 其中R19、R20、R21、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基，n1＝0或1。
60.如權(quán)利要求59所述的鹽，其特征在于，所述R19和R21或R24和R25是相同的。
61.如權(quán)利要求56所述的鹽，其特征在于，所述R14是 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH2CH2OCH2CH3。
62.如權(quán)利要求61所述的鹽，其特征在于，所述R23、R22、R20、R21、R24、R25是相同的，或者R18、R19和R20是相同的，或者R19和R21是相同的。
63.如權(quán)利要求56所述的化合物或鹽，其特征在于，所述R14是 低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、芳基羰基、 其中U是 CH2或O。
64.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，所述R14是
65.如權(quán)利要求64所述的化合物，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH和(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連；m是1-3；且R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
66.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，R14是 其中R10和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
67.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，R14是R14是 其中R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
68.如權(quán)利要求56所述的化合物或鹽，其特征在于，所述化合物或鹽的陽離子部分如下式所示
69.如權(quán)利要求56所述的化合物或鹽，其特征在于，所述化合物或鹽的陽離子部分如下式所示
70.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物或鹽的陽離子部分如下式所示 其中A是N或CR24；D是CR25或N；E是CR26或N；G是CR27或N；R24、R25、R26和R27獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)，或者R25和R26或R24和R25或R26和R27與和它們分別相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)；其中A、D、E、G中至少一個(gè)是N；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、芳基低級(jí)烷基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
71.一種化合物或鹽，其中所述化合物或鹽的陽離子部分如下式所示 其中D是CR25或N；E是CR26或N；J是NR28、O、CR28R29或S(O)p；R25和R26獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)，或者R25和R26與和它們分別相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)；R28是氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；R29是氫或低級(jí)烷基；p是0、1或2；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
72.如權(quán)利要求70所述的化合物或鹽，其特征在于，所述化合物或陽離子部分如下式所示 其中A是N或CR24；D是CR25或N；E是CR26或N；G是CR27或N；R24、R25、R26和R27獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基；其中A、D、E、G中至少一個(gè)是N；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
73.如權(quán)利要求72所述的化合物，其特征在于，所述R14是 其中R10和R11、Rb1、Rb2、Rc1、Rc2獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基，T是O、CH2、NH或S，環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為芳香環(huán)。
74.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，所述R14是 其中R12、R13、Rb1、Rb2、Rc1和Rc2獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為苯基；和T是CH2、O、S或NH。
75.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物是鹽，其陽離子部分如下式所示
76.如權(quán)利要求56所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示 其中Rb、Rb1、Rc、Rc1獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫；T是CH2、NH、O或S。
77.一種從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或其陽離子部分如下式所示的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
78.如權(quán)利要求77所述的方法，其特征在于，額外存在脫水劑。
79.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述脫水劑是DCC或EDC。
80.如權(quán)利要求77所述的方法，其特征在于，所述結(jié)合在一起的R1和R2是芳香環(huán)。
81.如權(quán)利要求80所述的方法，其特征在于，所述R14是如下式所示帶正電荷的吸電子基團(tuán) 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者R18和R19與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳環(huán)原子的環(huán)；或者R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，形成含有最多共5個(gè)碳環(huán)原子的5或6元含氮雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R20可與和它們相連的氮原子和碳原子結(jié)合在一起形成雜環(huán)基環(huán)；或者R22和R23與和它們相連的原子結(jié)合在一起形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)；或者R24和R25與和它們相連的碳原子結(jié)合形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)。
82.如權(quán)利要求81所述的方法，其特征在于，R14是 其中R19、R20、R21、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基，n1＝0或1。
83.如權(quán)利要求82所述的方法，其特征在于，所述R14是 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH2CH2OCH2CH3。
84.如權(quán)利要求83所述的方法，其特征在于，所述R14是 低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、芳基羰基、 其中U是 CH2或O。
85.如權(quán)利要求77所述的方法，其特征在于，所述R14是
86.如權(quán)利要求85所述的方法，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基或芳基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH和(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連；m是1-3；且R12是低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
87.如權(quán)利要求86所述的方法，其特征在于，R14是 其中R12和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
88.如權(quán)利要求77所述的方法，其特征在于，所述化合物是鹽，其陽離子部分如下式所示
89.一種從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)形成酰胺的方法，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或含有如下式所示陽離子部分的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
90.如權(quán)利要求89所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳基。
91.如權(quán)利要求89所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成苯基。
92.一種肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸與固相肽合成樹脂共價(jià)偶聯(lián)，切除Nα-氨基保護(hù)基團(tuán)，得到的游離氨基經(jīng)肽鍵與第二Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸的羧基偶聯(lián)，重復(fù)該循環(huán)直至從所述樹脂上切下所需肽，改進(jìn)之處包括向偶聯(lián)步驟加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示陽離子部分的鹽 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
93.如權(quán)利要求92所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳基。
94.如權(quán)利要求93所述的改進(jìn)的方法，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成苯基。
95.一種化合物或鹽，其中所述化合物或所述鹽的陽離子部分如下式所示 其中R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；Y1是N或CR15；R15是H或低級(jí)烷基；Q1是N或CR16；R16是H或低級(jí)烷基；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12是低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
96.如權(quán)利要求95所述的化合物或鹽，其特征在于，所述結(jié)合在一起的R1和R2是芳基。
97.如權(quán)利要求96所述的化合物或鹽，其特征在于，所述結(jié)合在一起的R1和R2是苯基。
98.如權(quán)利要求96所述的鹽，其特征在于，R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)。
99.如權(quán)利要求98所述的鹽，其特征在于，所述R14是如下式所示帶正電荷的吸電子基團(tuán) 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者R18和R19與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳環(huán)原子的環(huán)；或者R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，形成含有最多共5個(gè)碳環(huán)原子的5或6元含氮雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R20可與和它們相連的氮原子和碳原子結(jié)合在一起形成雜環(huán)基環(huán)；或者R22和R23與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)；或者R24和R25與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)。
100.如權(quán)利要求99所述的鹽，其特征在于，R14是 其中R19、R20、R21、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基，n1＝0或1。
101.如權(quán)利要求100所述的鹽，其特征在于，所述R14是 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH2CH2OCH2CH3。
102.如權(quán)利要求96所述的化合物或鹽，其特征在于，所述R14是 低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、芳基羰基、 其中U是 CH2或O。
103.如權(quán)利要求96所述的化合物，其特征在于，所述R14是
104.如權(quán)利要求96所述的化合物，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH和(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連；m是1-3；與R12是低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
105.如權(quán)利要求103所述的化合物，其特征在于，R14是
106.如權(quán)利要求104所述的化合物，其特征在于，R14是
107.如權(quán)利要求77所述的化合物或鹽，其特征在于，所述化合物或鹽的陽離子部分如下式所示
108.如權(quán)利要求107所述的下式所示化合物或鹽 其特征在于，T是CH2、NH、O或S。
109.一種如下式所示的化合物或其陽離子部分如下式所示的鹽， 或其N-氧化物或鹽其中Y1或Q之一是CR15，另一個(gè)是N或CH；Y1是H或低級(jí)烷基；R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是(CHR31)、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
110.如權(quán)利要求109所述的化合物或鹽，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)。
111.如權(quán)利要求109所述的化合物或鹽，其特征在于，所述R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成雜芳環(huán)。
112.如權(quán)利要求109所述的鹽，其特征在于，R14是帶正電荷的吸電子基團(tuán)。
113.如權(quán)利要求112所述的鹽，其特征在于，所述帶正電荷的吸電子基團(tuán)如下式所示 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23和R24獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基；或者R18和R19與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳環(huán)原子的環(huán)；或者R20和R21與和它們相連的氮原子結(jié)合在一起，形成含有最多共5個(gè)碳環(huán)原子的5或6元含氮雜環(huán)基環(huán)；或者R18和R20可與和它們相連的氮原子和碳原子結(jié)合在一起，形成雜環(huán)基環(huán)；或者R22和R23與和它們相連的原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)；或者R24和R25與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起，形成含有最多6個(gè)環(huán)原子和最多共5個(gè)碳原子的環(huán)。
114.如權(quán)利要求113所述的鹽，其特征在于，R14是 其中R19、R20、R21、R24和R25獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或低級(jí)烷氧基低級(jí)烷基，n1＝0或1。
115.如權(quán)利要求114所述的鹽，其特征在于，所述R14是 其中R18、R19、R20、R21、R22、R23、R24和R25獨(dú)立是氫、甲基、乙基、丙基、丁基、戊基或CH2CH2OCH2CH3。
116.如權(quán)利要求114所述的鹽，其特征在于，所述R14是 低級(jí)烷基羰基、低級(jí)芳基烷基羰基、芳基羰基、 其中U是 CH2或O。
117.如權(quán)利要求109所述的化合物，其特征在于，所述R14是
118.如權(quán)利要求117所述的化合物，其特征在于，所述R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NH和(CH2)m的橋連基團(tuán)任選相連；m是1-3；與R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、芳基或芳基低級(jí)烷基。
119.如權(quán)利要求118所述的化合物，其特征在于，所述R12和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
120.如權(quán)利要求118所述的化合物，其特征在于，R14是 其中R12和R11獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
121.如權(quán)利要求118所述的化合物，其特征在于，所述R14是 其中R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基或芳基。
122.如權(quán)利要求109所述的化合物，其特征在于，所述化合物如下式所示或所述鹽的陽離子部分如下式所示 其中A是N或CR24；D是N或CR25；E是N或CR26；G是N或CR27；R24、R25、R26和R27獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；或者R25和R26或R24和R25或R26和R27與分別和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)。
123.如權(quán)利要求109所述的化合物，其特征在于，所述化合物或所述鹽的陽離子部分如下式所示 其中D是CR25或N；E是CR26或N；J是NR28、O、CR28R29或S(O)p；R25和R26獨(dú)立為氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)，或者R25和R26與和它們分別相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)；R28是氫或低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；R29是氫或低級(jí)烷基；和p是0、1或2。
124.一種從氨基化合物和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)制備肽鍵的方法，所述氨基化合物是氨基酸或肽，所述羧酸是N-末端氨基受保護(hù)的氨基酸或N-末端氨基受保護(hù)的肽，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或其陽離子部分如下式所示的鹽 或其N-氧化物或鹽其中Y1或Q之一是CR15，另一個(gè)是N或CH；Y1是H或低級(jí)烷基；R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
125.一種從有機(jī)胺和羧酸的酰化衍生物之間的反應(yīng)形成酰胺的方法，改進(jìn)之處包括向所述反應(yīng)加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示陽離子部分的鹽 或其N-氧化物或鹽其中Y1或Q之一是CR15，另一個(gè)是N或CH；Y1是H或低級(jí)烷基；R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
126.一種肽合成方法，其中第一Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸與固相肽合成樹脂共價(jià)偶聯(lián)，切除Nα-氨基保護(hù)基團(tuán)，得到的游離氨基經(jīng)肽鍵與第二Nα-氨基受保護(hù)的氨基酸的羧基偶聯(lián)，重復(fù)該循環(huán)直至從所述樹脂上切下所需肽，改進(jìn)之處包括向偶聯(lián)步驟加入有效量的下式所示化合物或含有下式所示陽離子部分的鹽 或其N-氧化物或鹽其中Y1或Q之一是CR15，另一個(gè)是N或CH；Y1是H或低級(jí)烷基；R1和R2與和它們相連的碳原子結(jié)合在一起形成芳環(huán)或雜芳環(huán)，其中所述芳環(huán)是含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳香環(huán)，所述雜芳環(huán)是含有氧、硫或氮的雜芳香族，其含有3-13個(gè)環(huán)碳原子和1-4個(gè)選自O(shè)、S和N的雜原子，所述芳環(huán)和雜芳環(huán)可獨(dú)立為未取代的或被低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)取代；R14是氫、帶正電荷的吸電子基團(tuán)、 SO2R17、低級(jí)烷基羰基、芳基羰基、低級(jí)烷基芳基或BLK1-AA1；R17是芳基、芳基低級(jí)烷基或低級(jí)芳基烷基；AA1是在N-末端少一個(gè)氫原子和在C-末端少一個(gè)OH的氨基酸或肽；BLK1是氨基保護(hù)基團(tuán)；R10是OR12、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；R11是OR13、低級(jí)烷基、芳基、芳基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；且R10和R11可通過選自O(shè)、S、NR30或(CHR30)m的橋連基團(tuán)任選相連，其中每個(gè)R30獨(dú)立為低級(jí)烷基或氫，m是1-3；R12和R13獨(dú)立為低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烷基、低級(jí)環(huán)烷基低級(jí)烷基、雜環(huán)基、雜環(huán)基低級(jí)烷基、低級(jí)環(huán)烯基或低級(jí)環(huán)烯基低級(jí)烷基；環(huán)A1和環(huán)B獨(dú)立為含有6-14個(gè)環(huán)碳原子的芳環(huán)或含有5-14個(gè)環(huán)碳原子的環(huán)烯基或環(huán)烷基；Rb1、Rc1、Rb2、Rc2獨(dú)立為氫、低級(jí)烷基或供電子基團(tuán)；T是CHR31、O、S或NR31；和R31是氫或低級(jí)烷基。
127.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述R10和R11含有芳基或雜芳基或它們的組合，并且所述芳基或雜芳基中至少一個(gè)被叔丁基或叔戊基取代。
128.如權(quán)利要求20所述的化合物，其特征在于，所述Rb1、Rc1、Rb2或Rc2中至少一個(gè)是叔丁基或戊基。
129.如權(quán)利要求128所述的方法，其特征在于，所述R10和R11中與 相連的芳環(huán)或雜芳環(huán)被叔丁基或叔戊基取代。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)和(II)所示化合物或它們的鹽或N－氧化物以及它們?cè)陔暮铣芍械膽?yīng)用。
文檔編號(hào)C07K1/08GK1898254SQ200480038087
公開日2007年1月17日 申請(qǐng)日期2004年11月1日 優(yōu)先權(quán)日2003年10月31日
發(fā)明者L·A·卡爾皮諾, 夏舉松, 張重武, C·D·斯弗迪恩 申請(qǐng)人:馬薩諸塞州立大學(xué)