專利名稱：：一種具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及醫藥領域，特別涉及一種具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法。
背景技術：
：斑蝥是我國民間治療腫瘤的一種中藥，臨床證明其有效成分斑蝥素(Cantharidin)對多種腫瘤具有療效，但是有比較大的毒副作用，尤其是對泌尿系統有明顯的刺激作用。其結構改造衍生物去甲斑蝥素(Norcantharidin)是我國首先開發的、具有較強抗腫瘤活性、調節免疫作用及獨特升白作用的抗腫瘤藥物，目前已經在臨床上廣泛應用，與斑蝥素相比，其對泌尿系統的刺激性較小。最新研究表明，去甲斑蝥素是蛋白磷酸酶(ProteinPhosphatases)PP2A和PP1的強效抑制劑。蛋白磷酸酶能調控多種生理過程，是去甲斑蝥素抗腫瘤機制的一個新的作用靶點，該靶點的發現使(去甲)斑蝥素及其衍生物重新成為抗腫瘤藥物研究的熱點。2001年，McCluskey研究小組報道了一系列氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的合成及初步生物活性，其對PP1和PP2A的抑制活性均高于去甲斑蝥素，其合成方法是在密封試管中，三乙胺的存在下，甲苯溶劑中，等量的去甲斑蝥素與具有光學活性的氨基酸在20CTC下反應24小時，得到相應氨基酸的去甲斑蝥酰亞胺衍生物，收率約為8~40%。但是，McCluskey研究小組沒有詳細測定并報道這類化合物的光學活性及絕對構型，并且，其合成方法的實驗條件苛刻，氨基酸的手性原子極有可能被消旋化，使其應用受到限制。自然界中的大量實例及現代科學已證實化合物的光學活性與其生物活性有密切的內在聯系，具有光學活性的化合物各異構體之間的生物活性存在明顯的差異。因此，合成并確定具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物是十分重要的。
發明內容本發明的目的在于克服現有技術中存在的缺點，提供一種操作簡便、產率高、純度好的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。本發明的另一目的在于提供一種上述具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法。本發明的目的通過下述技術方案實現本發明提供的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，具有下述式(I)結構上述具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，包括下述步驟(1)將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合體系，加熱回流，得到含產物的反應液；(2)將上述反應液進行濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入有機溶劑進行析晶，靜置，冷卻，得到具有光學活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。步驟1中，所述L-氨基酸為L-組氨酸、L-精氨酸或L-賴氨酸。步驟1中，所述醇可以是甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇；優選為乙醇。步驟1中，所述醇和水的混合體系的體積分數為50%~100%;優選體積分數為95%。歩驟1中，所述L-氨基酸與去甲斑蝥素的摩爾比為1:11.5;優選摩爾比為1:1.1。步驟2中，所述有機溶劑為丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨；優選有機溶劑為丙酮。反應過程如式II所示其中，R為或—(，/V或—(CH2)4NH2<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>本發明與現有技術相比具有如下優點和效果(1)本發明提供的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，其對一些人體癌細胞株具有良好的抑制活性。(2)本發明制備方法條件簡便易行，產物的收率高、純度好。具體實施方式下面結合實施例對本發明做進一步詳細的描述，但本發明的實施方式不限于此。實施例1:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將33mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氨酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加熱回流48小時，得到反應液；然后將該反應液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入適量丙酮(丙酮的用量加至使微沸的反應液達到飽和狀態)，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到8.88g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為97.0%。M.p.280。C(分解溫度)。比旋光度[a]D20=-75.8(c=0.02507，H2〇)。(即2CTC以鈉光為光源，以水為溶劑，樣品的比旋光度是左旋75.8。。)IR(KBr)v:3469(N國H)，3160，3120，3006(C=C-H)，2965，2883(-CH2-)，1781(酰亞胺，vasymC=〇)，1708(酰亞胺，vsymC=0)，1637(羧酸根，vasymC=0)，1400(羧酸根,vsymC=0)，1189(C-0-C)cm—1。FAB-MS:m/z=306，[M+H+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):156-1.58(m'4H)，2.96(d'1H'J=7.2Hz)，3.02(d，1H，J=7.2Hz),3.09(dd，1H，J=15.0，10.4Hz)，3.22(dd，1H，J=15.0，4.8Hz)，4.58(s，1H)，4.64(dd，1H，J=10.4，4.8Hz)，4.67(s，1H)，5.52(br.)，6.74(s，1H)，7.64(s,1H)。元素分析，理論{|;:C，55.08;H，4.95;N，13.76;觀U定^(直C，54.47;H，5.06;N，13.93(分子式C14H15N305)。實施例2:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將45mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氮酸溶于200ml95%乙醇水溶液中，加熱回流48小時，得到反應溶液；然后將該反應溶液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入適量四氫呋喃，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到8.24g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為90.1%。實施例3:L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將40mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-組氨酸溶于200ml95%異丙醇水溶液中，加熱回流48小時，得到反應物的溶液；然后將該反應溶液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入適量丙酮，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到5.95g白色針狀晶體，即L-組氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為65.0%。實施例4:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將33mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸溶于200ml無水乙醇中，加熱回流48小時，得到反應物的溶液；然后將該反應溶液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入丙酮至飽和狀態，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到9.43g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為97.0%。分解點260°C。FAB國MS:m/z=325，[M+H]+。1HNMR(DMSO-d6，5/ppm,J/Hz):1.04，(t,3H，J=6.8Hz),1.19-1.21'(m,2H),1.58-1.61,(m，4H),1.80-1.90，(m,1H)，2.15-2.30，(m，1H)'2.88-2.93,(m，2H)'3.01畫3.10,(m,2H),3.39-3.45,(q，2H),4.06-4.10,(dd，1H),4.38，(s，1H),4.65，(s，2H),7,49'(s，1H),7.75,(s,2H)，9.13，(s，1H)。IR(KBr)v:3367(N國H)，3176，(C=C-H)，2964，2879(-CH2-)，1770，(酰亞胺，vasymC=0)，1697(酰亞胺，vsymC=0)，1452(羧酸根,vsymC=0)，"33(C-0-C)cm-1。HRFAB-MS，理論值325.1506，[M+H]+;測定值325.1503，[M+H]+(分子式。141"12。1\1405)。實施例5:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將45mmo1的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸于200ml甲醇中，加熱回流48小時，得到反應物的溶液；然后將該反應溶液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入適量四氫呋喃，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到8.46g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為87.0%。實施例6:L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺的合成將40mmol的去甲斑蝥素與30mmol的L-精氨酸于250ml80%異丙醇水溶液中，加熱回流48小時，得到反應物的溶液；然后將該反應溶液濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入適量丙酮，靜置，冷卻，重結晶；結晶母液可繼續濃縮、重結晶；多次重結晶共得到6.12g白色針狀晶體，即L-精氨酸去甲斑蝥酰亞胺，收率為63.0%。測試例1:MTT法評價L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺的抗腫瘤活性取對數生長期的腫瘤細胞，接種于96孔板中，37°C、5。/。C02孵箱中培養12h后，加入不同濃度的樣品。培養72h，離心棄上清，加入MTT溶液(5mg/mL)，放置37°C、5%。02孵箱中繼續培養。4h后離心棄上清，每孔加入100^iLDMSO，振蕩。溶解15min后，用酶標儀490nm測定OD值，并用SPSS法計算IC5。值，結果見表1。表l:對人體癌細胞株的生長抑制活性<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>aA549(人肺腺癌細胞)，CNE-1(高分化人鼻咽癌細胞)，CNE-2(低分化人鼻咽癌細胞)，MGC-803(人胃癌細胞)，H印G-2(人肝癌細胞)，KB-3-1(人表皮癌細胞)，HL-60(白血病細胞)。bIC5C)，半數抑制濃度，藥物作用72小時后由MTT法測得。如表1所示，本發明的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物在生長抑制活性試驗中對一些人體癌細胞株顯示了良好的抑制活性。測試例2對照實驗在相同的實驗條件下，即加熱L-組氨酸的95%EtOH/H2〇溶液，回流48小時；然后將加熱回流的溶液濃縮，并加熱至微沸狀態，然后加入丙酮至飽和狀態，靜置，冷卻，重結晶。比旋光度數據如下原料L-組氨酸[a]D2Q=-37.4°(文獻值-39.4°)。對照實驗L-組氨酸晶體[a]D2Q=-38.4°。可見，對照實驗前后的氨基酸旋光度為一常數，即實驗條件并未改變氨基酸的光學活性，即本發明制備的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物會保持相應的氨基酸光學活性。權利要求1、一種具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，具有下述結構式id="icf0001"file="S2008100277714C00011.gif"wi="53"he="34"top="50"left="75"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>其中，R為id="icf0002"file="S2008100277714C00012.gif"wi="27"he="17"top="93"left="66"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或id="icf0003"file="S2008100277714C00013.gif"wi="34"he="18"top="89"left="102"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>或-(CH2)4NH22、一種權利要求1所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于包括下述步驟(1)將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇和水的混合體系，加熱回流，得到含產物的反應液；(2)將上述反應液進行濃縮，加熱反應液至微沸狀態，然后加入有機溶劑進行析晶，靜置，冷卻，得到具有光學活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。3、根據權利要求2所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述L-氨基酸為L-組氨酸、L-精氨酸或L-賴氨酸。4、根據權利要求2所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述醇是甲醇、乙醇、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇或叔丁醇。5、根據權利要求2所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述醇和水的混合體系的體積分數為50%~100%。6、根據權利要求2所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟1中，所述L-氨基酸與去甲斑蝥素的摩爾比為1:11.5。7、根據權利要求2所述的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物的制備方法，其特征在于步驟2中，所述有機溶劑為丙酮、甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、正丁醇或N，N-二甲基甲酰氨。全文摘要本發明公開了一種具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物及其制備方法，將L-氨基酸與去甲斑蝥素溶于醇或醇/水體系，加熱回流，得到反應液，然后濃縮上述反應液進行，并加入有機溶劑析晶，靜置冷卻，得到具有光學活性的L-氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物。本發明提供的具有光學活性的氨基酸去甲斑蝥酰亞胺衍生物，對人體癌細胞株具有良好的抑制活性；該制備方法簡便易行，產物的收率高、純度好。文檔編號C07D491/18GK101270122SQ20081002777公開日2008年9月24日申請日期2008年4月29日優先權日2008年4月29日發明者冼勵堅,吳明瑋,李永強,永鄒,陳大峰申請人:中國科學院廣州化學研究所