專利名稱：一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及中藥中生物活性成分的提取制備方法，尤其涉及一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥 基苯乙腈的制備方法。
背景技術(shù)：
白芥子為十字花科植物白芥&'"^^"/6"L.的干燥成熟種子，炒制入藥，辛，溫，歸肺經(jīng)。 具有溫肺豁痰利氣，散結(jié)通絡(luò)止痛之功能。用于治療寒痰咳喘，胸肋脹痛，痰滯經(jīng)絡(luò)，關(guān)節(jié) 麻木、疼痛，痰濕流注，陰疽腫毒。
白芥子在歷代本草中均有記載，常用來治療咳喘癥和消腫毒等。自1953年以來我國各版 藥典均收載。近年來很多臨床研究報道都表明白芥子確是治療支氣管哮喘，咳嗽等呼吸道疾 病的有效藥物，有效率都在90%以上。通過豚鼠實驗性哮喘模型對白芥子提取物進行頸背"穴
位"敷貼和口服給藥觀察，均有較好效果。
本發(fā)明人前期研究得到了國家自然科學(xué)基金項目"炒白芥子中鎮(zhèn)咳、平喘有效成分及其 作用機理的研究(30600802)"的支持。對炒制前后的白芥子進行了鎮(zhèn)咳、平喘的藥效學(xué)研究， 發(fā)現(xiàn)醇提物具有鎮(zhèn)咳作用而且炒制后的藥效顯著提高，這與傳統(tǒng)的炒制入藥相符e對炒白芥 子醇提物的化學(xué)成分進行了研究發(fā)現(xiàn)其中含有大量的對羥基苯乙腈(見圖2)，而未炒制的白 芥子提取物中對羥基苯乙腈很少(見圖l)。可見白芥子炒制產(chǎn)生的羥基苯乙腈與炒制后鎮(zhèn)咳 活性的提高密切相關(guān)，因此可能為炒白芥子的主要鎮(zhèn)咳有效成分。如圖lb所示，HPLC分析 發(fā)現(xiàn)炒制后還有少量的對羥基苯甲醛的生成，推測其可能為對羥基苯乙腈部分降解產(chǎn)物，這 個過程類似于苦杏仁苷元的酶解產(chǎn)生HCN的過程，見式(l)。因此推測對羥基本乙腈會在體 內(nèi)發(fā)生類似苦杏仁苷元的降解過程產(chǎn)生HCN從而抑制咳嗽中樞發(fā)揮鎮(zhèn)咳作用見式(2)。對分 離純化得到的對羥基苯乙腈在一定濃度下采用濃氨水引咳法對小鼠具有很強的鎮(zhèn)咳作用，進 一步采血分析確實含有HCN。杏仁苷
白芥子苷
+ HCN
+ HCN
式(1)
式(2)
由此可見，對羥基苯乙腈與苦杏仁苷按照相同的機理發(fā)揮鎮(zhèn)咳作用，但苦杏仁苷不穩(wěn)定， 很難制備得到純品，更無法在有效劑量下與藥用載體混合并制成適當(dāng)劑型的藥物。但對羥基 苯乙腈在體外性質(zhì)穩(wěn)定，容易保存，可以制成各種劑型使用。另外該成分在炒制以后的白芥 子乙醇提取物中含量非常高，達到20%以上，因此白芥子是其豐富的來源。
該成分雖然可以采用化學(xué)方法合成，但成本較高，合成時會引入有毒物質(zhì)，無法用于藥 用。綜上分析，對白芥子中對羥基苯乙腈純化工藝進行深入研究，在鎮(zhèn)咳藥物研究開發(fā)上具 有非常重要的意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從白芥子中提取一種鎮(zhèn)咳有效成分-對羥基苯乙腈的完整制 備方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是以白芥子為原料，從中提取一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈， 方法步驟如下
(1) 將白芥子在200-25(TC攪拌10-15 min，然后冷卻，粉碎。
(2) 對粉碎后的炒白芥子以濃度為75% 95%的乙醇-水溶液提取，料液比(g/ml) =1: 5-10，提取溫度7(TC 10(TC，提取時間lh 5h，提取次數(shù)1次~5次；優(yōu)選提取條件為提取液 95%的乙醇-水溶液，料液比(g/ml) =1: 8，提取溫度90。C，提取時間3h，提取次數(shù)3次。
(3) 提取物濃縮干燥后加入3-5倍量(g/ml)的丙酮，50。C加熱30min使提取物溶解， 然后過濾，靜止12h待析出結(jié)晶后過濾，再反復(fù)重結(jié)晶2-5次，干燥后得到具有鎮(zhèn)咳作用的有效成分-對羥基苯乙腈；優(yōu)選重結(jié)晶條件為加入4倍量(g/ml)丙酮，重結(jié)晶3次。
對羥基苯乙腈在制備鎮(zhèn)咳藥物上的用途，將有效劑量的對羥基苯乙腈與藥用載體混合并 制成適當(dāng)劑型的藥物。
本發(fā)明的有益效果是原料為純天然植物種子，安全易得，方法簡單易操作，不引入有
毒物質(zhì)，成本低廉，在鎮(zhèn)咳藥物研究開發(fā)上具有非常重要的意義。


圖1為生白芥子醇提物HPLC圖。 圖2為炒制后白芥子醇提物HPLC圖。 圖3為本發(fā)明實施例制備樣品HPLC圖。
具體實施例方式
下面以具體實施方式
對本發(fā)明作進一步的說明，但并不影響本發(fā)明的保護范圍。
實施例1
白芥子購自河北安國中藥材市場，使用儀器包括515HPLC， 2487紫外檢測器(美國Waters
公司)。
取白芥子0.5kg，在20(TC炒10min，粉碎，用95免的乙醇5L回流提取3次，每次3h，合并提 取液，減壓回收乙醇至無醇味，得浸膏70g;該浸膏加入280mL丙酮溶解，5(TC加熱30min，過 濾，冷卻至室溫，靜止12h待析出結(jié)晶后過濾，反復(fù)重結(jié)晶3次；干燥后得到具有鎮(zhèn)咳作用的 有效成分-對羥基苯乙腈。采用HPLC法進行對羥基苯乙腈的含量測定。
(1) 色譜條件
色譜柱為Luna5uPhenyl-Hexyl (250*4.60mm， 5pm);流動相為甲醇-水(35: 65)流速 0.6mLTnin";檢測波長287nm;柱溫為室溫。
(2) 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
精密稱取對羥基苯乙腈對照品加甲醇溶解并定容至質(zhì)量濃度分別為10嗎.mi;1、 20昭.mU1、 30嗎-mlA 40嗎-ml/1、 50嗎'mL"的溶液。精密吸取各溶液10 ^L,注入液相色 譜儀，按2.2所述條件測定。測得進樣濃度("對峰面積(y)的直線回歸方程為y-5840.9X 十3573,r = 0.9996;線性范圍0.5 mg 2.5 mg。
(3)樣品測定
精密稱取樣品O.lg，加甲醇溶解并定容至50mL，精密吸取各溶液10 tiL，注入液相色 譜儀，按上述條件測定，采用面積歸一化法，根據(jù)回歸方程求出含量>99%。
權(quán)利要求
1、一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈的制備方法，其特征在于，該方法以白芥子為原料，從中提取一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈，步驟如下(1)將白芥子在200-250℃攪拌10-15min，然后冷卻，粉碎；(2)對粉碎后的炒白芥子以濃度為75～95％的乙醇-水溶液提取，料液比(g/ml)＝1∶5-10，提取溫度為70-100℃，提取時間為1-5h，提取次數(shù)為1-5次；(3)提取物濃縮干燥后加入3-5倍量(g/ml)的丙酮，50℃加熱30min使提取物溶解，然后過濾，靜止12h待析出結(jié)晶后過濾，再反復(fù)重結(jié)晶2-5次，干燥后得到具有鎮(zhèn)咳作用的有效成分-對羥基苯乙腈。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈的制備方法，其特征在 于，步驟(2)中提取液為95%的乙醇-水溶液，料液比(g/ml) =1: 8，提取溫度為90。C，提 取時間為3h，提取次數(shù)為3次。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈的制備方法，其特征在 于，步驟(3)中用于重結(jié)晶的丙酮為4倍量(g/ml)，重結(jié)晶次數(shù)為3次。
全文摘要
本發(fā)明涉及中藥中生物活性成分的提取制備方法，尤其涉及一種鎮(zhèn)咳作用有效成分-對羥基苯乙腈的制備方法。以白芥子為原料，提取前對其進行了炒制，大大提高對羥基苯乙腈的收率，采用提取和重結(jié)晶等簡單的方法進行制備得到高純度的對羥基苯乙腈，將有效劑量的對羥基苯乙腈與藥用載體混合并制成適當(dāng)劑型即可制備鎮(zhèn)咳藥物。本發(fā)明原料為純天然植物種子，安全易得，方法簡單易操作，不引入有毒物質(zhì)，成本低廉，在鎮(zhèn)咳藥物研究開發(fā)上具有非常重要的意義。
文檔編號C07C253/00GK101531616SQ20091001074
公開日2009年9月16日 申請日期2009年3月19日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月19日
發(fā)明者馮寶民, 王惠國, 王永奇 申請人:大連大學(xué)