專利名稱：一種提取分離玄參波利苷a的方法
技術領域：
本發明屬于天然植物有效成分提取分離領域，涉及一種玄參波利苷A的方法，特別涉及一種利用動態逆流提取、大孔樹脂吸附和高速逆流色譜純化技術相結合的方法提取分離玄參波利苷A的方法。
背景技術：
玄參波利苷A (Scropolioside A)是一種環烯醚職苷類化合物,主要從玄參科植物凱氏玄參或斯科波利玄參中分離得到。藥理研究表明，玄參波利苷A具有抗肝毒活性，在口服6mg/kg時，對大鼠硫乙酰胺肝中毒的生化指標保護率分別為G0T25. 74%、GPT45. 29%、ACP44. 32%、ALP79. 82% 和 GIDH73. 63%。玄參波利苷 A 分子式為 C35H44O28,分子量為 752. 72，結構式為
II I NOCHt H I
C=C-COO OAc HOCHi 0
.,夕HO4-T
OCH5李宗友報道了凱氏玄參中環烯醚萜苷類成分的分離方法，采用90%乙醇室溫滲濾提取，提取液水浴上減壓濃縮，粗提取物經液液分配柱層析等方法得到環烯醚萜苷單體成分。該方法操作繁瑣、所得產品含量較低、提率低。

發明內容
本發明的目的是解決現有技術中存在的問題，提供一種玄參波利苷A的制備方法，應用高速逆流色譜分離純化玄參波利苷Α，操作簡單、樣品損失少、產品純度高。為達到上述目的，本發明采用下列技術方案
(1)提取以凱氏玄參為原料，粉碎，置于液體動態連續逆流提取裝置中，以65-80%的食用乙醇溶液為提取溶劑，提取2-3次，合并提取液；
(2)柱層析將上述提取液旋轉濃縮，濃縮液加水分散，過濾，濾液上大孔樹脂，先用水洗脫，再用4-6BV55%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液；
(3)高速逆流色譜分離將步驟(2)所得乙醇洗脫液濃縮、干燥，干燥物采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，制備得到玄參波利苷A。所述步驟(I)中液體動態連續逆流裝置為多個提取裝置串聯或并聯或串并聯合用，每次提取乙醇溶液用量為原料質量的3-5倍(v/w)。
所述步驟(3 )中高速逆流色譜法分離溶劑系統選用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(15-17) (12-14) :(20-25) : (3_7)，溶劑系統配制后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，流動相流速控制在I. 5-4. Oml/min,主機轉速控制在800-950r/min。本發明的有益效果是
1、采用液體動態連續逆流提取技術，通過循環的提取液不斷地將有效成分提取出來，縮短了提取周期和溶劑的用量；
2、將大孔樹脂和高速逆流色譜技術結合，分離制備玄參波利苷A，工藝簡單、質量穩定、產品純度高。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :
將凱氏玄參地上部分低溫干燥、粉碎，取5kg，平均置于3個串聯的提取裝置中，加入20L70%的乙醇溶液，在50°C的提取溫度下，提取2次，每次2. 5h，合并提取液，過濾后得到提 取液，旋轉濃縮，加水分散，過濾，濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用5BV的55%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到玄參波利苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，按體積比為16:13:25:7配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統，溶劑系統混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機轉速調至820r/min，泵入下相作流動相，動態平衡后，流動相流速控制在2. 5ml/min，將粗品溶于下相由進樣閥進樣，HPLC檢測，收集目標成分，減壓濃縮干燥流分，得到玄參波利苷A，含量96. 4%。實施例2:
將凱氏玄參地上部分低溫干燥、粉碎，取5kg，平均置于3個串聯的提取裝置中，加入18L75%的乙醇溶液，在50°C的提取溫度下，提取3次，每次I. 5h，合并提取液，過濾后得到提取液，旋轉濃縮，加水分散，過濾，濾液通過XDA-I型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用4BV的55%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到玄參波利苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，按體積比為17:13:22:3配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統，溶劑系統混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機轉速調至950r/min，泵入下相作流動相，動態平衡后，流動相流速控制在1.5ml/min，將粗品溶于下相由進樣閥進樣，HPLC檢測，收集目標成分，減壓濃縮干燥流分，得到玄參波利苷A，含量95. 9%。實施例3:
將凱氏玄參地上部分低溫干燥、粉碎，取5kg，平均置于4個串聯的提取裝置中，加入20L65%的乙醇溶液，在50°C的提取溫度下，提取3次，每次2h，合并提取液，過濾后得到提取液，旋轉濃縮，加水分散，過濾，濾液通過AB-8型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用5BV的55%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到玄參波利苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，按體積比為17:14:23:6配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統，溶劑系統混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機轉速調至900r/min，泵入下相作流動相，動態平衡后，流動相流速控制在3. Oml/min，將粗品溶于下相由進樣閥進樣，HPLC檢測，收集目標成分，減壓濃縮干燥流分，得到玄參波利苷A，含量98. 2%。 實施例4:
將凱氏玄參地上部分低溫干燥、粉碎，取5kg，平均置于4個串聯的提取裝置中，加入15L80%的乙醇 溶液，在50°C的提取溫度下，提取3次，每次I. 5h，合并提取液，過濾后得到提取液，旋轉濃縮，加水分散，過濾，濾液通過HPD400型大孔吸附樹脂柱，吸附完成后，先用水洗脫至無色，再用6BV的55%乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，濃縮干燥得到玄參波利苷A粗品，采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，按體積比為15:12:20:4配制正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水溶劑系統，溶劑系統混勻后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，將固定相充滿高速逆流色譜柱，開啟主機轉速調至850r/min，泵入下相作流動相，動態平衡后，流動相流速控制在4. Oml/min，將粗品溶于下相由進樣閥進樣，HPLC檢測，收集目標成分，減壓濃縮干燥流分，得到玄參波利苷A，含量96. 7%。
權利要求
1.一種提取分離玄參波利苷A的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)提取以凱氏玄參為原料，粉碎，置于液體動態連續逆流提取裝置中，以65-80%的食用乙醇溶液為提取溶劑，提取2-3次，合并提取液； (2)柱層析將上述提取液旋轉濃縮，濃縮液加水分散，過濾，濾液上大孔樹脂，先用水洗脫，再用4-6BV55%乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液； (3)高速逆流色譜分離將步驟(2)所得乙醇洗脫液濃縮、干燥，干燥物采用高速逆流色譜法對所得粗品進行分離純化，制備得到玄參波利苷A。
2.根據權利要求I所述的提取分離玄參波利苷A的方法，其特征在于所述步驟(I)中液體動態連續逆流裝置為多個提取裝置串聯或并聯或串并聯合用，每次提取乙醇溶液用量為原料質量的3-5倍(v/w)。
3.根據權利要求I所述的提取分離玄參波利苷A的方法，其特征在于所述步驟(3)中高速逆流色譜法分離溶劑系統選用正庚烷-乙酸乙酯-甲醇-水，體積比為(15-17)(12-14) :(20-25): (3-7)，溶劑系統配制后靜置分層，以上相為固定相，下相為流動相，流動相流速控制在I. 5-4. Oml/min，主機轉速控制在800_950r/min。
全文摘要
本發明涉及一種提取分離玄參波利苷A的方法，將凱氏玄參粉碎，進行多罐式動態逆流提取，提取液過濾、旋轉濃縮，濃縮液加水分散，上大孔樹脂，先用水洗脫，再用乙醇溶液洗脫，濃縮乙醇洗脫液，最后經半制備型高速逆流色譜儀分離純化得到玄參波利苷A。本方法工藝流程簡單，提取效率高，十分利于工業化生產，且制備過程中，污染少，成本低，制備的參波利苷A純度達到98%以上。
文檔編號C07H1/08GK102863491SQ20121036004
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月25日 優先權日2012年9月25日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司