專利名稱：一種制備高純度硬毛紅砂素b的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，尤其涉及一種應(yīng)用高速逆流色譜法從旌節(jié)花植物中分離制備硬毛紅砂素B的方法。
背景技術(shù)：
硬毛紅砂素B (Hirtellin B)是ー種鞣質(zhì)類化合物，主要從檉柳科植物硬毛紅砂Reaumuria hirtella Jaub. et Sp.的葉中分離得到，CAS登錄號為135404-48-7,其分子式為C82H56O52，分子量為1873. 30，呈類白色無定形粉末狀。藥理研究表明，硬毛紅砂素B具有抗腫瘤作用，10mg/kg時對荷S-180小鼠的延命率為114. 2%。目前對硬毛紅砂素B的研究較少，尚無提取分離純化硬毛紅砂素B方法的專利或文獻(xiàn)報道。高速逆流色譜技術(shù)(HSCCC)是ー種不需任何載體的液液分配分離技術(shù)，利用單向 流體動力學(xué)平衡原理，基于樣品在旋轉(zhuǎn)螺旋管內(nèi)的相對移動而互不混溶的兩相中分配系數(shù)的不同而實(shí)現(xiàn)分離，其分離效率和速度可以與HPLC相媲美。HSCCC分離效率高，產(chǎn)品純度高，不存在載體對樣品的吸附和污染，制備量大和溶劑消耗少，操作簡單，能從極復(fù)雜的混合物中分離出特定的組分。它與一般色譜的分離方式不同，特別適用于制備級的分離，已被廣泛應(yīng)用于中藥與天然產(chǎn)物的分離純化過程中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法。本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的
(1)取硬毛紅砂葉粉碎，用體積百分比為50-80%的こ醇水溶液超聲提取2-3次，提取液合并、減壓回收こ醇得到濃縮液；
(2)濃縮液加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化
液；
(3)初步純化液采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品；
(4)上述粗品采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離，甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水為溶劑系統(tǒng)，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B固體。步驟(I)中所述こ醇水溶液用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為20-50KHZ，每次提取 O. 5-2h。步驟(2)中所述明膠溶液濃度為3-5%，丙酮水溶液濃度為55-80%。步驟(3)中所述氯仿-甲醇的體積比為5:1-1:2。步驟(4)中所述溶劑系統(tǒng)甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水的體積比為(1-2) : (1-2) :0. 01:1，上相為固定相，下相為流動相。本發(fā)明的有益效果是
1、本發(fā)明方法生產(chǎn)周期短，提取率高，條件溫和、安全；
2、本發(fā)明采用高速逆流色譜法，沒有可逆吸附，樣品無損失；3、本發(fā)明制備得到的硬毛紅砂素B純度高，可作為對照品使用。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)ー步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施方式。實(shí)施例I :
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加100L的70%こ醇水溶液超聲提取2次，每次提取I. 5h，超聲頻率為33KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為3%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用60%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(3:1)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(1.5:1:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的 流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min時，以流速為3. Oml/min泵入流動相,將粗提物用下相溶解,并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. 7mg，含量為98. 7%。實(shí)施例2:
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加75L的60%こ醇水溶液超聲提取3次，每次提取I. Oh,超聲頻率為20KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為3. 5%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用7%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(1:1)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(1:1:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min吋，以流速為3. Oml/min泵入流動相，將粗提物用下相溶解，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. 4mg，含量為
98.3%。實(shí)施例3
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加80L的50%こ醇水溶液超聲提取3次，每次提取2h，超聲頻率為25KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為4%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用55%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(1:2)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(1:2:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min吋，以流速為3. Oml/min泵入流動相，將粗提物用下相溶解，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. 2mg，含量為
99.1%。實(shí)施例4:
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加50L的80%こ醇水溶液超聲提取2次，每次提取I. 5h，超聲頻率為38KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為5%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用65%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(5:1)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(2:1:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min吋，以流速為3. Oml/min泵入流動相，將粗提物用下相溶解，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. 5mg，含量為98. 4%。實(shí)施例5:
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加70L的75%こ醇水溶液超聲提取2次，每次提取I. Oh,超聲頻率為50KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為4. 5%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用80%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃 縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(4:1)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(1:1.5:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min時，以流速為3. Oml/min泵入流動相,將粗提物用下相溶解,并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. Img,含量為98. 2%。實(shí)施例6:
取硬毛紅砂葉10kg，粉碎，加60L的65%こ醇水溶液超聲提取3次，每次提取O. 5h，超聲頻率為45KHz，過濾，合并提取液，減壓回收こ醇得到濃縮液，加入濃度為3. 8%明膠溶液，攪拌至不再產(chǎn)生沉淀，離心，沉淀物用70%丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液，濃縮后采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(2:1)洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品。將甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟こ酸-水(1:1.2:0.01:1)組成的溶劑系統(tǒng)在分液漏斗中充分振蕩后靜置，分層，上相為固定相，下相為流動相，使進(jìn)樣閥處于進(jìn)樣狀態(tài)，將固定相以10ml/min的流速灌滿逆流色譜儀的色譜分離柱，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min時，以流速為3. Oml/min泵入流動相,將粗提物用下相溶解,并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B単體4. 3mg,含量為98. 7%。
權(quán)利要求
1.一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，其特征在于包括以下步驟 (1)取硬毛紅砂葉粉碎，用體積百分比為50-80%的乙醇水溶液超聲提取2-3次，提取液合并、減壓回收乙醇得到濃縮液； (2)濃縮液加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到初步純化液； (3)初步純化液采用硅膠柱層析，用氯仿-甲醇洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品； (4)上述粗品采用高速逆流色譜法進(jìn)行分離，甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟乙酸-水為溶劑系統(tǒng)，根據(jù)檢測器紫外光譜圖進(jìn)行收集，合并相同成分，得到硬毛紅砂素B固體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，其特征在于步驟Cl)中所述乙醇水溶液用量為5-10倍量(V/W)，超聲頻率為20-50KHZ，每次提取O. 5_2h。
3.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，其特征在于步驟(2)中所述明膠溶液濃度為3-5%，丙酮水溶液濃度為55-80%。
4.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，其特征在于步驟(3)中所述氯仿-甲醇的體積比為5:1-1:2。
5.根據(jù)權(quán)利要求I中所述的一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法，其特征在于步驟(4 )中所述溶劑系統(tǒng)甲基叔丁基醚-正丁醇-三氟乙酸-水的體積比為(I - 2 ):(1-2) : O. 01:1，上相為固定相，下相為流動相。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備高純度硬毛紅砂素B的方法將硬毛紅砂葉用醇溶液超聲提取，提取液濃縮，加入明膠溶液，離心，沉淀物用丙酮水溶液溶解，濾除明膠，得到的初步純化液采用硅膠柱層析，氯仿-甲醇洗脫，收集流分濃縮干燥得到粗品，高速逆流色譜分離純化，得到硬毛紅砂素B單體。本發(fā)明所得產(chǎn)品純度高于98%。
文檔編號C07H1/08GK102863481SQ201210363028
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司