專利名稱：一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法
技術領域：
本發明屬于天然產物分離領域，尤其是涉及一種采用高效液相制備色譜法從云木香根中同時制備云木香胺A和云木香胺B的方法。
背景技術：
云木香為菊科植物云木香lappa Clarke的根,別名木香、廣木香,具有行氣化滯、疏肝、健胃等功效，可治療氣滯、停食積聚、胸滿腹脹、嘔吐瀉痢等病癥。云木香中含有多種揮發油和生物堿類化合物。云木香胺A和云木香胺B是從云木香根中分離得到的倍半萜類生物堿化合物，這兩個組分均具有抗潰瘍作用，云木香胺A在100mg/kg時,對由HCl/乙醇引起的大鼠胃潰瘍抑制率為59. 8%，云木香胺B在50mg/kg時，對由HCl/乙醇引起的大鼠胃潰瘍抑制 率為87. 2%。現有文獻中對云木香中生物堿的相關研究報道相對較少，未見有同時制備云木香中倍半萜類生物堿的方法報道。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，該方法操作簡單，所得產品含量高。本發明是通過以下技術方案實現的
一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于包含以下步驟
1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，藥材與溶劑質量比例為I : (6-15)，合并提取液，減壓濃縮得粗提取物；
2)將上述粗提取物懸溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮得浸膏；
3)將上述浸膏進行中壓氧化鎂柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進行薄層層析收集目標洗脫液，回收試劑至小體積，所得粗品用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至9. 5-10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3-5次，得云木香總生物堿；
4)將上述云木香總生物堿用甲醇溶解，經制備液相色譜分離純化，乙腈-水混合溶液洗脫，收集各色譜峰對應化合物流分，減壓濃縮干燥得云木香胺A和云木香胺B。所述步驟2)中的乙酸乙酯用量為提取物體積的1-4倍量。所述步驟3)中的氧化鎂目數為100-300目，柱層析洗脫條件為采用石油醚-丙酮按體積比為20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫。所述步驟4)中制備液相色譜采用普通C18柱，以體積比為75:25的乙腈和水混合溶劑為流動相，I. 5-4ml/min的流速。本發明的有益效果是本發明方法通過采用微波提取、溶劑萃取、中壓氧化鎂柱層析、結晶及制備液相色譜分離等步驟制備得到云木香胺A、云木香胺B、云木香胺C三種倍半萜類生物堿化合物，耗時短、得率高、操作簡單，易于工業化。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入10倍原料重量的85%乙醇溶液微波提取20分鐘，提取液濾出，如此反復提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用2倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至10. 2，過濾，沉淀物用去 離子水洗滌5次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，2. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實施例2:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取20分鐘，提取液濾出，如此反復提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用I倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至9. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌4次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，3. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實施例3
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入8倍原料重量的80%乙醇溶液微波提取15分鐘，提取液濾出，如此反復提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用4倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至10. O，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，I. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實施例4:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分鐘，提取液濾出，如此反復提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用3倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料200-300目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至9. 8，過濾，沉淀物用去離子水洗滌4次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，3. 5ml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。 實施例5:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取15分鐘，提取液濾出，如此反復提取2次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用2倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌5次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，4. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。實施例6:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分鐘，提取液濾出，如此反復提取3次，合并提取液，濾液減壓回收得到粗提取物，將粗提取物加水懸溶于水，用I. 5倍體積量的乙酸乙酯萃取4次，減壓濃縮得乙酸乙酯浸膏，將乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解濕法上樣至填料100-200目的中壓氧化鎂柱，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1進行梯度洗脫，分段收集各流分，將含云木香倍半萜類生物堿流分合并，減壓回收溶劑至小體積，然后用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至10. O，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3次，得云木香總生物堿；將云木香總生物堿加甲醇溶解，在C18反相制備柱上進行分離，乙腈-水(75:25，V/V)為流動相，2. Oml/min的流速，采用紫外在線檢測，檢測波長276nm。分別收集各色譜峰對應的化合物流分，減壓真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B兩種倍半萜類云木香生物堿。
權利要求
1.一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于包含以下步驟 1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，藥材與溶劑質量比例為I : (6-15)，合并提取液，減壓濃縮得粗提取物； 2)將上述粗提取物懸溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液減壓濃縮得浸膏； 3)將上述浸膏進行中壓氧化鎂柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，收集各洗脫部分，然后進行薄層層析收集目標洗脫液，回收試劑至小體積，所得粗品用O. 2mol/L的鹽酸水溶液提取3次，合并鹽酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液調節pH至9. 5-10. 5，過濾，沉淀物用去離子水洗滌3-5次，得云木香總生物堿； 4)將上述云木香總生物堿用甲醇溶解，經制備液相色譜分離純化，乙腈-水混合溶液洗脫，收集各色譜峰對應化合物流分，減壓濃縮干燥得云木香胺A和云木香胺B。
2.如權利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟2)中的乙酸乙酯用量為提取物體積的1-4倍量。
3.如權利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟3)中的氧化鎂目數為100-300目，柱層析洗脫條件為采用石油醚-丙酮按體積比為20:1、10:1、5:1、2:1、1:1 進行梯度洗脫。
4.如權利要求I所述的一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法，其特征在于所述步驟4)中制備液相色譜采用普通C18柱，以體積比為75:25的乙腈和水混合溶劑為流動相，I.5-4ml/min 的流速。
全文摘要
本發明屬于天然產物分離領域，提供了一種倍半萜類云木香生物堿單體的制備方法。制備方法包括乙醇溶液提取、有機溶劑萃取、中壓氧化鎂柱層析以及制備高效液相色譜純化等步驟。本發明所得產品純度高，質量好，制備方法簡單，制備量大，易于產業化。
文檔編號C07D405/06GK102863430SQ20121036283
公開日2013年1月9日 申請日期2012年9月26日 優先權日2012年9月26日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司