專利名稱：一種提取山香酸a的方法
技術領域：
本發明屬于中藥化學技術領域，涉及一種一種提取山香酸A的方法。
背景技術：
山香酸A (Asprellic acid A),分子式為C3tlH48O5,分子量為488. 71,無色棱晶，mp. 298_304°C。山香酸 A 是從唇形科(Labiatae)頭狀山香 Hyptis capitata Jacq.地上部分中分離得到一種三萜類化合物。藥理研究表明，山香酸A具有細胞毒活性，對A-549、HCT-8、P388 呈細胞毒活性。其 ED50(yg/ml)依次為 5. 9、4. 2、6. 7。現有技術中，尚未見制備山香酸A的生產工藝報道。

發明內容
本發明的目的是提供一種提取山香酸A的方法。為實現上述目的，本發明采用以下技術方案· Cl)以頭狀山香地上部分為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后，過60目篩備用；
(2)原料按照料液比1:12-18(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、4rC條件下酶解15-20min，得到酶解原料；
(3)將酶解原料投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，萃取壓力為28-45MPa，萃取溫度為35-55°C，萃取時間l_3h，解析壓力為6_8MPa，解析溫度為28-36 °C，收集萃取物；
(4)將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，二氯甲烷-甲醇溶劑系統梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶；
(5)將粗晶用甲醇重結晶得到山香酸A。所述步驟(2)中乙醇水溶液體積百分比為85%
所述步驟(3)中夾帶劑為85-95%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO2流量為
2-3. 5ml/g 生藥 /min。所述步驟(4)中所述高壓硅膠柱層析，硅膠目數為200目，柱壓為3_5MPa，柱內徑為50-200mm，層析柱徑高比為I :8_18。所述步驟(4)中所述二氯甲烷-甲醇的體積比為1:1-1:7。所述步驟(5)中所述甲醇為90%的甲醇水溶液。本發明的有益效果是本發明操作簡單，耗時短，得率高，易規模化生產；采用高壓層析柱，上樣量大，生產周期短，分離度好，產品純度高。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。實施例I :以頭狀山香地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后,過60目篩備用，稱取Ikg,按照料液比1:18(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、41°C條件下酶解20min，得到酶解原料，投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，夾帶劑為95%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO 2流量為3ml/g生藥/min，萃取壓力為28MPa，萃取溫度為55°C，萃取時間3h，解析壓力為6MPa，解析溫度為28°C，收集萃取物，將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數為200目)柱層析純化，柱壓為4. 5MPa，柱內徑為50mm，層析柱徑高比為I :15，二氯甲烷-甲醇按體積比為1:1、1:4、1:7梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶 ，得粗晶，粗晶用90%甲醇重結晶得到山香酸A，含量為90. 8%。實施例2:
以頭狀山香地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后,過60目篩備用，稱取Ikg,按照料液比1:12(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、41°C條件下酶解20min，得到酶解原料，投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，夾帶劑為85%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO 2流量為2ml/g生藥/min，萃取壓力為42MPa，萃取溫度為35°C，萃取時間I. 5h，解析壓力為8MPa，解析溫度為28°C，收集萃取物，將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數為200目)柱層析純化，柱壓為4MPa，柱內徑為200mm，層析柱徑高比為I : 12，二氯甲烷-甲醇按體積比為I: I、1: 3、1:7梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重結晶得到山香酸A，含量為 92. 1%。實施例3
以頭狀山香地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后,過60目篩備用，稱取Ikg,按照料液比1:15(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、41°C條件下酶解15min，得到酶解原料，投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，夾帶劑為90%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO 2流量為3. 5ml/g生藥/min，萃取壓力為45MPa，萃取溫度為55°C，萃取時間lh，解析壓力為7MPa，解析溫度為36°C，收集萃取物，將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數為200目)柱層析純化，柱壓為3. 5MPa，柱內徑為100mm，層析柱徑高比為I :8，二氯甲烷-甲醇按體積比為1:1、1:3、1:7梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重結晶得到山香酸A，含量為93. 3%。實施例4:
以頭狀山香地上部分為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后,過60目篩備用，稱取Ikg,按照料液比1:16(g/ml)的比例加入85%乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、41°C條件下酶解18min，得到酶解原料，投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，夾帶劑為90%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO 2流量為2. 5ml/g生藥/min，萃取壓力為35MPa，萃取溫度為48°C，萃取時間2h，解析壓力為6. 5MPa，解析溫度為35°C，收集萃取物，將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數為200目)柱層析純化 ，柱壓為5MPa，柱內徑為100mm，層析柱徑高比為I :18，二氯甲烷-甲醇按體積比為I: I、1: 3、1:7梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用90%甲醇重結晶得到山香酸A，含量為 92. 6%ο
權利要求
1.一種提取山香酸A的方法，其特征在于包括以下步驟 Cl)以頭狀山香地上部分為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機，在轉速為18000rpm條件下保持5min后，過60目篩備用； (2)原料按照料液比1:12-18(g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入O. 5%的纖維素酶，在超聲功率500W、4rC條件下酶解15-20min，得到酶解原料； (3)將酶解原料投入萃取釜中進行超臨界流體萃取，向萃取釜中泵入CO2和夾帶劑，萃取壓力為28-45MPa，萃取溫度為35-55°C，萃取時間l_3h，解析壓力為6_8MPa，解析溫度為28-36 °C，收集萃取物； (4)將所得萃取物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，二氯甲烷-甲醇溶劑系統梯度洗脫，收集山香酸A流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶； (5)將粗晶用甲醇重結晶得到山香酸A。
2.如權利要求I所述的一種提取山香酸A的方法，其特征在于所述步驟(2)中乙醇水溶液體積百分比為85%。
3.如權利要求I所述的一種提取山香酸A的方法，其特征在于所述步驟(3)中夾帶劑為85-95%的乙醇水溶液，用量為lml/g生藥，CO 2流量為2_3. 5ml/g生藥/min。
4.如權利要求I所述的一種提取山香酸A的方法，其特征在于所述步驟(4)中所述高壓硅膠柱層析，硅膠目數為200目，柱壓為3-5MPa，柱內徑為50_200mm，層析柱徑高比為I :8-18。
5.如權利要求I所述的一種提取山香酸A的方法，其特征在于所述步驟(4)中所述二氯甲烷-甲醇的體積比為1:1-1:7。
6.如權利要求I所述的一種提取山香酸A的方法，其特征在于所述步驟(5)中所述甲醇為90%的甲醇水溶液。
全文摘要
本發明公開了一種提取山香酸A的方法，其特征在于包括以頭狀山香地上部分為原料，通過組織破碎、纖維素酶酶解得到酶解原料，采用超臨界CO2萃取，解析收集得到三萜類提取物，再利用高壓硅膠柱層析純化，收集山香酸A流分，減壓濃縮，重結晶得到山香酸A。本發明的方法操作簡單，適合規模化生產，且能耗低、污染小、生產周期短，是一種環保型生產工藝。
文檔編號C07J63/00GK102887935SQ20121036649
公開日2013年1月23日 申請日期2012年9月28日 優先權日2012年9月28日
發明者蘇劉花 申請人:南京澤朗農業發展有限公司