本發明涉及抗真菌藥物領域，特別是涉及一種抗念珠菌的多肽及其用途、抗念珠菌的藥物。

背景技術：

念珠菌(candidaspp)屬于條件致病菌，存在于正常人體的口腔中、胃腸道和陰道粘膜上。對于健康的人體來說，念珠菌不會導致任何感染，可是對于免疫功能低下的人群，念珠菌會引起嚴重的感染。近年來，由于接受化療的癌癥患者和艾滋病患者的增多，免疫功能低下的人口不斷上升，再加上入侵性微創診療的廣泛應用和器官移植手術的增多，使得念珠菌感染的個案也逐年增加。念珠菌也成為了最常見的院內感染病原菌之一，有很高的發病率和死亡率。

關于念珠菌藥物敏性的調查結果表明，100.0％的光滑念珠菌，4.9％的熱帶念珠菌，2.9％的平滑念珠菌和0.8％的白色念珠菌對氟康唑有抗藥性；9.8％的熱帶念珠菌，7.6％的近平滑念珠菌，5.0％的克柔念珠菌和0.6％的白色念珠菌對伏立康唑有抗藥性。如今，所有的棘白菌素都能有效的抑制大多數念珠菌，有報道稱發現只有38.1％的光滑念珠菌對卡泊芬凈是敏感的。

在浙江紹興市人民醫院的調查結果顯示，在2011年度住院病人分離出的1003株致病真菌，其中白色念珠菌為58.9％；其次為熱帶念珠菌，占23.4％。熱帶念珠菌對伏立康唑敏感率僅為0.9％，對氟康唑、5-氟胞嘧啶、伊曲康唑有不同程度的耐藥；光滑念珠菌對氟康唑、伊曲康唑的敏感率為79.8％；在四川川北醫學院附屬醫院和川大華西醫院檢測的396份醫院感染念珠菌標本中，白色念珠菌為(川北醫附院/華西醫院68.1％/70.2％)、熱帶念珠菌為(14.9％/9.0％)、光滑念珠菌為(5.7％/12.2％)、克柔念珠菌為(3.4％/2.4％)、近平滑念珠菌為(2.1％/1.6％)。這些真菌對兩性霉素b的敏感性最高，而對氟康唑有不同程度的耐藥。一項在廣西桂林醫學院附屬醫院的調查指出，被測的498念珠菌菌株中，白色念珠菌占59.84％，平滑念珠菌占18.27％。念珠菌菌屬對氟康唑、伊曲康唑的耐藥率較高，分別為22.8％和56.8％，而兩性霉素b、5-氟胞嘧啶的耐藥率較低，分別為7.9％和7.3％。

抗藥性菌株的出現是全世界都要面對的問題。由于目前沒有有效的抗真菌疫苗，治療真菌感染主要依靠各種抗菌素。在沒有新藥投入市場時，醫生多數的做法就是加大用藥劑量和混合用藥。不幸的是，所有的抗真菌藥物都具有細胞毒性，越高濃度越為明顯，混合用藥正在被熱烈討論。近年來，由于抗菌肽擁有特殊的作用機理，不容易產生耐藥性，再加上化學合成工藝的改善，備受各國研究人員的關注。這些抗菌肽包括防御素，cathelicidins，histatins(富組蛋白)和植物環蛋白。因此，開發抗念珠菌的新藥是一個有效解決抗藥菌株的方法。

技術實現要素：

本發明提出一種抗念珠菌的多肽及其用途、抗念珠菌的藥物。

本發明的技術問題通過以下的技術方案予以解決：

一種抗念珠菌的多肽，所述多肽的氨基酸序列包含選自以下的氨基酸序列中的任一條：

seqidno:1：lystrplysleuargtrpcyslysglyglyphevalcyslystrparg；

seqidno:2：lystrplysleuargtrpargcyslysglyglyphevalcyslystrparg；seqidno:3：lystrplysleuargtrpcyslysproprophevalcyslystrparg；

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優選地，所述念珠菌為白色念珠菌、克柔念珠菌和光滑念珠菌中的至少一種。

一種所述的多肽在制備用于治療念珠菌感染的藥物中的用途。

一種抗念珠菌的藥物，所述藥物中的活性成分為所述的多肽。

本發明的有益效果包括：實驗表明，本發明設計的多肽結構簡單，具有抑制念珠菌的作用，同時該多肽具有人紅細胞溶血率低的優點。

附圖說明

圖1～圖3是本發明具優選實施例中的多肽對人紅細胞的溶血試驗結果圖。

具體實施方式

下面對照附圖并結合優選的實施方式對本發明作進一步說明。

本發明提供一種抗念珠菌的多肽，在具體的實施方式中，所述多肽的氨基酸序列包含seqidno:1～seqidno:12所示的氨基酸序列中的任一條。在優選的實施例中，所述多肽的氨基酸序列可以是seqidno:1～seqidno:12所示的氨基酸序列中的任一條。在另一些優選的實施例中，所述多肽的氨基酸序列也可以是在具有seqidno:1～seqidno:12所示的任一連續氨基酸序列的基礎上，在n端和/或c端再連接至少一個不影響其抗念珠菌活性的氨基酸殘基。

以下，以所述多肽的氨基酸序列選自以下表一的氨基酸序列中的任一條的優選實施例進行說明。

表一：本發明優選實施例的氨基酸序列

同時，本實施例中，還提供了一組比較例，該比較例中的多肽選自以下表二的氨基酸序列中的任一條。

表二：比較例中的氨基酸序列

采用固相多肽合成技術分別合成以上20條多肽，具體來說，首先使用dcm(二氯甲烷)溶脹活化2-氯三苯甲基氯樹脂，將含有fmoc(芴甲氧羰酰基)保護基的氨基酸通過酰胺鍵形成的方法連接到樹脂上，然后脫去fmoc保護基，重復數次以上步驟，按照各個氨基酸序列將特定的氨基酸連接到樹脂上，最后將多肽從樹脂上剪切 下來，通過hplc(高效液相色譜)分離純化，再利用質譜分析分子量。

將以上20條多肽進行如下抗真菌活性實驗：參照美國國家臨床實驗室標準化委員會(nccls)m27-a的研究方案，首先將被測多肽溶到100μlpbs緩沖液中，然后加入96孔板中兩倍稀釋，再加入2000個/ml菌體的懸液100ml，37℃培養48小時，以無菌生長的最小稀釋濃度作為該多肽的mic(最低抑菌濃度)。測得的以上20條多肽的抗菌活性如下表三所示。

表三：多肽的抗菌活性(mic)(單位：μm)

注：*樣品不溶于rpmi溶液；**該菌株為臨床耐氟康唑菌株；

-沒有進行測試；

candidaalbicans為白色念珠菌；candidakrusei為克柔念珠菌；candidaglabrata為光滑念珠菌。其中，mya-2876，90028，6258，90030為該菌的atcc號碼；11b67479-5為香港威爾斯親王醫院菌株檔案編號。

將本發明優選實施例中的多肽(即以上氨基酸序列seqidno:1～seqidno:12)進行對人紅細胞的溶血實驗，具體如下：首先，將50μl各多肽用pbs在 96孔板上進行連續二倍稀釋，再在每個孔中加入50μl用pbs稀釋到人紅細胞的體積分數為1.5％的人紅細胞。將96孔板置于37℃，體積分數為5％co2的環境中24小時。培養結束后，把96孔板離心，吸取上清到另一個96孔板中，測量414nm下的吸光率。計算出不同濃度下各多肽的人紅細胞溶血率。圖1-3是多肽對人紅細胞的溶血試驗結果圖，其中，實驗結果為平均值±標準差，實驗重復三次。在圖1的柱狀圖中，每個橫坐標值對應的柱子從左至右即c1、c2、c3和c4分別表示seqidno:1～seqidno:4所示的多肽的試驗結果；在圖2的柱狀圖中，每個橫坐標值對應的柱子從左至右即c7、c8、c9和c10分別表示seqidno:7～seqidno:10所示的多肽的試驗結果；在圖3的柱狀圖中，每個橫坐標值對應的柱子從左至右即c5、c6、c11和c12分別表示seqidno:5、seqidno:6、seqidno:11和seqidno:12所示的多肽的試驗結果。

本發明的具體實施方式中的多肽具有20個左右的氨基酸，多肽鏈較短，容易合成，且多肽的二級結構較為簡單，具有抑制念珠菌的作用，同時具有人紅細胞溶血率低的優點，而現有的部分抗菌肽，例如cathelicidin，雖具有抗菌性，但是同時它溶血率較高，這樣的多肽細胞毒性較大。

本發明還提供一種上述具體實施方式中的任一多肽在制備用于治療念珠菌感染的藥物中的用途。

另外，本發明還提供一種抗念珠菌的藥物，其活性成分為上述具體實施方式中的任一多肽。

以上內容是結合具體的優選實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干等同替代或明顯變型，而且性能或用途相同，都應當視為屬于本發明的保護范圍。