本發明涉及植物細胞培養技術，進一步涉及植物細胞的營養條件設計，具體涉及一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基。

背景技術：

植物細胞培養技術是以離體植物細胞或原生質體為對象，以細胞量擴增和目標代謝產物累積為目的的培養工藝。對于以獲得特定代謝產物為目的的細胞培養而言，其主要工藝環節不僅在于細胞量的擴增，同時，目標代謝產物的誘導合成對培養效益更為重要。在植物細胞的培養過程中，培養條件和營養條件是影響產量的最重要因素，其中培養條件是指溫度、溶氧、光照、pH等環境條件的控制，而營養條件主要指植物細胞的培養基。由于在封閉培養環境中培養基是植物細胞的唯一營養來源，因此培養基的成分對植物細胞的生長水平、代謝產物類別具有極其重要的影響，尤其對于以獲得特定代謝產物為目的的細胞培養而言，培養基往往是影響培養效率的關鍵因素。

肉蓯蓉是一種生長于鹽堿地和戈壁灘的名貴中藥材，具有滋腎壯陽、清除自由基以及增強免疫力等功效，其主要的藥用成分是苯乙醇苷，包括松果菊苷、洋丁香苷、2’-乙酰洋丁香苷和肉蓯蓉苷A等。肉蓯蓉寄生在梭梭等植物的根上，由于亂采濫挖，造成資源短缺，植被破壞嚴重，加速了土地沙化。

現有技術中苯乙醇苷的提取多以天然的肉蓯蓉全草為原料，一方面植物全草生長緩慢、產量較低，另一方面作為常規生長狀態的植物全草，其代謝產物較為規律，難以對目標代謝產物實現大量分泌。在這種情況下肉蓯蓉組織培養和細胞懸浮培養技術應運而生，在相關培養技術中，培養基成分作為其唯一營養來源對于細胞生長速度和代謝產物類別具有重要影響，現有技術中常規的培養基對肉蓯蓉細胞自身生長以及苯乙醇苷分泌量的促進作用均不夠理想。

技術實現要素：

本發明旨在針對現有技術的技術缺陷，提供一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，以解決現有技術中肉蓯蓉細胞培養效果不佳的技術問題。

本發明要解決的另一技術問題是現有技術的肉蓯蓉細胞培養過程中，目標代謝產物苯乙醇苷的產量較低。

為實現以上技術目的，本發明采用以下技術方案：

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L。

作為優選，該培養基還含有1％(g/mL)的酵母提取物。

作為優選，該培養基還含有5mg/L的殼聚糖。

作為優選，該培養基還含有1g/L的葫蘆茶壓榨汁。

作為優選，該培養基還含有1g/L的虎耳草壓榨汁。

作為優選，該培養基還含有1g/L的回回蒜壓榨汁。

作為優選，該培養基還含有1g/L的雞骨草壓榨汁。

作為優選，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)，殼聚糖5mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L，虎耳草壓榨汁1g/L，回回蒜壓榨汁1g/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

在以上技術方案中，所述MS培養基可以依據本領域的一般技術常識進行配制，當然也可以采用以下具體配方的MS培養基：NH₄NO₃ 1650mg/L，KNO₃ 1900mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，FeSO₄·7H₂O 27.8mg/L，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，煙酸0.5mg/L，維生素B6 0.5mg/L，維生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。

在以上技術方案中，葫蘆茶、虎耳草、回回蒜、雞骨草分別指其新鮮全草。本發明中所述的壓榨汁，是指利用物理方法獲取的各原料的新鮮汁液，包括但不限于壓榨、粉碎離心等常規方法。

本發明通過實驗手段廣泛篩選了作為肉蓯蓉細胞生長的營養物質，依據肉蓯蓉細胞自身代謝特性和實際使用效果確定了本發明配方。該配方以硝酸銨、硝酸鉀作為氮源，以磷酸二氫鉀為磷源，在MS培養基的基礎營養成分下，以改善代謝產物為目的添加了2.4-D、6-BA、NAA等植物激素，同時添加了酵母提取物和殼聚糖等誘導物，通過上述改良極大的提高了肉蓯蓉細胞的生長速率以及苯乙醇苷的分泌量。在此基礎上本發明意外的發現通過添加特定種類及成分的中藥材有助于提升細胞培養密度。基于以上有益的發現，本發明通過實驗手段優選了葫蘆茶、虎耳草、回回蒜、雞骨草等原本用于人類疾病治療的中藥材成分，所得培養基意外獲得了突出的培養效果，使得肉蓯蓉細胞培養密度顯著提升，同時其生長速度更快。本發明以創新性的技術手段獲得優越的技術效果，同時成本較低、易于實現，因此具有良好的應用前景。

具體實施方式

以下將對本發明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節，在以下實施例中對屬于公知的結構或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術和科學術語具有與本發明所屬領域技術人員普遍理解的相同含義。

實施例1

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L。

實施例2

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)。

實施例3

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，殼聚糖5mg/L。

實施例4

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L。

實施例5

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，虎耳草壓榨汁1g/L。

實施例6

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，回回蒜壓榨汁1g/L。

實施例7

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

實施例8

一種用于肉蓯蓉細胞的合成培養基，該培養基含有MS培養基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 0.25mg/L，植物激素6-BA 2mg/L，植物激素NAA 1mg/L，酵母提取物1％(g/mL)，殼聚糖5mg/L，葫蘆茶壓榨汁1g/L，虎耳草壓榨汁1g/L，回回蒜壓榨汁1g/L，雞骨草壓榨汁1g/L。

實施例9

本實施例用于評價以上實施例1～8所提供的培養基作為合成培養基時對肉蓯蓉細胞的苯乙醇苷產量的影響，實驗結果如表1所示。

表1不同培養基作為合成培養基時對肉蓯蓉細胞的苯乙醇苷產量的影響

由此可見，利用本發明所提供的培養基作為合成培養基培養肉蓯蓉細胞時，對其苯乙醇苷產量具有確切的促進作用。

以上對本發明的實施例進行了詳細說明，但所述內容僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明。凡在本發明的申請范圍內所做的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。