本發明涉及抗癌藥物
技術領域：
，具體涉及膀胱癌細胞抑制劑及制備方法。
背景技術：
：膀胱癌是指發生在膀胱黏膜上的惡性腫瘤，是泌尿系統最常見的惡性腫瘤，也是全身十大常見腫瘤之一，占我國泌尿生殖系腫瘤發病率的第一位。膀胱癌可發生于任何年齡，甚至于兒童，其發病率隨年齡增長而增加，高發年齡50～70歲。男性膀胱癌發病率為女性的3～4倍。膀胱癌的治療方法有很多種，主要是以手術療法為主，其中放療、化療以及生物治療起著輔助的作用。膀胱癌具有易復發、易侵襲等特點。而通常用于放療、化療的藥物大多為化學藥物，雖然可控制部分癌細胞的發展，緩解癥狀，但由于化療藥物毒副作用大，對身體傷害大，同時免疫能力低下產生一系列并發癥，不良反應大，同時治療費用昂貴，有相當多的患者不能耐受不良反應而放棄治療。同時由于癌細胞暴露于亞致死濃度的化療藥物中往往會產生耐藥性，并常常交叉耐受其他一些抗癌藥物，因此由于化療藥物的耐藥性和癌細胞轉移的產生常常使治療達不到預期效果。研究出能選擇性抑制癌細胞的生長擴散或殺死癌細胞，而對正常細胞毒性小，且在長期用藥條件下仍能保留其療效的抗腫瘤藥物是目前研究的重點。技術實現要素：本發明的目的就是提供一種膀胱癌細胞抑制劑及制備方法。該抑制劑具有穩定性好，合成方法簡單，抑制能力強的特點，同時具有很強的抗腫瘤活性，能為抗膀胱癌藥物的研發提供理論指導。本發明的技術方案：一種膀胱癌細胞抑制劑，其結構式如下：本發明的膀胱癌細胞抑制劑化學名稱為：二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·(R,R)-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物，其具有手性，屬于手性Δ型，Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+(Δ-Pt)。本發明的膀胱癌細胞抑制劑中Pt是二價金屬陽離子。本發明中的膀胱癌細胞抑制劑的分子量為706.55。本發明的膀胱癌細胞抑制劑的制備方法，包括如下步驟：(1)按1,10-鄰菲啰啉-5,6-二酮(化合物1)與4-甲氧基苯甲醛的摩爾比為1:1～1.5稱取原料，按每摩爾的1，10-鄰菲啰啉-5,6-二酮加入0.5～1L的乙醇，再按1，10-鄰菲啰啉-5,6-二酮與乙酸銨的摩爾比為1:25～30加入乙酸銨，在80～85℃水浴下，加熱回流2～4h，冷卻至室溫；在冰浴條件下，攪拌緩慢滴加濃氨水至中性，得到2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉的黃色沉淀物(化合物2)；(2)再按每摩爾的2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉的黃色沉淀物中加入4～5L的乙醇，水浴加熱到80～85℃使黃色沉淀物，得到黃色溶液；再將預先制備好的氯亞鉑酸鉀溶液緩慢滴入到黃色溶液中，析出黃色沉淀，繼續回流攪拌2～3h，使反應完全，趁熱抽濾，除去未反應物，水洗2～3次，過濾，烘干，得黃色的2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·二氯合鉑(Ⅱ)(配合物3)；(3)每摩爾的2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·二氯合鉑(Ⅱ)(配合物3)中加入60～70L的無水甲醇，70～75℃下反應10～20分鐘后，加入配合物3的6～8倍摩爾比的1,2-環己二胺(化合物4)，恒溫下回流至全溶解，過濾除去不溶物，濾液緩慢揮發，析出紅色沉淀，用乙醇重結晶，即得到膀胱癌細胞抑制劑(配合物5)。作為技術方案的進一步優選，上述步驟(1)中濃氨水體積分數為25-28％，加入量為每摩爾的1，10-鄰菲啰啉-5,6-二酮滴加8～10mL。作為技術方案的進一步優選，上述步驟(2)中氯亞鉑酸鉀溶液的制備為：先將氯亞鉑酸鉀加水，50～60℃下加熱溶解，再按每摩爾的氯亞鉑酸鉀加0.8～1L的二甲亞砜，加熱攪拌5～10min即可得到。氯亞鉑酸鉀的加水量為每摩爾氯亞鉑酸鉀中加300～400mL水。本發明的膀胱癌細胞抑制劑，它在制備抗膀胱癌和人大細胞肺癌細胞藥物中的應用。本發明的化學反應式：本發明各組分在膀胱癌細胞抑制中的作用：Pt+的作用：與DNA的某些親核基團(如磷酸氧位點或堿基氮、氧位點)直接螯合，引起癌細胞的DNA損傷，使DNA在復制和轉錄當中受到障礙，從而阻止了癌細胞的生長和分裂，并導致其死亡。二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)的作用：有利于插入DNA的雙螺旋的堿基對之中。本發明的膀胱癌細胞抑制劑，應用到制備抗膀胱癌和人大細胞肺癌細胞藥物中。本發明的有益效果：本發明的膀胱癌細胞抑制劑，分子結構穩定，合成方法簡單。該膀胱癌細胞抑制劑中，由于咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉的引入，大大增強了配合物的細胞跨膜能力。同時抗腫瘤實驗表明，該類配合物具有很強的抗腫瘤活性，其對T–24(人膀胱癌細胞)和NCI–H460(人大細胞肺癌細胞)增殖的抑制能力比順鉑好，在抗腫瘤藥物方面將具有極大的應用潛力，為制備抗膀胱癌和人大細胞肺癌細胞藥物提供理論指導。附圖說明圖1為本發明的膀胱癌細胞抑制劑的結構式；圖2為本發明膀胱癌細胞抑制劑的紅外光譜圖，Δ-Pt的紅外光譜為(KBr,cm–1)：3388,2935,1590,1509,1459,1360,1242,1172,1027,846,809,752,714.配合物中的ν(C-N)在1360cm-1處。配合物中苯環的骨架伸縮振動位于1590cm-1。它在1242cm-1和1027cm-1處的吸收峰可分別指認為ν(C-O-C)的對稱和不對稱伸縮振動。圖3為本發明實施例1的膀胱癌細胞抑制劑對六種人腫瘤細胞BEL–7404(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、NCI–H460(人肺癌細胞)、T–24(膀胱癌細胞)、MGC–803(人胃癌細胞)和HeLa229(人宮頸癌細胞)的抑制率圖。圖4為本發明實施例1的膀胱癌細胞抑制劑對六種人腫瘤細胞BEL–7404(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、NCI–H460(人肺癌細胞)、T–24(膀胱癌細胞)、MGC–803(人胃癌細胞)和HeLa229(人宮頸癌細胞)的IC50的柱狀圖。圖5為本發明實施例1的Δ-Pt膀胱癌細胞抑制劑與端粒四鏈體Htel-1-DNA復合體系的紫外吸收光譜圖(膀胱癌細胞抑制劑的濃度為2.0×10–3mol/L，[DNA]/[膀胱癌細胞抑制劑]＝0–1)。圖6為本發明實施例1的Δ-Pt膀胱癌細胞抑制劑與端粒四鏈體Htel-DNA復合體系的紫外吸收光譜圖(膀胱癌細胞抑制劑的濃度為2.0×10–3mol/L，[DNA]/[膀胱癌細胞抑制劑]＝0–1)。圖7為本發明實施例1的Δ-Pt膀胱癌細胞抑制劑分別與端粒四鏈體DNA復合體系的熒光競爭圖。具體實施方式下面通過實施例結合附圖對本發明作進一步說明。以下實施例中，化合物1：鄰菲啰啉-5,6-二酮；化合物2：2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉的黃色沉淀物；配合物3：2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·二氯合鉑(Ⅱ)；化合物4：1,2-環己二胺；配合物5(膀胱癌細胞抑制劑)：本發明產品，二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物。實施例1一、本發明的制備方法：(1)化合物2的制備：稱取1mol的鄰菲啰啉-5,6-二酮(化合物1)與1mol的4-甲氧基苯甲醛，加入乙醇1000mL，加熱到80℃，使鄰菲啰啉-5,6-二酮溶解，再分批加入乙酸銨3850g，在80℃水浴加熱回流4h，冷卻至室溫；在冰浴條件下，攪拌，緩慢滴加濃氨水(25-28％)至溶液中性，得到2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉的黃色沉淀物(化合物2)，沉淀過濾，乙醇洗滌，真空干燥；(2)配合物3的制備：預先制備氯亞鉑酸鉀溶液，在2.4mmol氯亞鉑酸鉀中，加水0.8mL，60℃加熱溶解，加入2mL的二甲亞砜，60℃加熱攪拌5min即可。在0.1mol化合物2中加入400mL的乙醇，水浴加熱到80℃使化合物2溶解，將預先制備氯亞鉑酸鉀溶液緩慢滴入到化合物2溶液中，很快析出黃色沉淀，繼續回流攪拌2h，使反應完全，趁熱抽濾，水洗3次，除去未反應的配體和氯亞鉑酸鉀，烘干，得黃色的配合物3：2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·二氯合鉑(Ⅱ)。(3)膀胱癌細胞抑制劑的制備：在0.6mmol配合物3中加入加入42mL無水甲醇，75℃下反應10～20分鐘后，加入配合物3的8倍毫摩爾，即4.8mmol的環己二胺(化合物4)，78℃回流至混合液變澄清，過濾除去不溶物，濾液緩慢揮發，析出紅棕色沉淀，用無水乙醇重結晶，得到膀胱癌細胞抑制劑：二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)(配合物5)，即Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+，其結構式見圖1。二、產品檢驗：產物經過電噴霧質譜、核磁共振譜、紅外光譜和元素分析進行結構測定，確定目標配合物為Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+：C26H28PtN6O，具體的波譜特性如下：Δ-Pt核磁共振譜：1HNMR(400MHz,DMSO)δ9.19(d,J＝8.1Hz,2H),8.84(d,J＝4.8Hz,2H),8.34(d,J＝8.3Hz,2H),8.03–7.92(m,2H),7.22(s,2H),7.04(d,J＝8.5Hz,2H),6.52(s,2H),3.86(d,J＝16.3Hz,3H),2.13(d,J＝11.4Hz,2H),1.55(d,J＝53.7Hz,6H),1.21(s,2H).Δ-Pt電噴霧質譜：ESI-MSm/z:671.16[M-Cl]+,635.38[M-2Cl]2+.元素分析C26H28PtN6O實測值(計算值)/％：C49.18(49.12)；H4.49(4.44)；N13.17(13.22)；因此，可確定上述紅色沉淀為二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物。三、產品性能檢測方法：為了充分說明本發明所述的二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物在制藥中的用途，申請人以順鉑為陽性對照，對實施例1所得的抑制劑對多種人類腫瘤細胞株進行了體外抑制活性實驗。(1)用二甲基亞砜(DMSO)分別將Δ-Pt和順鉑配成2.0×10-3mol/L的儲備液，緩沖溶液(pH＝7.35)為0.1mol·L-1的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸(Tris-HCl)，MTT試劑(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)的濃度為5mg/mL。(2)BEL–7404(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、NCI–H460(人肺癌細胞)、T–24(膀胱癌細胞)、MGC–803(人胃癌細胞)和HeLa229(人宮頸癌細胞)細胞株均置于37℃、5％CO2充分濕化條件下的培養箱中，接種于含10％滅活新生牛血清的PPMI1640培養液中培養。(3)將所有化合物配制成10μg/mL，助溶劑DMSO終濃度不超過1％，測試該濃度下各化合物對癌細胞的抑制率。(4)取處于對數生長期的細胞，每孔180μL(約4500-5000個細胞)含細胞的培養基接種于96孔培養板，于37℃、5％CO2充分濕化條件下培養24h。(5)待細胞貼壁后，按每孔20μL的量加入樣品,每個樣品設6個復孔，同時設定相應的空白對照。(6)繼續培養48h后，每孔加入10μLMTT試劑(濃度為5mg/mL)，繼續孵育4h后，吸棄上清液，每孔再加入150μLDMSO，輕微震蕩反應5-8min，使結晶顆粒充分溶解。(7)空白對照組調零，用酶標儀以490nm波長測定去除本底光吸收值后的吸光度值0值)，計算細胞增殖抑制率。可根據公式計算化合物的抑制率：抑制率＝(1-加藥組OD值/對照組OD值)×100％。(8)所有實驗均重復3次后取平均值。得到本發明的Δ-Pt和其對六種人腫瘤細胞的抑制率如圖3和表1所示。表1MTT法分析抑制劑及順鉑對多種細胞的抑制率(％)從圖3及表1可見，本發明實施例1所制得的產物Δ-Pt，對六種人腫瘤細胞株均表現出顯著的體外抗腫瘤活性，其抑制率分別在31.69至56.21之間。與臨床用鉑類藥物順鉑相比，Δ-Pt對T–24膀胱癌細胞株，表現出比順鉑更高的體外增殖抑制活性。實施例2一、本發明的制備方法：(1)化合物2的制備：稱取2mol的鄰菲啰啉-5,6-二酮(化合物1)與3mol的4-甲氧基苯甲醛，加入2L乙醇和乙酸銨4000g，在80℃水浴下，加熱回流4h，冷卻至室溫；在冰浴條件下，攪拌，緩慢滴加200mL濃氨水(25-28％)至中性，得到黃色沉淀物(化合物2)；(2)配合物3的制備：預先制備氯亞鉑酸鉀溶液，在2.4mmol氯亞鉑酸鉀中，加水1mL，50℃加熱溶解，加入3mL的二甲亞砜，50℃加熱攪拌10min即可。在2.4mmol化合物2中加入9.6mL的乙醇，水浴加熱到85℃，加熱20分鐘使化合物2溶解，將預先制備氯亞鉑酸鉀溶液緩慢滴入到化合物2溶液中，很快析出黃色沉淀，繼續回流攪拌2.5h，使反應完全，趁熱抽濾，水洗3次，除去未反應的配體和氯亞鉑酸鉀，烘干，得黃色的配合物3。(3)膀胱癌細胞抑制劑的制備：在0.6mmol配合物3中加入36mL的無水甲醇，室溫攪拌20分鐘后，加入配合物3的7倍毫摩爾，即4.2mmol的(化合物4)，升溫至70℃回流使全溶解，趁熱過濾，濾液緩慢揮發，析出紅色沉淀，用乙醇重結晶，得到產品，膀胱癌細胞抑制劑：二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物(配合物5)Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+。二、產品性能檢測方法：為了充分說明本發明所述的手性-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉-環己二胺鉑配合物在制藥中的用途，申請人以順鉑為陽性對照，對實施例1所得的配合物對多種人類腫瘤細胞株進行了體外抑制活性實驗。(1)用二甲基亞砜(DMSO)分別將Δ-Pt和順鉑配成2.0×10-3mol/L的儲備液，緩沖溶液(pH＝7.35)為0.1mol·L-1的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸(Tris-HCl)，MTT試劑(3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴鹽)的濃度為5mg/mL。(2)BEL–7404(人肝癌細胞)、HepG2(人肝癌細胞)、NCI–H460(人肺癌細胞)、T–24(膀胱癌細胞)、MGC–803(人胃癌細胞)和HeLa229(人宮頸癌細胞)細胞株均置于37℃、5％CO2充分濕化條件下的培養箱中，接種于含10％滅活新生牛血清的PPMI1640培養液中培養。(3)將所有化合物配制成10μg/mL，助溶劑DMSO終濃度不超過1％，測試該濃度下各化合物對癌細胞的抑制率。(4)取處于對數生長期的細胞，每孔180μL(約4500-5000個細胞)含細胞的培養基接種于96孔培養板，于37℃、5％CO2充分濕化條件下培養24h。(5)待細胞貼壁后，按每孔20μL的量加入樣品,每個樣品設6個復孔，同時設定相應的空白對照。(6)繼續培養48h后，每孔加入10μLMTT試劑(濃度為5mg/mL)，繼續孵育4h后，吸棄上清液，每孔再加入150μLDMSO，輕微震蕩反應5-8min，使結晶顆粒充分溶解。所有實驗均重復3次后取平均值。對初篩抗腫瘤效果好的受試化合物，繼續用5個濃度梯度做相應細胞株的IC50值，得到本發明的Δ-Pt和其對六種人腫瘤細胞的IC50值如圖4和表2所示。表2MTT法分析配合物及順鉑對六種人癌細胞株的細胞毒性從體外增殖抑制活性測試結果來看，本發明實施例1所制得的產物Δ-Pt，對六種人腫瘤細胞株均表現出顯著的體外抗腫瘤活性，其IC50值在12.26至106.65之間，與臨床用鉑類藥物順鉑相比，Δ-Pt除對人肝癌細胞HepG2、人胃癌細胞MGC–803、人宮頸癌細胞HeLa229和人肝癌細胞BEL–7404抗腫瘤活性較順鉑稍弱外，其對NCI–H460(人大細胞肺癌細胞)和T–24(人膀胱癌細胞)兩種細胞株，表現出比順鉑更高的體外增殖抑制活性，其中，對T–24人膀胱癌細胞的增殖的抑制能力約為順鉑的2倍。以上數據表明，本發明所述的實施例1所制得的產物在抗腫瘤藥物方面具有十分廣闊的應用前景，有望用于制備膀胱癌和人大細胞肺癌細胞的抗腫瘤藥物。實施例3一、本發明的制備方法：(1)化合物2的制備：稱取2mol的鄰菲啰啉-5,6-二酮(化合物1)與2.5mol的4-甲氧基苯甲醛，加入1.5L的乙醇，和乙酸銨3900g，在85℃水浴下，加熱回流4h，冷卻至室溫；在冰浴條件下，攪拌，緩慢滴加180mL濃氨水(25-28％)至中性，得到黃色沉淀物(化合物2)；(2)配合物3的制備：預先制備氯亞鉑酸鉀溶液，在2.4mmol氯亞鉑酸鉀中，加水5mL，55℃加熱溶解，加入2.5mL的二甲亞砜，55℃加熱攪拌8min即可。在2.4mmol化合物2中加入10mL的乙醇，水浴加熱到80℃使化合物2溶解，將預先制備氯亞鉑酸鉀溶液緩慢滴入到化合物2溶液中，很快析出黃色沉淀，繼續回流攪拌1.5h，使反應完全，趁熱抽濾，水洗3次除去未反應的配體和氯亞鉑酸鉀，再依此用二甲亞砜、乙醇各洗滌一次，烘干，得黃色的配合物3。(3)膀胱癌細胞抑制劑的制備：室溫下，在45mL的無水甲醇中加入0.6mmol配合物3，再加入配合物3的6倍毫摩爾，即3.6mmol的環己二胺(化合物4)，68℃回流至全溶解，過濾除去不溶物，濾液緩慢揮發，析出紅色沉淀，用甲醇重結晶，得到產品，膀胱癌細胞抑制劑：二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物(配合物5)Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+。二、產品性能檢測方法：(1)用10％二甲基亞砜(DMSO)將Δ-Pt配成2.0×10-3mol/L的溶液。(2)Tris–HCl緩沖液：Tris5mmol/L，用HCl滴定調節至pH＝7.35，定容于1L容量瓶中，備用。(3)用三羥甲基氨基甲烷—鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液將端粒四鏈體DNA配成2.0×10-4mol/L的溶液。(4)在比色皿中加入3mL，2.0×10-3mol/L的配合物溶液，逐次加入1μL，2.0×10-4mol/L的端粒四鏈體DNA溶液。(5)每個混合液搖勻放置5min后，將其置于紫外-可見吸收光譜儀上掃描，結果如圖5-6所示。由圖5-6可知，隨著htel-1、htel濃度的增大，Δ-Pt-DNA復合體系的紫外吸收減少，其紅移及減色率見表3。Δ-Pt-DNA復合體系與DNA的鍵合強度Kb可以通過下列方程式確定：[DNA]/(εa–εf)＝[DNA]/(εb–εf)﹢1/[Kb(εb–εf)]此處，εa,εf和εb分別是DNA的已知濃度，未與化合物鍵合及已與化合物鍵合的相關系數，Kb是化合物與DNA的鍵合常數，[DNA]是DNA在0.1mol/L緩沖溶液(pH＝7.35)中的濃度。將[DNA]/(εa－εf)比[DNA]作圖，可以得到斜率1/(εb–εf)和截距1/[Kb(εb–εf)]，斜率和截距之比就可以得到鍵合常數Kb，Δ-Pt-DNA復合體系的鍵合常數見表3。由此可見，Δ-Pt-DNA較強地插入到DNA的堿基對之中，且還能通過溝槽鍵合與DNA作用。由上述實施例可知，本發明的Δ-Pt具有穩定性好，與癌細胞DNA作用較強的特點，有望用于制備膀胱癌的抗腫瘤藥物。表3化合物的紅(藍)移及減色率化合物藍移(nm)減色率(％)紅移(nm)減色率(％)藍移(nm)減色率(％)KbΔ-Pt-Htel-1016.67140.6607.506.27×105Δ-Pt-Htel025.00173.33128.571.56×106實施例4一、本發明的制備方法：(1)化合物2的制備：稱取2mol的鄰菲啰啉-5,6-二酮(化合物1)與2mol的4-甲氧基苯甲醛，加入乙醇2L和乙酸銨4620g，在82℃水浴下，加熱回流3.5h，冷卻至室溫；在冰浴條件下，攪拌，緩慢滴加濃氨水(25-28％)至中性，得到黃色沉淀物(化合物2)；(2)配合物3的制備：預先制備氯亞鉑酸鉀溶液，在2.4mmol氯亞鉑酸鉀中，加水0.8mL，60℃加熱溶解，加入2mL的二甲亞砜，60℃加熱攪拌5min即可。在3mmol化合物2中加入13mL的乙醇，水浴加熱到82℃使化合物2溶解，將預先制備氯亞鉑酸鉀溶液緩慢滴入到化合物2溶液中，很快析出黃色沉淀，繼續回流攪拌2.5h，使反應完全，趁熱抽濾，水洗2次除去未反應的配體和氯亞鉑酸鉀，再依次用二甲亞砜、水、乙醇各洗滌3次，趁熱過濾，烘干，得黃色的配合物3。(3)膀胱癌細胞抑制劑的制備：在0.6mmol配合物3中加入40mL的無水甲醇，70℃反應25分鐘后，加入配合物3的8倍毫摩爾，即4.8mmol的環己二胺(化合物4)，70℃回流至全溶解，過濾除去不溶物，濾液緩慢揮發，析出紅色沉淀，用乙醇重結晶，得到膀胱癌細胞抑制劑：二氯化-2-[4-(甲氧基)-苯基]咪唑并[4,5-f][1,10]-鄰菲啰啉·R,R-環己二胺合鉑(Ⅱ)配合物(配合物5)Δ-[Pt(chda)(p-MOPIP)]2+。二、產品性能檢測方法：(1)Tris–HCl緩沖液：Tris5mmol/L，用HCl滴定調節至pH＝7.35，定容于1L容量瓶中，備用。(2)用10％二甲基亞砜(DMSO)將Δ-Pt配成2.0×10-3mol/L的溶液。(3)將噻唑橙[TO]配成1.0×10-3的溶液，將CT-DNA、ds-26、Htel和Htel-1等四種G4-DNA配成1.0×10-4的溶液。(4)在比色皿中加入1.0×10-3mol/L的噻唑橙(TO)3.0ul，1.0×10-4的G4-DNA7.5ul，2990ul的三羥甲基氨基甲烷—鹽酸(Tris-HCl)緩沖溶液(pH＝7.35)，逐次加入3uL的配合物溶液，使配合物對DNA的濃度逐漸提高。(5)將上述每個混合液用二次亞沸蒸餾水稀釋至5mL后搖勻。搖勻放置5min后，將其置于熒光光譜儀上掃描(λex均為501nm，CT-DNA和ds-26的λem為526nm，Htel和Htel-1的λem為533nm)，結果如圖7所示。如圖7可見，配合物Δ-Pt與不同G–四鏈體DNA有很強的結合作用，Δ-Pt的DC50值在0.3–0.6μmol/L之間，與雙螺旋DNA(ds26)作用的DC50值為1.0μmol/L。抑制劑與G–四鏈體DNA結合能力強于雙螺旋DNA。當前第1頁1 2 3