本發明涉及一種姬松茸原生質體的制備方法。

背景技術：

為了提高食用菌產量和產品質量，以及抗病、抗蟲等抗逆性能，食用菌的育種越來越受到重視。然而由于食用菌的有性繁殖比較復雜，給雜交育種帶來困難，目前食用菌的育種工作多數是選種和馴化。近年來生物技術發展迅速，操作方法也日趨完善，在遺傳育種學上引起了廣泛的重視，通過原生質體培養為誘導突變體和遠緣雜交開辟了一條新的途徑。一般來說食用菌菌種保藏或擴大增殖都是利用菌絲體來進行，因此菌絲體是最容易取得的實驗材料。當然子實體和有性繁殖中的擔孢子，以及無性繁殖中的厚垣孢子、節孢子、粉孢子也都可以作為游離原生質體的材料。但要取得一定數量則不如前者方便，脫壁也比較困難。因此絕大多數都是用菌絲體作為游離原生質體的材料來源。在食用菌方面，近年來也開始進行了原生質體分離、培養和融合的研究，涉及的菇種有：香菇、金針菇、靈芝、糙皮側耳、羊肚菌、榆黃蘑、草菇、蘑菇等。不同菌絲體狀態、不同菌絲體培養基、不同滲透壓穩定劑、不同作用時間等因素對原生質體的制備與分離效果影響不同。

技術實現要素：

本發明提出一種姬松茸原生質體的制備方法。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得。

優選地，所述步驟（1）的菌絲培養時間為5d。

優選地，所述步驟（2）離心速率為160r/min。

優選地，所述步驟（3）離心速率為1000r/min。

優選地，在30攝氏度環境下作用4h。

本發明所述方法制備的姬松茸原生質體，制備方法簡單，成品率高，可工業化生產，實用性強。

具體實施方式

實施例1。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得。

實施例2。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得；所述步驟（1）的菌絲培養時間為5d。

實施例3。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得；所述步驟（1）的菌絲培養時間為5d；所述步驟（2）離心速率為160r/min。

實施例4。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得。

所述步驟（1）的菌絲培養時間為5d；所述步驟（2）離心速率為160r/min；所述步驟（3）離心速率為1000r/min。

實施例5。

一種姬松茸原生質體的制備方法，包括以下步驟：

（1）接種黃豆粒大小的菌塊于固體培養基平板中央，培養4-6d的菌絲體用于原生質體制備；

（2）于250ml燒瓶中裝入培養基，轉接于斜面菌種，于250攝氏度，160r/min環境中培養8-10h，取發酵液，經過無菌過濾得菌絲體備用；

（3）將菌絲體用滲透壓穩定劑洗滌，1000r/min的速度離心10min，重復洗滌兩次，用酶液在20-50攝氏度環境下作用2-5h；然后用無菌脫脂棉過濾，將濾液離心后，去除上清液后即得。

所述步驟（1）的菌絲培養時間為5d；步驟（2）離心速率為160r/min；步驟（3）離心速率為1000r/min；在30攝氏度環境下作用4h。