1.一種酪蛋白來源的降膽固醇肽,其特征在于,所述降膽固醇肽包含下述的氨基酸序列:SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2。
2.權利要求1所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,包含以下步驟:
(1)制備酪蛋白酶解液:配制40~60mg/mL的酪蛋白溶液,加入蛋白酶,蛋白酶的終濃度為50~70mg/mL,酶解pH為6.0~8.0,酶解溫度為45~50℃,酶解時間為3~4h,加熱滅活,離心取上清;
(2)制備酪蛋白肽超濾液:將步驟(1)收集的上清液進行超濾,超濾膜壓力為0.1~0.4MPa,流速為5~10mL/min;
(3)制備降膽固醇粗肽:采用凝膠色譜分離純化步驟(2)制備獲得的酪蛋白肽超濾液,220nm檢測出峰位置,收集各吸收峰,以膽固醇膠束溶解度抑制率為評價指標測定降膽固醇活性,具有降膽固醇活性的組分進行冷凍干燥;
(4)降膽固醇肽序列分析:采用超高效液相-質譜聯用分析降膽固醇粗肽的氨基酸序列;
(5)降膽固醇肽合成:根據步驟(4)的氨基酸序列分析結果合成降膽固醇肽,收集具有降膽固醇活性的多肽。
3.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述酪蛋白溶液濃度為50mg/mL,蛋白酶的終濃度為60mg/mL,酶解pH為7.0,酶解溫度為47.5℃,酶解時間為3.5h。
4.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,步驟(1)中所述蛋白酶為中性蛋白酶。
5.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,步驟(2)中所述超濾膜壓力為0.25MPa,流速為7.5mL/min。
6.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,步驟(3)中所述凝膠色譜采用的過濾介質為Sephadex G-10凝膠,蒸餾水平衡,上樣量為1~2%凝膠色譜柱體積,洗脫速度為2.5~3.5mL/min。
7.根據權利要求2所述的一種酪蛋白來源的降膽固醇肽的制備方法,其特征在于,步驟(4)所述超高效液相-質譜聯用分析中液相色譜分析柱采用的是ACQUITY UPLC BEH130 C18柱,規格為2.1×150nm,1.7μm,質譜儀采用的是WATERS MALDI SYNAPT Q-TOF MS。
8.權利要求1所述的酪蛋白來源的降膽固醇肽在功能食品中的應用。