1.一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,制備方法包括以下五個步驟:
步驟一: 將新鮮的牛跟腱用超純水清洗干凈,采用手術刀片剔除筋膜、碎骨、廋肉和脂肪,在-20℃冰箱中將牛跟腱冷凍至硬化,取出后沿著組織纖維方向將牛跟腱切成1mm厚度的跟腱片;
步驟二:稱取適量跟腱片置于消毒脫脂溶液中浸泡,機械攪拌,采用不銹鋼絲網濾去溶液,取出后用超純水清洗若干次;
步驟三:將步驟二處理后的跟腱片用堿性溶液浸泡進行脫雜蛋白,機械攪拌,間隔6~8h更換一次堿性溶液,采用不銹鋼絲網濾去溶液,取出后用超純水清洗若干次至跟腱片表面為中性(pH值為7);
步驟四:將步驟三中脫雜蛋白后的跟腱片放入絞肉機中絞碎,并將絞碎后的跟腱組織置于1000mL的酸性溶液中,采用勻漿機對其勻漿破碎若干次,每次勻漿5min;
步驟五:將步驟四中的勻漿液置于大容量的不銹鋼容器中,繼續向勻漿液中加入1000mL酸性溶液,再向其中加入適量的活性酶,攪拌消化,離心15~30min,取上清液備用;
步驟六:使用氫氧化鈉溶液將步驟五中的上清液中和至溶液呈中性,加入氯化鈉進行攪拌鹽析,離心15~30min,沉淀即為I型膠原蛋白初品,用超純水沖洗沉淀若干次,瀝干,將瀝干的沉淀溶解于透析液中,在進行透析;
步驟七:將步驟六中透析后的膠原原液進行干燥處理,取出后真空封裝。
2.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的I型膠原蛋白提取所有步驟所使用的溶液及超純水溫度均為15~25℃。
3.據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟二中消毒脫脂溶液為75%酒精和正己烷的混合溶液,75%乙醇與正己烷的體積比為1:1~5:1,優選75%乙醇:正己烷=3:1;消毒脫脂時間為6~24h,優選時間為12h;。
4.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟三中脫雜蛋白的堿性溶液是選氫氧化鈉、氫氧化鉀、碳酸鈉、碳酸鉀和碳酸氫鈉中任意一種配制的溶液,優選碳酸鈉;碳酸鈉溶液的濃度為0.01~1.0mol/L,優選濃度為0.05mol/L。
5.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟四中酸性溶液為乙酸溶液和檸檬酸溶液中的任意一種或兩種,優選乙酸溶液;溶液的濃度為0.01%~2.0%(質量分數),優選濃度為0.5%(質量分數)。
6.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟五中活性酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶和無花果蛋白酶中任意一種或兩種及以上,優選胃蛋白酶;活性酶的濃度為20~1000mg/L,優選濃度為100mg/L;消化時間12~72h,優選消化時間為24h。
7.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟六中氯化鈉濃度為1~5mol/L,優選濃度2 mol/L;鹽析時間為1~24h,優選鹽析時間為12h。
8.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟六中透析液為乙酸溶液,濃度為0.01mol/L;透析外液為0.001 mol/L的乙酸溶液或超純水,優選超純水。
9.根據權利要求1所述的一種提取I型膠原蛋白的方法,其特征在于,所述的步驟七中的干燥方法是輻射干燥或冷凍干燥,優選冷凍干燥;冷凍干燥溫度為-50℃;冷凍干燥時間為24~72h,優選時間為48h。