本發(fā)明涉及培養(yǎng)基制備技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

公共衛(wèi)生場所空氣的微生物受到消毒劑的化學(xué)成分影響，首先解決公共場所空氣中消毒作用的多種化學(xué)物質(zhì)成分是關(guān)鍵核心部分，并且需要嚴(yán)格掌握其作用時間。這項技術(shù)是根據(jù)公共衛(wèi)生場所中空氣消毒劑與微生物接觸一定時間之后，空氣中的微生物發(fā)生變化評價空氣消毒劑效果，以至于比較市面銷售的各種空氣消毒劑(包括室內(nèi)空氣消毒劑)及開發(fā)更有效地空氣消毒劑的開發(fā)與生產(chǎn)。目前為止，除去空氣中殘留消毒劑化學(xué)成分的方法已有很多，例如來源于中國期刊網(wǎng)2016年7期《心理醫(yī)生》，于2016年8月發(fā)表的殘余消毒劑的清除方法，針對消毒劑中存在的酸、堿的成分，即選用吸附、稀釋、離心、過濾等方法來除去殘留化學(xué)成分。但是這些方法存在局限性，稀釋方法的缺點是若標(biāo)本中存活的菌數(shù)已經(jīng)較少，經(jīng)過再稀釋后會使標(biāo)本中的細菌大幅度降低，導(dǎo)致在檢測室檢驗不出，致使假陰性的結(jié)果發(fā)生，過濾法使用過程相對比較復(fù)雜，對操作人員的技術(shù)要求較高，這些方法都比較簡單，局限性比較大，目前方法中使用較多的是化學(xué)中和法，現(xiàn)在中和劑種類有很多，但針對不同消毒劑和細菌，至今尚無理想的中和劑來進行處理，所以如何采取空氣樣本中不含殘余消毒劑多種化學(xué)物質(zhì)是這項技術(shù)的將解決核心部分，才能使空氣質(zhì)量檢測方法更準(zhǔn)確、可靠。為此，我們選用新型空氣采樣中和培養(yǎng)基技術(shù)，全面去除殘留的空氣消毒劑各種化學(xué)成分，以培養(yǎng)空氣中存在的細菌來考察對公共空氣中進行消毒的空氣消毒劑的效果高低，以至于評價公共衛(wèi)生環(huán)境中的空氣質(zhì)量。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基，該種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基的制備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂20-30g，吐溫-8020-60g，組氨酸2-10g，硫代硫酸鈉2-10g，巰基乙酸鈉1-2g，葡萄糖30-40g，胰蛋白胨20-30g，瓊脂40-50g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內(nèi)進行空氣前過濾處理，然后將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間25-35分鐘，溫度設(shè)置在80℃，溶解后形成溶液一，然后將葡萄糖、胰蛋白胨、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內(nèi)，攪拌混合10-20分鐘，溶解后形成溶液二，然后將溶液一內(nèi)溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合10-16分鐘，靜置冷卻10-20分鐘最后將得到的混合料中加入80-120毫升的水充分?jǐn)嚢?0-20分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解后形成培養(yǎng)基；

s3：調(diào)整ph：取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管三支，于第一、三管各加入欲測定ph的的培養(yǎng)基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標(biāo)準(zhǔn)管為ph標(biāo)準(zhǔn)比色管，然后精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定后與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調(diào)節(jié)為7，每加一滴后都需要充分混勻，比色后再加第二滴準(zhǔn)確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養(yǎng)基導(dǎo)入到容器內(nèi)，以高壓100-110kpa蒸汽融化10分鐘后，靜置高壓鍋內(nèi)過夜12小時，次日將培養(yǎng)基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養(yǎng)基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養(yǎng)基加熱融化，溫度為120-130℃，時間為1小時，然后靜置培養(yǎng)基30分鐘，使得培養(yǎng)基內(nèi)溫度冷至50℃左右，以無菌手續(xù)倒入滅菌平皿內(nèi)，平皿倒入的培養(yǎng)基約13-15mol/l，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養(yǎng)基以后高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為15-30min；

s7：檢定和保存：培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，制好的培養(yǎng)基放在4-6℃冰箱內(nèi)備用。

優(yōu)選的，所述步驟s2中的加熱裝置為電爐。

優(yōu)選的，所述步驟s3中的矯正液為過酸或過堿溶液，且過酸或過堿溶液采用0.1mol/l鹽酸溶液或者0.1mol/l氫氧化鈉。

優(yōu)選的，所述步驟s4中的容器為鋁鍋或者廣口搪瓷容器。

優(yōu)選的，所述步驟s5中的平皿的內(nèi)徑為九厘米。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：該種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基中和劑中的卵磷脂可中和季銨化合物，吐溫-80可中和酚類化合物，硫代硫酸鈉可中和具有氧化性的防腐劑如碘和氯，巰基乙酸鈉可中和含汞防腐劑，組氨酸可中和醛類防腐劑，上述物質(zhì)按比例混合后對殘留公共衛(wèi)生場所空氣消毒劑具有切實可靠的中和作用，能與殘留公共衛(wèi)生場所空氣消毒劑發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，生成對實驗微生物沒有殺滅或抑制其生長的作用、對培養(yǎng)成分沒有破壞作用、對物理性狀沒有影響的中和產(chǎn)物，對相應(yīng)殘留公共衛(wèi)生場所空氣消毒劑具有切實可靠的中和作用。

附圖說明

圖1為本發(fā)明工作流程圖；

圖2為本發(fā)明一般培養(yǎng)基處理后的細菌濃度示意圖；

圖3為本發(fā)明培養(yǎng)基處理后的細菌濃度示意圖；

圖4為本發(fā)明細菌在培養(yǎng)基處理前后對照圖。

具體實施方式

下面將結(jié)合本發(fā)明實施例中的附圖，對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發(fā)明中的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明保護的范圍。

實施例一

一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基，該種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基的制備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂20g，吐溫-8020g，組氨酸2g，硫代硫酸鈉2g，巰基乙酸鈉1g，葡萄糖30g，胰蛋白胨20g，瓊脂40g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內(nèi)進行空氣前過濾處理，然后將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間25分鐘，溫度設(shè)置在80℃，溶解后形成溶液一，然后將葡萄糖、胰蛋白胨、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內(nèi)，攪拌混合10分鐘，溶解后形成溶液二，然后將溶液一內(nèi)溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合10分鐘，靜置冷卻10分鐘最后將得到的混合料中加入80毫升的水充分?jǐn)嚢?0分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解后形成培養(yǎng)基；

s3：調(diào)整ph：取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管三支，于第一、三管各加入欲測定ph的的培養(yǎng)基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標(biāo)準(zhǔn)管為ph標(biāo)準(zhǔn)比色管，然后精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定后與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調(diào)節(jié)為7，每加一滴后都需要充分混勻，比色后再加第二滴準(zhǔn)確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養(yǎng)基導(dǎo)入到容器內(nèi)，以高壓100kpa蒸汽融化10分鐘后，靜置高壓鍋內(nèi)過夜12小時，次日將培養(yǎng)基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養(yǎng)基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養(yǎng)基加熱融化，溫度為120℃，時間為1小時，然后靜置培養(yǎng)基30分鐘，使得培養(yǎng)基內(nèi)溫度冷至50℃左右，以無菌手續(xù)倒入滅菌平皿內(nèi)，平皿倒入的培養(yǎng)基約13mol/l，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養(yǎng)基以后高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為15min；

s7：檢定和保存：培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，制好的培養(yǎng)基放在4℃冰箱內(nèi)備用。

實施例二

一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基，該種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基的制備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂25g，吐溫-8040g，組氨酸6g，硫代硫酸鈉6g，巰基乙酸鈉1.5g，葡萄糖35g，胰蛋白胨25g，瓊脂45g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內(nèi)進行空氣前過濾處理，然后將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間30分鐘，溫度設(shè)置在80℃，溶解后形成溶液一，然后將葡萄糖、胰蛋白胨、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內(nèi)，攪拌混合15分鐘，溶解后形成溶液二，然后將溶液一內(nèi)溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合13分鐘，靜置冷卻15分鐘最后將得到的混合料中加入100毫升的水充分?jǐn)嚢?5分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解后形成培養(yǎng)基；

s3：調(diào)整ph：取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管三支，于第一、三管各加入欲測定ph的的培養(yǎng)基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標(biāo)準(zhǔn)管為ph標(biāo)準(zhǔn)比色管，然后精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定后與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調(diào)節(jié)為7，每加一滴后都需要充分混勻，比色后再加第二滴準(zhǔn)確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養(yǎng)基導(dǎo)入到容器內(nèi)，以高壓105kpa蒸汽融化10分鐘后，靜置高壓鍋內(nèi)過夜12小時，次日將培養(yǎng)基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養(yǎng)基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養(yǎng)基加熱融化，溫度為125℃，時間為1小時，然后靜置培養(yǎng)基30分鐘，使得培養(yǎng)基內(nèi)溫度冷至50℃左右，以無菌手續(xù)倒入滅菌平皿內(nèi)，平皿倒入的培養(yǎng)基約14mol/l，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養(yǎng)基以后高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為22.5min；

s7：檢定和保存：培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，制好的培養(yǎng)基放在5℃冰箱內(nèi)備用。

實施例三

一種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基，該種公共衛(wèi)生場所空氣采樣中和培養(yǎng)基的制備方法步驟如下：

s1：選取材料：選取卵磷脂30g，吐溫-8060g，組氨酸10g，硫代硫酸鈉10g，巰基乙酸鈉2g，葡萄糖40g，胰蛋白胨30g，瓊脂40-50g，氯化鈉17g；

s2：過濾、溶解：將步驟s1選取的材料依次通入到活性炭過濾器內(nèi)進行空氣前過濾處理，然后將卵磷脂、吐溫-80、組氨酸、硫代硫酸鈉和巰基乙酸鈉添加在加熱裝置中加熱攪拌，攪拌時間35分鐘，溫度設(shè)置在80℃，溶解后形成溶液一，然后將葡萄糖、胰蛋白胨、瓊脂和氯化鈉添入到加熱裝置內(nèi)，攪拌混合20分鐘，溶解后形成溶液二，然后將溶液一內(nèi)溶解的混合溶液加入到溶液二，攪拌混合16分鐘，靜置冷卻20分鐘最后將得到的混合料中加入120毫升的水充分?jǐn)嚢?0分鐘，至各成分全部與水溶解均勻，溶解后形成培養(yǎng)基；

s3：調(diào)整ph：取與標(biāo)準(zhǔn)管同口徑的試管三支，于第一、三管各加入欲測定ph的的培養(yǎng)基5ml，并于第一管中加入0.2g/l的酚紅0.25ml作為測定管，充分混勻，在第二管加入蒸餾水5ml，標(biāo)準(zhǔn)管為ph標(biāo)準(zhǔn)比色管，然后精確緩慢的將矯正溶液向測定管進行矯正，直至顏色通過ph試紙測定后與標(biāo)準(zhǔn)管相同為止，顏色呈淡紫色，其ph值調(diào)節(jié)為7，每加一滴后都需要充分混勻，比色后再加第二滴準(zhǔn)確記錄加入的量；

s4：過濾澄清：將步驟s2中的培養(yǎng)基導(dǎo)入到容器內(nèi)，以高壓110kpa蒸汽融化10分鐘后，靜置高壓鍋內(nèi)過夜12小時，次日將培養(yǎng)基傾出，用刀將底部沉渣切去，再融化即可收清晰的培養(yǎng)基；

s5：分裝：向步驟s4中清晰的培養(yǎng)基加熱融化，溫度為130℃，時間為1小時，然后靜置培養(yǎng)基30分鐘，使得培養(yǎng)基內(nèi)溫度冷至50℃左右，以無菌手續(xù)倒入滅菌平皿內(nèi)，平皿倒入的培養(yǎng)基約15mol/l，輕搖平皿底，使培養(yǎng)基平鋪于平皿底部，待凝固后備用；

s6：滅菌：將步驟s5中凝固的培養(yǎng)基以后高壓蒸汽進行滅菌，溫度為115℃，時間為30min；

s7：檢定和保存：培養(yǎng)基制成后須經(jīng)檢定方可使用，檢定時將培養(yǎng)基放37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時，制好的培養(yǎng)基放在6℃冰箱內(nèi)備用。

由圖2可知一般的培養(yǎng)基對消毒劑中和不充分，抑制細菌的生長，導(dǎo)致細菌濃度不能夠增加，由圖3可知，根據(jù)實施例一、二、三的實驗結(jié)果總結(jié)得出：最佳實施方案為實施例二，實施例二中的中和培養(yǎng)基相對實施例一和實施例二的中和培養(yǎng)基其微生物的回收率明顯較高，而實施例一和三種細菌生長的速度還是有所抑制，增長速度較慢，所以該中和劑可消除空氣消毒劑對檢測結(jié)果的干擾，更好的殘留公共衛(wèi)生場所空氣消毒劑中的微生物數(shù)量，提高殘留公共衛(wèi)生場所空氣消毒劑中的微生物檢測的準(zhǔn)確性。。

盡管已經(jīng)示出和描述了本發(fā)明的實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員而言，可以理解在不脫離本發(fā)明的原理和精神的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求及其等同物限定。