本發明屬于生物，具體涉及一種廣譜抗甲型流感病毒sirna分子及其衍生物及其應用。

背景技術：

1、流行性感冒病毒，簡稱流感病毒(influenza?virus，iv)，屬于正粘病毒科(orthomyxoviridae?family)，是具有囊膜的單股負鏈rna病毒。流感病毒是引起人類呼吸道感染最普遍的病毒，在世界范圍內，流感病毒每年造成約300萬至500萬人發病，29萬至65萬人死亡，可見其危害的嚴重性。

2、根據流感病毒核蛋白(nucleocapside，np)和基質蛋白(matrix，m)抗原性的不同可以將其分為甲型流感病毒(influenza?a?virus，iav)、乙型流感病毒(influenza?bvirus，ibv)、丙型流感病毒(influenza?c?virus，icv)和丁型流感病毒(influenza?dvirus，idv)。通常甲型流感病毒會造成全球范圍內的大流行；乙型流感病毒一般只在局部爆發，也能廣泛感染人群并引起重癥病例；丙型流感病毒只造成輕微的上呼吸道感染，并不引起大流行；目前丁型流感病毒只感染牛和豬，不感染人。

3、甲型流感病毒的抗原性變異使病毒具有了逃逸宿主免疫應答的能力，宿主針對突發變異株的免疫應答可能減弱甚至無效，從而引起大流感和季節性流感的爆發。由于甲型流感病毒的變異，血凝素(ha)和神經氨酸酶(na)發生抗原漂移和抗原轉變，新型流感大流行隨時可能在人群中爆發?？共《舅幬锸欠烙鞲胁《靖腥镜某Ｓ檬侄?，但現有抗流感病毒藥物較少，并且研究數據表明h1n1亞型毒株對奧司他韋的耐藥率高達67％，209個h3n2亞型毒株中有193株對金剛烷胺產生了耐藥性，并且對奧司他韋耐藥的高致病性h5n1禽流感病毒突變體已經出現。另外，治療和預防流感病毒最有效的方法是接種疫苗，但應對突發新型流感疫苗的研發存在明顯的滯后性，病毒的抗原漂移和抗原轉換對于可用疫苗是一個永遠變化的挑戰。

4、rna干擾(rna?interference，rnai)是基因功能研究和創新藥物研究中的重要手段，主要由長度相同，反向互補的雙鏈小干擾rna(small?interfering?rna,sirna)介導。sirna為19～21bp，且在3’端有突出堿基的雙鏈互補rna，它可以直接由化學合成，也可由dsrna經過dicer酶(一種具有序列特異性的核酸內切酶)切割而成。sirna介導的基因沉默可通過與靶標rna堿基互補配對，破壞目的蛋白mrna的完整性，以高度精確的方式使原有靶標rna失效，達到抑制疾病相關基因表達的作用，從而產生治療效果。sirna具有高效性、基因靶向性強、開發周期短、候選靶標豐富、治療效率高、藥物毒性低和應用領域廣等特點，因此可作為研究體內和體外單基因的工具及藥物開發的新思路。2009年12月發布在《natruebiotechnology》上名為“asymmetric?rna?duplexes?mediate?rna?interference?inmammalian?cells”的文章表明不對稱sirna(asymmetric?sirna，airna)是基因沉默的更好選擇。airna的作用機理與sirna相同，但其通常含有15bp(或少于15bp)的正義鏈、反義鏈3’和5’末端的堿基突出以及正義鏈比反義鏈長度短的不對稱結構。與sirna相比，airna具有許多明顯的優勢：①risc的選擇與airna的反義鏈結合，而正義鏈不參與整個干擾過程，不存在脫靶效應問題，同時airna憑借優越的靶向特異性和高效性，降低因脫靶效應產生毒副作用的幾率；②airna藥物沉默靶基因效能高、起效快、作用時間較長；③實驗證實airna藥物可以減少甚至消除干擾素應答的免疫毒性；④airna分子小、非特異性干擾素應答少等特點使其遞送的難度降低；⑤airna長度短，無需進行廣泛的化學修飾，減少了藥物的研發及合成成本。這些優勢證實了airna是基因沉默的更好選擇，成為疾病治療的新希望。

5、綜上所述，考慮到目前抗流感病毒策略的局限性，亟待需要預防和治療流感病毒的新策略。

技術實現思路

1、本發明所要解決的技術問題是提供能夠抗多種流感亞型的sirna。所要解決的技術問題不限于所描述的技術主題，本領域技術人員通過以下描述可以清楚地理解本文未提及的其它技術主題。

2、為解決上述技術問題，本發明提供了以下技術方案：

3、本發明提供了一種雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽，所述雙鏈rna分子為sipb2-12和/或sinp-4，和/或所述rna分子的衍生物；所述sipb2-12的一條鏈序列為序列表中seq?id?no.1，另一條鏈序列為序列表中seq?id?no.2；所述sinp-4的一條鏈序列為序列表中seq?id?no.5，另一條鏈序列為序列表中seq?id?no.6。

4、sipb2-12的衍生物是名稱為aipb2-12的雙連rna分子，sinp-4的衍生物是名稱為ainp-4的雙連rna分子，所述aipb2-12的一條鏈序列為序列表中seq?id?no.3，另一條鏈序列為序列表中seq?id?no.4，所述ainp-4一條鏈序列為序列表中seq?id?no.7，另一條鏈序列為序列表中seq?id?no.8。

5、其中，seq?id?no.1由19個核糖核苷酸組成，seq?id?no.2由19個核糖核苷酸組成，seq?id?no.1的第1-19位核糖核苷酸與seq?id?no.2的第1-19位核糖核苷酸反向互補，將二者形成的雙鏈rna命名為sipb2-12。seq?id?no.3由15個核糖核苷酸組成，seq?id?no.4由19個核糖核苷酸組成，seq?id?no.3的第1-15位核糖核苷酸與seq?id?no.10的第2-16位核糖核苷酸反向互補，將二者形成的雙鏈rna命名為sipb2-12。其中，seq?id?no.3與seq?idno.1的第4-18位核苷酸相同，seq?id?no.4和seq?id?no.2靶點相同，區別在于seq?id?no.2的tt修飾在3端，seq?id?no.4的tt修飾在5端。seq?id?no.5和seq?id?no.6與seq?id?no.1和seq?id?no.2同理。seq?id?no.7和seq?id?no.8與seq?id?no.3和seq?id?no.4同理。

6、術語“修飾物”是指對所述雙鏈rna分子進行修飾得到的產物，各種修飾方法均可選用，包括選自核糖修飾、堿基修飾和磷酸骨架修飾中的一種或幾種的組合等。術語“藥學上可接受的鹽”指在可靠的醫學判斷范圍內，適合用于與人類和低等動物的組織接觸而不出現過度的毒性、刺激、過敏反應等，且與合理的效果/風險比相稱的鹽。藥學可接受的鹽是本領域公知的。例如，s.m.berge,et?al.,j.pharmaceutical?sciences,1977,66:1中對藥學可接受的鹽進行了詳細描述。

7、本發明還提供了一種含有前述的雙鏈rna分子相關的生物材料，所述生物材料為能產生所述雙鏈rna分子的dna分子、含有所述dna分子的重組載體、含有所述dna分子的重組微生物。

8、本發明還提供了一種流感病毒抑制劑，所述流感病毒抑制劑含有前述雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽。

9、本發明還提供了一種預防或/和治療流行性感冒的藥物，所述藥物含有前述的雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽。

10、本文所述流感病毒抑制劑或所述藥物的劑型為氣霧劑、片劑、膠囊、滴丸、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑或凍干粉針劑。

11、上文中，所述流感病毒抑制劑和所述預防或/和治療流行性感冒的藥物的活性成分可為所述雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽，所述流感病毒抑制劑和所述預防或/和治療流行性感冒的藥物的活性成分還可含有其他物質，其他物質本領域技術人員可根據所述流感病毒抑制劑和所述預防或/和治療流行性感冒的藥物的效果確定。

12、上文中，所述流感病毒抑制劑和所述預防或/和治療流行性感冒的藥物，除含有所述雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽外，還可含有適宜的載體或賦形劑。這里的載體材料包括但不限于水溶性載體材料(如聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、有機酸等)、難溶性載體材料(如乙基纖維素、膽固醇硬脂酸酯等)、腸溶性載體材料(如醋酸纖維素酞酸酯和羧甲乙纖維素等)。其中優選的是水溶性載體材料。使用這些材料可以制成多種劑型，包括但不限于片劑、膠囊、滴丸、氣霧劑、丸劑、粉劑、溶液劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、脂質體、透皮劑、口含片、栓劑、凍干粉針劑等?？梢允瞧胀ㄖ苿⒕忈屩苿⒖蒯屩苿┘案鞣N微粒給藥系統。為了將單位給藥劑型制成片劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如淀粉、糊精、硫酸鈣、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化鈉、葡萄糖、尿素、碳酸鈣、白陶土、微晶纖維素、硅酸鋁等；濕潤劑與粘合劑，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉漿、糊精、糖漿、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯膠漿、明膠漿、羧甲基纖維素鈉、紫膠、甲基纖維素、磷酸鉀、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解劑，例如干燥淀粉、海藻酸鹽、瓊脂粉、褐藻淀粉、碳酸氫鈉與枸櫞酸、碳酸鈣、聚氧乙烯、山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等；崩解抑制劑，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氫化油等；吸收促進劑，例如季銨鹽、十二烷基硫酸鈉等；潤滑劑，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸鹽、硼酸、液體石蠟、聚乙二醇等。還可以將片劑進一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、腸溶包衣片，或雙層片和多層片。為了將單位給藥劑型制成丸劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如稀釋劑與吸收劑，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氫化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、gelucire、高嶺土、滑石粉等；粘合劑如阿拉伯膠、黃蓍膠、明膠、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解劑，如瓊脂粉、干燥淀粉、海藻酸鹽、十二烷基磺酸鈉、甲基纖維素、乙基纖維素等。為了將單位給藥劑型制成栓劑，可以廣泛使用本領域公知的各種載體。關于載體的例子是，例如聚乙二醇、卵磷脂、可可脂、高級醇、高級醇的酯、明膠、半合成甘油酯等。為了將單位給藥劑型制成注射用制劑，如溶液劑、乳劑、凍干粉針劑和混懸劑，可以使用本領域常用的所有稀釋劑，例如，水、乙醇、聚乙二醇、1,3-丙二醇、乙氧基化的異硬脂醇、多氧化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯等。另外，為了制備等滲注射液，可以向注射用制劑中添加適量的氯化鈉、葡萄糖或甘油，此外，還可以添加常規的助溶劑、緩沖劑、ph調節劑等。此外，如需要，也可以向藥物制劑中添加著色劑、防腐劑、香料、矯味劑、甜味劑或其它材料。使用上述劑型可以經注射給藥，包括皮下注射、靜脈注射、肌肉注射和腔內注射等；腔道給藥，如經直腸和陰道；呼吸道給藥，如經鼻腔；粘膜給藥。上述給藥途徑優選的是注射給藥。

13、本發明還提供了一種前述雙鏈rna分子、其修飾物、或其藥學上可接受的鹽，或前述生物材料在制備流感病毒抑制劑中的應用或在抑制流感病毒中的應用。

14、具體而言，所述流感病毒為h1ni、h3n2、h5n6和/或h9n2病毒，所述流行性感冒由h1ni、h3n2、h5n6、h7n9和/或h9n2病毒引起。所述h1ni、h3n2、h5n6、h7n9和/或h9n2病毒具體來源于a/guangdong-maonan/swl1536/2019(h1n1)、a/hong?kong/2671/2019(h3n2)、a/guangzhou/39715/2014(h5n6)、a/anhui/1/2013(h7n9)、a/guangxi/nn10.19t-ngs/2018(h9n2)。

15、本發明通過具體實驗證實，根據甲型流感基因的基因設計的sipb2-12，以及在sipb2-12基礎上設計的aipb2-12，可有效抑制h1n1、h3n2、h5n6、h7n9和h9n2，為預防和治療流感病毒提供了一種新的策略。