本發明屬于生物發酵與提取，特別是涉及一種羥鈷胺鹽的制備方法。

背景技術：

1、維生素b12(vitaminb12)，又稱鈷胺素(cobalamin)，屬于鈷胺素類化合物，其由類咕啉環和上下配基共同組成。維生素b12即鈷胺素是一類含有co的咕啉類化合物總稱，根據co連接官能基團不同，分為腺苷鈷胺、甲鈷胺、羥鈷胺、氰鈷胺，結構式如下：

2、

3、上述結構式中，r＝5’-脫氧腺苷為腺苷鈷胺；r＝oh為羥鈷胺；r＝ch3為甲鈷胺；r＝cn為氰鈷胺。

4、羥鈷胺又叫羥基維生素b12，是一種棗紅色結晶或結晶性粉末；無臭，無味；易溶于水和乙醇，不容于乙醚、氯仿、四氯化碳和丙酮；分子式為c62h90clcon13o15p；分子量為1382.82。羥鈷胺鹽包括羥鈷胺醋酸鹽、羥鈷胺鹽酸鹽、羥鈷胺硫酸鹽，屬于維生素b12系列產品。羥鈷胺是因為b12分子的中心離子上連接的是羥基而被叫做羥鈷胺的。在這四種b12分子里面，羥鈷胺的水溶性最好，在尿中的代謝速度慢，又稱長效鈷胺素；雖然吸收速度比不上氰鈷胺和甲鈷胺，但是它在眼部的濃度很高，能夠大大緩解視覺疲勞和營養視神經，因此它對中毒造成的弱視有一定的療效。羥鈷胺具vb12產品療效，用于治療惡性貧血、巨幼紅細胞性貧血、神經痛、肝實質損害與接觸性皮炎等，此外，羥鈷胺在水溶液下能夠快速與游離的氰根結合生成無毒的氰鈷胺，因此，羥鈷胺是氰化物中毒的高效解毒劑。

5、羥鈷胺合成報道有一種以氰鈷胺為前體制備羥鈷胺的方法(cn1323746a)，氰鈷胺在水溶液狀態下，經還原劑(如偏重亞硫酸鈉、亞硝酸鈉)的還原生成維生素b12的還原態，還原態的b12再經氧化(氧化劑如氨基磺酸)生成羥鈷胺，含有羥鈷胺的反應液，經過大孔樹脂的提純，丙酮溶析結晶，而得到羥鈷胺晶體。也有報道用甲鈷胺合成路線，一種制備羥鈷胺鹽的方法(cn102351933b)，甲鈷胺水溶液，弱酸性下，光化反應生成羥鈷胺，經過大孔樹脂的提純，丙酮溶析結晶，而得到羥鈷胺晶體。以上工藝存在的問題是：

6、1、氰鈷胺原料生產，一般采用脫氮假單孢菌(pseudomonas?denitrificans)進行有氧發酵生產腺苷鈷胺發酵液，再經提取、轉化、純化得到vb12產品。其中，將腺苷鈷胺分子中的鈷原子上脫去脫氧腺苷基團，再結合上-cn基團，成為氰鈷胺的過程，稱為轉化。一般生產工藝中，通過加入氰化鈉或氰化鉀，實現轉化，氰化鈉、氰化鉀為劇毒藥品，安全風險大，管理費用高。需在采購、運輸、使用、貯存、包裝桶回收等環節，進行特別監管，而且轉化過程產生的廢氣、廢水、廢固等需進行無害化處理，以確保生態環境的安全。

7、2、甲鈷胺原料生產，一般以氰鈷胺為前體，經還原劑(如硼氫化鈉)的還原生成維生素b12的還原態，還原態的b12再經甲基化反應(甲基化試劑如碘甲烷的甲醇溶液或三甲基碘化亞砜)，得到甲鈷胺反應液，經大孔樹脂提取純化，丙酮溶析結晶等步驟，得到甲鈷胺。從脫氮假單孢菌(pseudomonas?denitrificans)進行有氧發酵生產腺苷鈷胺發酵液，再經氰化胺到甲鈷胺，工藝過程復雜，生產步驟多，收率損失多，增加三廢，增加能耗，生產成本較高。

8、3、通過還原反應將維生素b12鈷原子結合官能團(脫氧腺苷)游離過程，采用的還原劑偏重亞硫酸鈉、亞硝酸鈉易產生有害氣體如so2、no，硼氫化鈉作還原劑，易產生危險氣體h2，增加操作環境危險性、有害性。

技術實現思路

1、本發明提供了一種羥鈷胺鹽的制備方法，通過光化反應前增加還原反應，解決現有光化反應速率不可控導致生成物羥鈷胺鹽中異構體雜質大大增加的問題，再通過大孔樹脂分離步驟結合陰離子樹脂脫色步驟，實現了羥鈷胺鹽與同系物的分離，有效提高了產品純度，并且降低了產品的有關物質。

2、為實現上述目的所采取的技術方案為：

3、一種羥鈷胺鹽的制備方法，包括如下步驟：

4、1)將腺苷鈷胺發酵液進行還原反應，得到還原腺苷鈷胺液；

5、2)將步驟1)得到的還原脫氧腺苷鈷胺液進行光化反應，得到羥鈷胺反應液；

6、3)將步驟2)得到的羥鈷胺反應液，經大孔樹脂吸附與解析，得到羥鈷胺解析液；

7、4)將步驟3)得到的羥鈷胺解析液經陰離子樹脂脫色，得到羥鈷胺鹽精制液；

8、5)將步驟4)得到羥鈷胺鹽精制液結晶處理，即得羥鈷胺鹽。

9、其中，步驟1)所述腺苷鈷胺發酵液為脫氮假單孢菌(pseudomonasdenitrificans)有氧發酵生產的腺苷鈷胺發酵液。

10、其中，所述腺苷鈷胺發酵液經前處理制成，所述前處理包括：酸化水解、絮凝沉淀和超濾處理。

11、其中，所述酸化采用草酸，調節ph3.5～4.5，酸化溫度30～40℃。

12、其中，所述絮凝劑采用聚合氯化鋁，根據發酵液體積，按3.5～6.5(g/l)加量。

13、其中，所述超濾的膜孔徑為1nm。

14、其中，步驟1)所述還原反應中還原劑為維生素c或異維生素c。

15、其中，所述還原劑加入量按腺苷鈷胺(w)：還原劑(w)＝1:0.13～0.14，還原反應溫度40～45℃，反應時間75～90分鐘。

16、其中，步驟2)所述光化反應條件為：光化反應波長420～460nm，反應溫度30～40℃，光化反應時間50～80分鐘。

17、其中，步驟3)所述大孔樹脂型號為dm1180，

18、其中，步驟3)所述解析采用0.5～0.8mol/l?hcl溶液或1.2～1.5mol/l?hac溶液。

19、其中，步驟4)所述陰離子樹脂型號為xad761。

20、其中，所述方法還包括腺苷鈷胺發酵液前處理步驟，所述前處理包括：酸化水解，絮凝沉淀，超濾處理。

21、其中，所述羥鈷胺鹽為羥鈷胺醋酸鹽或羥鈷胺鹽酸鹽。

22、其中，步驟5)所述結晶處理，系加入丙酮，加入量按照鹽酸羥鈷胺精制液或醋酸羥鈷胺精制液(v)：丙酮(v)＝1：3～5，結晶溫度5～8℃。

23、本發明至少具有如下有益效果：

24、1、本發明從脫氮假單孢菌(pseudomonas?denitrificans)進行有氧發酵生產腺苷鈷胺發酵液，直接進行羥鈷胺合成，不經氰鈷胺、甲鈷胺轉化，不需要氰化轉化，避免了生產過程中氰化物的使用，轉化率和產率高，廢水量少，是一種綠色環保的生產工藝；

25、2、本發明在光化反應前先進行還原反應，使腺苷鈷胺處于還原態腺苷鈷胺，氰根位置呈自由基狀態有利于提高甲鈷胺光化反應速率，并且使其生成物羥鈷胺鹽中異構體雜質大大降低，另外還原劑采用維生素c或異維生素c，反應條件溫和，環境友好，工藝操作安全性強；

26、3、本發明在大孔樹脂分離步驟結合陰離子樹脂脫色步驟，實現了羥鈷胺鹽與同系物的分離，產品純度高，并且有效降低了產品的有關物質。

技術特征：

1.一種羥鈷胺鹽的制備方法，包括如下步驟：

2.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于步驟1)所述腺苷鈷胺發酵液為脫氮假單孢菌(pseudomonas?denitrificans)有氧發酵生產的腺苷鈷胺發酵液。

3.按照權利要求2所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于所述腺苷鈷胺發酵液經前處理制成，所述前處理包括：酸化水解、絮凝沉淀和超濾處理。

4.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于步驟1)所述還原反應中還原劑為維生素c或異維生素c。

5.按照權利要求4所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于所述還原劑加入量按腺苷鈷胺(w)：還原劑(w)＝1:0.13～0.14，還原反應溫度40～45℃，反應時間75～90分鐘。

6.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于步驟2)所述光化反應條件為：光化反應波長420～460nm，反應溫度30～40℃，光化反應時間50～80分鐘。

7.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于步驟3)所述大孔樹脂型號為dm1180。

8.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于步驟3)所述解析采用0.5～0.8mol/l?hcl溶液或1.2～1.5mol/l?hac溶液。

9.按照權利要求1所述的羥鈷胺鹽的制備方法，其特征在于，步驟4)所述陰離子樹脂型號為xad761。

10.根據權利要求1所述的制備羥鈷胺鹽的方法，其特征在于所述羥鈷胺鹽為羥鈷胺醋酸鹽或羥鈷胺鹽酸鹽。

技術總結
本發明涉及一種羥鈷胺鹽的制備方法，其步驟包括腺苷鈷胺發酵液光化反應前先經還原反應，再經大孔樹脂分離結合陰離子樹脂脫色，最后結晶處理得到羥鈷胺鹽。本發明有效提高了產品的收率和純度，并且降低了產品的有關物質，在生產過程中避免了氰化物的使用，環境友好，而且廢水量小，易于實現羥鈷胺鹽綠色環保工業化生產。

技術研發人員：裴立忠,馬曉龍,高宏偉,謝劍沄,謝文靜,曹國華,郭靜,楊蕾
受保護的技術使用者：寧夏金維制藥股份有限公司
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28