本發明涉及修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征病毒。修飾的活病毒可用于疫苗，特別是提供針對異源病毒的保護的疫苗。

背景技術：

1、最初被稱為神秘豬疾病的豬繁殖與呼吸綜合征(prrs)最初在歐洲被描述，但現在已傳播到世界各地。prrs會導致育齡母豬的晚期流產、死產和不孕，以及呼吸系統疾病、生長性能下降，并且甚至導致繁殖場豬和生長/肥育豬的死亡。prrs會造成重大經濟損失。

2、成年豬動物中prrs病毒感染的癥狀包括但不限于食欲減退、嗜睡和發熱。懷孕的母豬可能會過早產子豬，使胎兒流產，或分娩木乃伊化的或死產的仔豬，并且高達10％的懷孕母豬可能會死于prrs病毒感染。受感染的仔豬具有較高的斷奶前死亡率，通常很虛弱，并且可能在眼睛周圍具有水腫。在斷奶的繁殖場豬或生長/肥育豬中prrs病毒感染可以導致(但不限于)生長遲緩、呼吸窘迫、呼吸困難或急促、皮膚斑點發紅、毛被粗糙。

3、prrs病毒是一種帶包膜的病毒，具有約15kb的線性正鏈rna基因組，并且該病毒已被歸類為動脈炎病毒(arteriviridae)科。迄今為止，在基因組中已經鑒定出至少十一個開放閱讀框。prrs病毒被分為兩種基因型。歐洲基因型——1型prrs病毒(prrsv-1)——以lelystad毒株為例，而2型北美prrs病毒(prrsv-2)以毒株vr-2332為例。

4、這兩種基因型在其基因組中可能具有少至約60％的序列同一性，并且甚至在基因型內，單獨的毒株在它們的基因組同一性方面可能變化高達約20％。這種可變性使得有效地治療和/或預防prrs的疫苗的開發變得復雜。prrs病毒的修飾的活病毒(mlv)變體可以產生對抗prrs病毒攻擊的免疫力，但是當攻擊是與mlv遺傳同源的prrs病毒時，疫苗是最有效的。mlv疫苗在對抗異源病毒的攻擊方面效果較差。此外，mlv已經顯示出對毒力的一些回復，使得疫苗病毒在接種的動物中引起疾病。含有滅活的(即被殺死的)prrs病毒的疫苗具有更好的安全性概況，但對抗異源攻擊的效力有限。

5、由于目前的prrs疫苗沒有表現出足夠的安全性和有效性來降低prrs病毒感染的經濟影響，因此需要新的和改進的疫苗。優選地，這些疫苗將是既安全又有效的。如果疫苗包含減弱mlv，則這些減弱mlv不應表現出對毒力的回復，以便被視為可安全用于該領域。例如，通過使prrs毒株適應于在組織培養細胞中生長至少60代、至少70代、至少80代、或優選地至少85代，mlv不應表現出對毒力的回復。為了有效，疫苗病毒毒株應該能夠在豬動物中引發針對一系列系統發育多樣性野生型prrs毒株的保護性免疫。優選地，新的prrs疫苗病毒毒株將能夠在豬動物中引發針對至少三種系統發育不同的野生型prrs毒株的保護性免疫。

技術實現思路

1、本發明提供了修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征疫苗病毒毒株，其中所述prrs毒株的共有互補dna序列與選自seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4的群組的序列至少90％相同。優選地，修飾的活的毒株可以具有與選自seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。更優選地，修飾的活的毒株還可以具有與選自seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。如普通技術人員將理解的，由于prrs病毒的高突變率，修飾的活的prrs毒株可能包含多個亞群，每個亞群具有同源但不相同的基因組。

2、本發明提供了經修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征(prrs)病毒毒株，其中所述prrs病毒毒株是de?14-3073、es13-49、it?14-32或pl?14-02毒株。prrs病毒毒株應優選地在組織培養細胞中傳代至少60次，或更優選地70次，或甚至更優選地80次。最優選地，prrs病毒毒株應在組織培養細胞中傳代85次。這種在組織培養細胞中的傳代可用于減弱經修飾的活的prrs病毒毒株。當將減弱的prrs病毒毒株施用于豬動物時，這些毒株可能引起亞臨床但非臨床疾病。傳代至少80次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。最優選地，傳代85次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。

3、本發明提供了一種免疫原性組合物，其包含經修飾的活的prrs病毒毒株，所述經修飾的活的prrs病毒毒株具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?idno:4組成的群組的序列至少90％相同的共有互補dna序列。優選地，修飾的活毒株可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。更優選地，修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。如普通技術人員將理解的，由于prrs病毒的高突變率，修飾的活的prrs毒株可能包含多個亞群，每個亞群具有同源但不相同的基因組。

4、本發明提供了一種包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物，其中所述prrs病毒毒株是de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株。de?14-3073毒株或es13-49毒株或it?14-32毒株或pl?14-02毒株可以在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。最優選地，免疫原性組合物包含至少一種藥學上可接受的賦形劑。免疫原性組合物還可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。

5、本發明提供了一種包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物，其中所述prrs毒株的共有互補dna序列與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?idno:4組成的群組的序列至少90％相同。優選地，修飾的活毒株可以具有與選自由seq?idno:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。最優選地，修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seqid?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。所述疫苗可以進一步包含佐劑。疫苗可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑、穩定劑、增溶劑或稀釋劑。所述疫苗可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。

6、本發明提供了一種疫苗，用于預防豬動物的豬繁殖與呼吸綜合征。由于prrs是由prrs病毒引起的，因此本發明提供了一種疫苗，用于預防prrs病毒感染。本發明還提供了一種疫苗，用于豬動物中以用于減輕由prrs病毒感染引起的癥狀。感染可能來自prrs病毒的野生型致命毒株。癥狀可以是但不限于食欲減退、嗜睡、發熱、早產、流產、死產、水腫、生長遲緩、咳嗽、呼吸窘迫、呼吸困難或急促、皮膚斑點發紅、毛被粗糙、肺部病變、病毒脫落和死亡。本發明提供了一種疫苗，用于預防豬動物的prrs。優選地，所述疫苗包含修飾的活的prrs毒株，所述毒株具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％、至少95％或至少98％相同的共有互補dna序列。最優選地，疫苗包括修飾的活的prrs毒株，其是de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株。所述疫苗可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑。所述疫苗可以進一步包含佐劑。所述疫苗可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。

7、本發明提供了一種預防豬動物的豬繁殖與呼吸綜合征癥狀的方法，包括向所述豬動物施用包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物。本發明還提供了一種預防豬動物的豬繁殖與呼吸綜合征的方法，包括向所述豬動物施用包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物。優選地，用于所述方法的經修飾的活的prrs病毒毒株將具有與選自由seqid?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％相同的共有互補dna序列。更優選地，用于所述方法的修飾的活的prrs病毒毒株將具有與選自由seqid?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。最優選地，用于所述方法的經修飾的活的prrs病毒毒株將具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。免疫原性組合物可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑。免疫原性組合物可以包含來自不同病毒或來自細菌或來自寄生蟲的另外的抗原。

8、本發明提供了一種預防豬動物的豬繁殖與呼吸綜合征的方法，包括向所述豬動物施用免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征(prrs)病毒毒株，其中所述prrs病毒毒株是de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株，用于所述方法的可以在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。免疫原性組合物可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑。免疫原性組合物可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。

9、本發明提供了一種預防豬動物的由prrs病毒感染引起的癥狀的方法，所述方法包括向所述豬動物施用免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征(prrs)病毒毒株，其中所述prrs毒株的共有互補dna序列優選地與選自由seq?idno:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％相同。更優選地，用于所述方法的修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?idno:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。最優選地，用于所述方法的經修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組序列至少98％相同的共有互補dna序列。免疫原性組合物可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑。免疫原性組合物還可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。

10、本發明提供了一種減輕豬動物的由prrs病毒感染引起的癥狀的方法，所述方法包括向所述豬動物施用免疫原性組合物，所述免疫原性組合物包含修飾的活的豬繁殖與呼吸綜合征(prrs)病毒毒株，其中所述prrs病毒毒株是de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株，用于所述方法的可以在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。免疫原性組合物可以進一步包含藥學上可接受的賦形劑。免疫原性組合物還可以包含來自不同病毒或來自細菌毒株或來自寄生蟲的另外的抗原。prrs病毒感染可以是由與免疫原性組合物中修飾的活的prrs病毒毒株異源的強毒prrs病毒引起的感染。如果每種病毒毒株的基因組共有序列映射到不同的系統發育組，則認為兩種prrs病毒毒株是異源的。如果每種病毒毒株的互補dna共有序列映射到不同的系統發育組，則認為兩種prrs病毒毒株是異源的。

11、本發明提供了修飾的活的prrs病毒毒株在制備用于預防或減輕prrs癥狀的藥物中的用途，其中所述修飾的活的prrs病毒包含與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?idno:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％相同的共有互補dna序列。優選地，修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。更優選地，修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。

12、本發明提供了包含de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株的修飾的活的prrs病毒毒株在制備用于預防或減輕prrs癥狀的藥物中的用途。修飾的活的prrs病毒毒株應在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。這種在組織培養細胞中的傳代可用于適當地減弱修飾的活的prrs病毒毒株。當將減弱的prrs病毒毒株施用于豬動物時，這些毒株可能引起亞臨床但非臨床疾病。傳代至少80次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。

13、本發明提供了包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物在制備用于預防prrs病毒感染的藥物中的用途，其中所述修飾的活的prrs病毒毒株包含與選自由seq?idno:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％相同的共有互補dna序列。用于這種用途的修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。用于這種用途的修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。

14、本發明提供了包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物在制備用于預防prrs病毒感染的藥物中的用途，所述修飾的活的prrs病毒毒株包含de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株。prrs病毒毒株應在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。這種在組織培養細胞中的傳代可用于適當地減弱修飾的活的prrs病毒毒株。當將減弱的prrs病毒毒株施用于豬動物時，這些毒株可能引起亞臨床但非臨床疾病。傳代至少80次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。傳代85次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。

15、本發明提供了包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物在制備用于保護豬動物免受prrs病毒感染的藥物中的用途，其中所述修飾的活的prrs病毒毒株包含與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少90％相同的共有互補dna序列。用于這種用途的修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少95％相同的共有互補dna序列。用于這種用途的修飾的活毒株還可以具有與選自由seq?id?no:1、seq?id?no:2、seqid?no:3和seq?id?no:4組成的群組的序列至少98％相同的共有互補dna序列。

16、本發明提供了包含修飾的活的prrs病毒毒株的免疫原性組合物在制備用于保護豬動物免受prrs病毒感染的藥物中的用途，所述修飾的活的prrs病毒毒株包含de?14-3073毒株、es13-49毒株、it?14-32毒株或pl?14-02毒株。prrs病毒毒株應在組織培養細胞中傳代至少80次，或優選地甚至85次。這種在組織培養細胞中的傳代可用于適當地減弱修飾的活的prrs病毒毒株。當將減弱的prrs病毒毒株施用于豬動物時，這些毒株可能引起亞臨床但非臨床疾病。傳代至少80次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。傳代85次的修飾的活的prrs病毒毒株具有較低的回復到野生型毒力的概率。