本發(fā)明涉及一種靶向c16orf45基因的sgrna及其應用，屬于sgrna。

背景技術(shù)：

1、c16orf45基因位于16號染色體短臂(16p13.11)，被視為與神經(jīng)發(fā)育疾病密切相關(guān)的重要基因座。然而，目前國內(nèi)外對該基因功能的研究仍較為有限。研究表明，c16orf45基因的缺失會導致斑馬魚的生育能力下降；在兒童期患惡性腫瘤并經(jīng)歷原位復發(fā)的患者中，接受放射治療后c16orf45基因的mrna水平顯著上調(diào)。盡管如此，關(guān)于c16orf45基因在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的具體作用機制尚不明確，且目前尚無關(guān)于c16orf45基因與腫瘤放射敏感性關(guān)系的研究報道。

2、sgrna(small?guide?rna)，即小向?qū)na，是crispr基因編輯系統(tǒng)中的關(guān)鍵組分，能夠引導cas9蛋白識別并切割特定的dna序列。sgrna通常由兩部分組成：一個是由crispr中的crrna(crispr?rna)和tracrrna(trans-activating?crrna)融合而成的單鏈rna分子。這種結(jié)構(gòu)使得sgrna能夠與cas9蛋白結(jié)合，形成cas9-sgrna復合物，從而精確定位并識別目標基因組序列，指導cas9蛋白酶對特定dna位點進行有效切割。sgrna在基因編輯領(lǐng)域的應用極為廣泛，不僅在基礎(chǔ)研究中用于探索基因功能，還在基因治療、農(nóng)業(yè)生物技術(shù)等領(lǐng)域展現(xiàn)出巨大的應用潛力。

3、然而，現(xiàn)有技術(shù)中尚未見關(guān)于c16orf45基因的sgrna的相關(guān)報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種靶向c16orf45基因的sgrna及其應用，可以有效解決上述問題。

2、本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

3、一種靶向c16orf45基因的sgrna，所述sgrna為c16orf45-sgrna-1或c16orf45-sgrna-3，

4、其中，c16orf45-sgrna-1的核苷酸序列為ggagacaaccatgatgccag，c16orf45-sgrna-3的核苷酸序列為ggatgacatccagctctgca。

5、一種敲除c16orf45基因的細胞，所述細胞為用用連接有上述的sgrna的crispr/cas9載體進行c16orf45基因敲除而得的細胞。

6、一種基因敲除試劑，包括所述的sgrna。

7、一種膠質(zhì)母細胞瘤放射性增敏劑，其特征在于，包括所述的sgrna。

8、一種所述的sgrna在c16orf45基因的敲除中的應用。

9、在一些實施例中，應用連接有權(quán)利要求1的sgrna構(gòu)建crispr/cas9載體，然后用crispr/cas9載體對c16orf45基因的進行敲除。

10、一種所述的sgrna在制備提高膠質(zhì)母細胞瘤細胞放射敏感性的藥物中的應用。

11、一種提高膠質(zhì)母細胞瘤放射敏感性的實驗方法，應用連接有所述sgrna的crispr/cas9載體敲除膠質(zhì)母細胞瘤細胞的c16orf45基因。

12、本發(fā)明的有益效果是：

13、本發(fā)明設(shè)計了兩條針對c16orf45基因的特異性sgrna序列，經(jīng)過嚴格的實驗驗證，結(jié)果顯示這兩條sgrna在u251細胞系中能夠?qū)崿F(xiàn)高效且特異的基因敲除效果。這一技術(shù)突破為深入探索c16orf45基因在細胞生物學中的具體功能提供了堅實的技術(shù)支持和實驗基礎(chǔ)。

14、本發(fā)明通過敲除c16orf45基因，可以顯著提高u251細胞對x射線的敏感性。這一發(fā)現(xiàn)不僅揭示了c16orf45基因在調(diào)控細胞放射敏感性中的重要作用，也為未來進一步探索c16orf45基因在提升放療療效中的潛在臨床應用奠定了堅實的科學基礎(chǔ)，開辟了新的研究方向。

技術(shù)特征：

1.一種靶向c16orf45基因的sgrna，其特征在于，所述sgrna為c16orf45-sgrna-1或c16orf45-sgrna-3，

2.一種敲除c16orf45基因的細胞，其特征在于，所述細胞為用連接有權(quán)利要求1的sgrna的crispr/cas9載體進行c16orf45基因敲除而得的細胞。

3.一種基因敲除試劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的sgrna。

4.一種膠質(zhì)母細胞瘤放射性增敏劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的sgrna。

5.一種權(quán)利要求1所述的sgrna在c16orf45基因的敲除中的應用。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的應用，其特征在于，應用連接有權(quán)利要求1的sgrna構(gòu)建crispr/cas9載體，然后用crispr/cas9載體對c16orf45基因的進行敲除。

7.一種權(quán)利要求1所述的sgrna在制備膠質(zhì)母細胞瘤放射性增敏劑中的應用。

8.一種提高膠質(zhì)母細胞瘤放射敏感性的實驗方法，其特征在于，應用權(quán)利要求1所述的sgrna構(gòu)建而成的crispr/cas9載體敲除膠質(zhì)母細胞瘤細胞的c16orf45基因。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開一種靶向C16orf45基因的sgRNA及其應用，所述sgRNA為C16orf45?sgRNA?1或C16orf45?sgRNA?3，其中，C16orf45?sgRNA?1的核苷酸序列為GGAGACAACCATGATGCCAG，C16orf45?sgRNA?3的核苷酸序列為GGATGACATCCAGCTCTGCA。該sgRNA能夠?qū)崿F(xiàn)高效且特異的基因敲除效果。

技術(shù)研發(fā)人員：藍瑞隆,許艷芳,王锃,陳瑞慶,陳俊英,江美娜
受保護的技術(shù)使用者：福建醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/4/28