本發明屬于生物，具體涉及一種鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記、鑒定引物及其應用方法。

背景技術：

1、牛蛙(rana?catesbeiana)作為一種優質的水產養殖品種，近年來在全球范圍內得到了廣泛的養殖和開發，尤其在中國、美國和一些亞洲國家的養殖業中具有重要地位。牛蛙具有較強的適應能力和快速的生長速度，因此在多種氣候條件下均能成功養殖。牛蛙主要以其肉質鮮美、蛋白質豐富、營養價值高而受到市場的青睞，含有豐富的氨基酸、維生素和礦物質，廣泛應用于中高端餐飲行業，尤其在亞洲和歐美市場具有較高的消費需求。牛蛙養殖在全球范圍內的經濟效益和行業潛力不可忽視。隨著市場需求的不斷增長以及技術的不斷進步，牛蛙養殖業在未來有望繼續成為水產養殖行業的重要組成部分，對提升全球食品供應鏈、促進農業現代化以及推動地方經濟發展具有重要意義。牛蛙養殖不僅具有較高的市場需求，還具有較強的經濟效益，成為許多農戶和企業增加收入的重要途徑。

2、目前，牛蛙養殖有一些新的發展前景，牛蛙雄性前期個體和生長速度快，能更適應市場需求，且出肉率高于雌性牛蛙，在市場上更受歡迎，培育全雄種群有利于提高經濟效益，但有關牛蛙性別決定機制、性別分化及全雄種群生產的研究未見報道。目前雖然生產上可以通過外部形態觀察的方法來判別牛蛙的性別，但沒有辦法判定牛蛙的遺傳性別(牛蛙在發育早期容易受溫度等環境因素誘導性逆轉)，而且蝌蚪的性別無法通過外部形態觀察來鑒定。為了獲得全雄牛蛙培育的目的，在設計的時候需要通過雌激素誘導處理牛蛙，而后通過遺傳性別的鑒定選擇遺傳性別為雄性的偽雌牛蛙(xy，♀)作為親本，與遺傳性別為雄性的雄性牛蛙(xy，♂)交配，在后代中篩選出超雄牛蛙(yy，♂)，而后與遺傳性別為雌性的雌性牛蛙(xx，♀)交配獲得全雄后代。這其中的過程缺乏利用分子標記鑒定牛蛙的遺傳性別。

3、因此，研究牛蛙的性別決定和性別分化的實用價值是生產單性種群，單性養殖具有諸多優點，比如更快的生長速度、更優良的肉質、更均勻的個體大小、更高的繁殖價值等特點。

4、現有技術cn111593128a公開了一種鑒定東北林蛙遺傳性別的分子標記。其主要特征是，提取東北林蛙腳趾組織的基因組，以提取的基因組dna為模板，以含seq?id?no:1和seq?id?no:2所示序列的引物對進行pcr擴增反應。通過14％的聚丙烯酰胺凝膠對pcr擴增產物進行電泳檢測，結果具有seq?id?no:3所示核苷酸序列(222bp)對應條帶的個體為遺傳雄性東北林蛙，缺失seq?id?no:3所示核苷酸序列對應條帶的個體為遺傳雌性東北林蛙。

5、現有技術cn110964798a公開了提取東北林蛙腳趾組織的基因組，以提取的基因組dna為模板，以含seq?id?no:1和seq?id?no:2所示序列的引物對進行pcr擴增反應。通過14％的聚丙烯酰胺凝膠對pcr擴增產物進行電泳檢測，擴增結果具有seq?id?no:3所示核苷酸序列(261bp)對應條帶的個體為遺傳雄性東北林蛙，缺失seq?id?no:3所示核苷酸序列對應條帶的個體為遺傳雌性東北林蛙。該發明可鑒定偽雄個體，即生理為雄性，但遺傳為雌性的個體。利用偽雄個體與雌性個體交配，產生的后代，生理雌性比例高達90％以上。能實現對東北林蛙養殖群體性別控制，提高東北林蛙養殖的經濟效益。

6、但是上述現有技術均未涉及牛蛙的性別鑒定，而本發明標記的成功開發可以準確地鑒定蝌蚪的性別，并且可以準確地鑒定成蛙的性別，為生產上的單性群體選育策略奠定關鍵的技術基礎。

技術實現思路

1、本發明目的在于克服現有技術中的不足之處，本發明首先提供一種鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記，所述分子標記包含seq?id?no:2和/或seq?id?no:4。

2、在某些實施例中，所述分子標記由seq?id?no:2和/或seq?id?no:4組成。

3、在某些實施例中，所述分子標記為seq?id?no:1和/或seq?id?no:3。

4、本發明還提供如上述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記在制備鑒定牛蛙遺傳性別產品中的應用。

5、在某些實施例中，所述產品為引物、或探針或者試劑盒。

6、在某些實施例中，所述引物包含seq?id?no:4和seq?id?no:5。

7、本發明還提供一種鑒定如上述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記的引物組，所述引物包含seq?id?no:4和seq?id?no:5。

8、本發明還提供一種鑒定如上述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記的試劑盒，所述試劑盒包含如上述的引物組。

9、本發明還提供一種上述的引物組或者上述的試劑盒在鑒定牛蛙遺傳性別中的應用。

10、本發明還提供一種鑒定牛蛙遺傳性別的方法，所述方法包含使用如上述的引物組或者上述的試劑盒進行pcr擴增的步驟。

11、本發明與現有技術相比，至少具有如下有益效果：

12、本發明成功開發可以準確地鑒定蝌蚪的性別分子標記，并且可以準確地鑒定成蛙的性別，為生產上的單性群體選育策略奠定關鍵的技術基礎。本發明通過采集牛蛙和蝌蚪的材料，利用基因組重測序確定了雌雄基因組的差異片段，設計了一對引物，可通過pcr方法準確鑒定出成蛙和蝌蚪的遺傳性別。本發明的性別分子標記來鑒定牛蛙遺傳性別的準確性可達到100％。

技術特征：

1.一種鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記，其特征在于，所述分子標記包含seq?id?no:2和/或seq?id?no:4。

2.根據權利要求1所述的分子標記，其特征在于，所述分子標記由seq?id?no:2和/或seq?id?no:4組成。

3.根據權利要求2所述的分子標記，其特征在于，所述分子標記為seq?id?no:1和/或seq?id?no:3。

4.如權利要求1所述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記在制備鑒定牛蛙遺傳性別產品中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述產品為引物、或探針或者試劑盒。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述引物包含seq?id?no:4和seq?id?no:5。

7.一種鑒定如權利要求1所述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記的引物組，其特征在于，所述引物包含seq?id?no:4和seq?id?no:5。

8.一種鑒定如權利要求1所述的鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含如權利要求7所述的引物組。

9.一種如權利要求7所述的引物組或者權利要求8所述的試劑盒在鑒定牛蛙遺傳性別中的應用。

10.一種鑒定牛蛙遺傳性別的方法，其特征在于，所述方法包含使用如權利要求7所述的引物組或者權利要求8所述的試劑盒進行pcr擴增的步驟。

技術總結
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種鑒定牛蛙遺傳性別的分子標記、鑒定引物及其應用方法。本發明成功開發可以準確地鑒定蝌蚪的性別分子標記，并且可以準確地鑒定成蛙的性別，為生產上的單性群體選育策略奠定關鍵的技術基礎。本發明通過采集牛蛙和蝌蚪的材料，利用基因組重測序確定了雌雄基因組的差異片段，設計了一對引物，可通過PCR方法準確鑒定出成蛙和蝌蚪的遺傳性別。本發明的性別分子標記來鑒定牛蛙遺傳性別的準確性可達到100％。

技術研發人員：熊舒婷,王子奧,周海林,秦溱,胡亞洲,王曉清,李京希,華瑞云,李京誠
受保護的技術使用者：湖南農業大學
技術研發日：
技術公布日：2025/4/24