本發(fā)明屬于功能材料和藥物活性成分篩選，具體涉及一種細胞膜金磁篩選介質(zhì)及其在抗乳腺腫瘤活性成分篩選中的應用及方法。

背景技術：

1、天然產(chǎn)物中的活性成分大多數(shù)能夠與靶標蛋白發(fā)生強烈的相互作用，進而對生物體產(chǎn)生生物學效應。據(jù)統(tǒng)計，fda批準的小分子靶向藥物中，有超過50%的藥物是與它們靶細胞的細胞膜蛋白受體相互作用（yin?h.,?flynn?a. annu?rev?biomed?eng2016,?18,?51-76）。由于磁性材料的超順磁性，通過外加磁場實現(xiàn)材料與液體迅速分離，磁性材料與細胞膜結(jié)合的仿生平臺能將天然產(chǎn)物中活性配體便捷、快速、高效地篩選出來。

2、然而，細胞膜包覆磁性材料的制備技術并非易事。目前，主要通過共價鍵或超聲吸附的方式來實現(xiàn)細胞膜與磁性材料的結(jié)合。共價結(jié)合需要對細胞膜和磁性材料進行繁瑣的化學修飾，包括鏈接基團的活化等步驟，這不僅耗時較長，還可能影響細胞膜生物活性（fuj.,?jia?q.,?liang?p.,?et?al.,?anal?chem?2021,?93,?11719-11728;?hu?q.,?jia?l.,zhang?x.,?et?al.,?acta?pharm?sin?b?2022,?12,?394-405;?bu?y.,?wu?d.,?zhao?y.,et?al.,?acs?appl?mater?interfaces?2023,?15,?52150-52161）。此外，共價結(jié)合還可能破壞細胞膜的完整性和生物活性，降低其篩選效果。超聲吸附雖然操作簡便，但強烈的超聲作用容易對細胞膜造成損傷，影響其穩(wěn)定性和篩選準確性。同時，吸附在磁性材料表面的細胞膜容易脫落，導致篩選效率降低。因此，如何克服細胞膜包覆時間長、步驟繁瑣及穩(wěn)定性差等問題，成為當前細胞膜包覆磁性材料制備技術面臨的主要挑戰(zhàn)。

3、乳腺癌已成為全球發(fā)病率最高的癌癥，嚴重危害女性身心健康(ca?cancer?jclin?2021,?71,?209-249)。鑒于人表皮生長因子2（her2）陽性乳腺癌更具復發(fā)和轉(zhuǎn)移性，篩選靶向her2乳腺癌的藥物具有重要臨床意義。中醫(yī)古籍記載清熱解毒藥物可用于治療腫瘤，其中代表藥物之一為黃芩，并被發(fā)現(xiàn)可以抑制多種腫瘤細胞的增殖和轉(zhuǎn)移。因此進一步挖掘黃芩中抗乳腺癌活性成分，對黃芩抗腫瘤機制研究以及基于黃芩中藥新產(chǎn)品開發(fā)具有重要意義。

技術實現(xiàn)思路

1、為了解決現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明提供一種細胞膜金磁篩選介質(zhì)及其在抗乳腺腫瘤活性成分篩選中的應用及方法，通過靜電作用力和金屬配位作用力，實現(xiàn)了skbr3細胞膜在金磁微粒表面的高效、穩(wěn)定包覆，提高了中藥活性成分篩選的靈敏度。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術方案：一種生物活性配體的細胞膜金磁篩選介質(zhì)，包括金磁微粒和包覆在金磁微粒表面的skbr3細胞膜，所述金磁微粒包括fe3o4@sio2載體、fe3o4@sio2載體表面修飾的聚乙烯亞胺、金納米顆粒以及peg-sh。

3、進一步的，每400μg~700μg細胞膜中加入1mg金磁微粒。

4、進一步的，fe3o4@sio2載體包括fe3o4裸磁和fe3o4裸磁表面包裹的sio2涂層，fe3o4裸磁的粒徑為150nm~500nm，sio2涂層厚度為10nm~30nm。

5、本發(fā)明還提供一種生物活性配體的細胞膜金磁篩選介質(zhì)的制備方法，具體步驟如下：

6、將fe3o4@sio2載體分散液與聚乙烯亞胺溶液混合，超聲、洗滌后，得到第一反應液；

7、將金納米顆粒溶液和第一反應液混合，超聲、洗滌后，加入peg-sh溶液，反應后烘干，得到金磁微粒；

8、將金磁微粒加入her2陽性乳腺腫瘤skbr3細胞膜的pbs懸液中，混勻結(jié)合后清洗，得到skbr3細胞膜包覆的金磁微粒，即細胞膜金磁篩選介質(zhì)；

9、pbs的成分為2.7mm?kcl，2.0mm?kh2po4，137mm?nacl，10mm?na2hpo4，ph值為7.3~7.5@25oc。

10、進一步的，將fe3o4@sio2分散液與聚乙烯亞胺溶液混合，超聲、洗滌后，得到第一反應液的步驟中：

11、所述fe3o4@sio2分散液的濃度為0.2mg/ml~0.8mg/ml；fe3o4@sio2分散液與聚乙烯亞胺溶液混合后的終濃度為0.8mg/ml~2mg/ml。

12、進一步的，將金納米顆粒溶液和第一反應液混合，超聲、洗滌后，加入peg-sh溶液，反應后烘干，得到金磁微粒的步驟中：

13、金納米顆粒溶液的制備具體為：將濃度為2mmol/l~7mmol/l氯金酸水溶液與2倍體積的濃度為2mmol/l~7mmol/l的檸檬酸鈉溶液混合，向其中逐滴加入硼氫化鈉溶液，混合反應得到粒徑小于10nm金納米顆粒溶液。

14、進一步的，將金納米顆粒溶液和第一反應液混合，超聲、洗滌后，加入peg-sh溶液，反應后烘干，得到金磁微粒的步驟中：

15、將第一反應液和金納米顆粒溶液等體積混合；

16、peg-sh溶液的濃度為1mmol/l~2.5mmol/l。

17、進一步的，將金磁微粒加入her2陽性乳腺腫瘤skbr3細胞膜的pbs懸液中，混勻結(jié)合后清洗，得到skbr3細胞膜包覆的金磁微粒的步驟中：

18、將金磁微粒加入her2陽性乳腺腫瘤skbr3細胞膜的pbs懸液中，渦旋混勻，室溫下結(jié)合1h~2h，用pbs洗去未結(jié)合的細胞膜得到skbr3細胞膜包覆的金磁微粒。

19、本發(fā)明還提供一種抗her2乳腺腫瘤活性成分的提取方法，采用上述一種生物活性配體的細胞膜金磁篩選介質(zhì)進行，具體步驟如下：

20、將磁分去上清的細胞膜金磁篩選介質(zhì)加入待篩選的底物中進行孵育，得到孵育混合液；

21、對孵育混合液磁分棄上清，洗滌后，加入洗脫液孵育后，收集上清液得到待篩選的底物中抗her2乳腺腫瘤活性成分。

22、進一步的，所述待篩選的底物為黃芩提取液。

23、與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明至少具有以下有益效果：

24、本發(fā)明公開的一種生物活性配體的細胞膜金磁篩選介質(zhì)，包括金磁微粒和包覆在金磁微粒表面的skbr3細胞膜，所述金磁微粒包括fe3o4@sio2載體、fe3o4@sio2載體表面修飾的聚乙烯亞胺、金納米顆粒以及peg-sh，實現(xiàn)了skbr3細胞膜在金磁微粒表面的高效、穩(wěn)定包覆，避免了傳統(tǒng)方法中細胞膜易脫落的問題；通過將磁性材料表面正電荷聚合物和金納米顆粒與細胞膜通過靜電力和金屬配位力自組裝結(jié)合，制備細胞膜金磁篩選介質(zhì)，提高了細胞膜的結(jié)合穩(wěn)定性，保證了篩選過程中的靈敏度和準確性。制備的skbr3/cmaum磁性篩選介質(zhì)具有優(yōu)異的磁性，能夠在外加磁場下快速分離，便于后續(xù)操作。該篩選介質(zhì)不僅可用于抗her2乳腺腫瘤活性成分的篩選，還可拓展應用于其他腫瘤活性成分的篩選領域，為新藥研發(fā)提供新的思路和方法。

25、本發(fā)明公開的一種生物活性配體的細胞膜金磁篩選介質(zhì)的制備方法，在本發(fā)明提供的pbs懸液進行孵育，細胞膜與磁性粒子通過靜電力和配位力結(jié)合，步驟簡便、不需要超聲或活化，具有較高細胞膜結(jié)合穩(wěn)定性。本發(fā)明的方法通過靜電作用力和金屬配位作用力，實現(xiàn)了細胞膜在金磁微粒表面的高效、穩(wěn)定包覆，提高了中藥活性成分篩選的靈敏度和穩(wěn)定性。本發(fā)明制備的skbr3/cmaum磁性篩選介質(zhì)具有優(yōu)異的磁性和細胞膜結(jié)合穩(wěn)定性，能夠在外加磁場下快速分離，且細胞膜不易脫落。

26、本發(fā)明公開的一種抗her2乳腺腫瘤活性成分的提取方法，利用磁性材料與細胞膜結(jié)合的仿生篩選平臺，可以便捷、快速、高效地篩選出黃芩中具有抗her2乳腺癌活性的成分。將制備得到的細胞膜金磁粒子應用于黃芩中抗her2乳腺腫瘤的潛在活性成分垂釣，達到對黃芩中抗her2乳腺癌藥物先導物發(fā)現(xiàn)的目的，同時也將為其他中藥的抗腫瘤研究提供有益的借鑒和參考。