本發(fā)明屬于腫瘤靶向治療，具體涉及一種人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、白血病是一種由于白細(xì)胞或白細(xì)胞前體細(xì)胞發(fā)生惡行病變而引起的疾病，是危害人類的主要惡性腫瘤之一。輻射暴露、接受有些類型的化療或接觸某些化學(xué)品會(huì)增加白血病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。導(dǎo)致這種疾病發(fā)生的原因之一是染色體片段重排，產(chǎn)生的異常染色體干擾細(xì)胞分裂的正常進(jìn)行。臨床可見不同程度的貧血、發(fā)熱、出血以及肝、脾、淋巴結(jié)腫大和關(guān)節(jié)疼痛等。采用藥物靶向治療策略治療白血病，可以提高白血病細(xì)胞靶向治療的效率。蛋白降解靶向嵌合體（proteolysis?targeting?chimeras，protac）是一種新型的藥物設(shè)計(jì)策略，它利用細(xì)胞內(nèi)泛素-蛋白酶體系統(tǒng)選擇性降解目標(biāo)蛋白。protac不僅可以降解目標(biāo)蛋白，還可以靶向傳統(tǒng)上認(rèn)為難以成藥的靶點(diǎn)。在白血病治療中，protac技術(shù)展現(xiàn)出了巨大的潛力。

2、盡管protac技術(shù)在治療白血病等惡性腫瘤方面展現(xiàn)出了巨大的潛力，但是與傳統(tǒng)小分子相比，protac的分子量更大，柔性更高，氫鍵供體更多，極性表面積更大，這些因素導(dǎo)致其溶解度、穩(wěn)定性和代謝特性等物理化學(xué)性質(zhì)較差，且細(xì)胞滲透性和口服生物利用度低。因此開發(fā)新的protac類型以提高其生物活性和治療效果是非常必要的。多肽偶聯(lián)藥物（peptide-drug?conjugate，簡稱pdc）是一種新興的靶向治療方法，pdc是一種由多肽、連接子（linker）和具有細(xì)胞毒性的有效載荷（cytotoxicity?payload）三部分組成的偶聯(lián)藥物，旨在利用多肽的高透膜性和靶向性，以及protac的蛋白降解能力，實(shí)現(xiàn)更精準(zhǔn)、高效的疾病治療。盡管pdc在制備抗白血病藥物中的應(yīng)用展現(xiàn)出巨大的潛力，但同時(shí)也存在一些技術(shù)缺陷。例如，多肽在體內(nèi)的穩(wěn)定性較差，容易被蛋白酶降解，導(dǎo)致pdc在體內(nèi)的循環(huán)時(shí)間較短，難以充分滲透到腫瘤組織中；組織穿透性有限，pdc穿透深度受到多肽分子量和理化性質(zhì)的限制，導(dǎo)致pdc難以到達(dá)腫瘤組織的核心部位，影響其對腫瘤細(xì)胞的殺傷效果；口服給藥效率低，多肽在胃腸道中容易被消化酶降解，且容易受到肝腸循環(huán)和首過消除效應(yīng)的影響，導(dǎo)致口服給藥時(shí)pdc的生物利用度極低，目前上市和在研的pdc藥物均需要通過注射給藥，限制了其給藥途徑的靈活性和患者的接受度。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有protac和pdc藥物在溶解度、穩(wěn)定性、穿透性、口服生物利用度等方面的不足，限制了protac和pdc藥物在抗腫瘤治療中的應(yīng)用的問題，且未見通過人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽和酶解性linker提高pdc型protac透膜性和生物活性報(bào)道的技術(shù)現(xiàn)狀。本發(fā)明的目的在于提供一種人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac及其制備方法和應(yīng)用。

2、為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)：

3、本發(fā)明的第一個(gè)方面，公開了一種人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac，所述酶敏感性pdc型protac由人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾protac獲得；所述protac中的目標(biāo)蛋白配體為抗白血病藥物；

4、所述人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽序列如seq?id?no.4所示；

5、所述酶敏感性pdc型protac的序列如seq?id?no.2所示。

6、所述酶敏感性pdc型protac還包括酶敏感性序列，由人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽和酶敏感性序列修飾protac獲得，所述酶敏感性序列為組織蛋白酶b敏感性序列。

7、優(yōu)選地，所述酶敏感性pdc型protac的序列如seq?id?no.3所示。

8、優(yōu)選地，所述抗白血病藥物為伊馬替尼。

9、優(yōu)選地，所述人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽為cyclo-c9c-r。

10、優(yōu)選地，所述酶敏感性序列的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。

11、單獨(dú)采用細(xì)胞穿膜肽修飾時(shí)，人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽與protac通過共價(jià)鍵連接；

12、采用人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽和酶敏感性序列共同修飾時(shí)，人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽、酶敏感性序列與protac通過共價(jià)鍵連接。

13、所述protac由低氧誘導(dǎo)因子-1α蛋白片段與藥物分子通過十二烷二酸連接得到，所述低氧誘導(dǎo)因子-1α蛋白片段的序列為leu-ala-pro(oh)-tyr-ile（如seq?id?no.5所示）。

14、本發(fā)明的第二方面，公開了上述人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac的制備方法，通過基于fmoc氨基酸的人工固相合成法，制備得到細(xì)胞穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac。

15、本發(fā)明的第三方面，公開了上述人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac在制備抗白血病藥物中的應(yīng)用。

16、優(yōu)選地，所述抗白血病藥物為靶向人慢性髓系白血病細(xì)胞或人外周血嗜堿性白血病細(xì)胞的藥物。

17、本發(fā)明的第四方面，公開了一種抗白血病組合物，包括具有抗白血病作用的其他活性成分、上述人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac和藥學(xué)上可接受的載體。

18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：

19、本發(fā)明提供的一種人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac，首次將細(xì)胞穿膜肽和/或酶解性linker引入protac的設(shè)計(jì)中，提出了一種全新的白血病治療策略，不僅解決了現(xiàn)有protac溶解度、穩(wěn)定性及細(xì)胞滲透性差的問題，還提高了protac的靶向性；人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽能夠特異性地識(shí)別并結(jié)合白血病細(xì)胞表面的受體或抗原，引導(dǎo)protac進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞；酶敏感性序列在細(xì)胞內(nèi)特定酶的作用下斷裂，釋放pdc活性成分，實(shí)現(xiàn)藥物的靶向遞送和可控釋放。

20、本發(fā)明提供的制備方法，采用fmoc氨基酸的固相合成法來制備人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽修飾的酶敏感性pdc型protac，該方法高效、精確、靈活，能夠制備出純度高、活性強(qiáng)的protac藥物，為抗腫瘤藥物的開發(fā)提供了新的思路和方法；通過結(jié)合細(xì)胞穿膜肽、酶解性linker和人工固相合成法，顯著提高了protac的溶解度、穩(wěn)定性、細(xì)胞滲透性和生物活性；該方法還具有成本低、產(chǎn)率高等優(yōu)點(diǎn)，具有廣闊的應(yīng)用前景和重要的研究價(jià)值。

21、本發(fā)明提供的應(yīng)用，通過將pdc型protac應(yīng)用于抗白血病藥物的制備，可以開發(fā)出具有更高靶向性、更低毒副作用的新型抗白血病藥物，通過引入人白血病細(xì)胞靶向穿膜肽和或酶解性linker，不僅提高了protac的溶解度、穩(wěn)定性和細(xì)胞滲透性，還增強(qiáng)了其生物活性和治療效果，為其在抗白血病治療中的應(yīng)用開辟了新的途徑，具有廣泛的應(yīng)用前景和重要的臨床意義。

22、本發(fā)明提供的抗白血病組合物，通過將pdc型protac與其他具有抗白血病作用的活性成分進(jìn)行組合，可以進(jìn)一步拓寬其治療范圍和提高治療效果；藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑的加入也有助于提高組合物的穩(wěn)定性和生物利用度，該抗白血病組合物具有多種活性成分，能夠發(fā)揮協(xié)同作用，提高白血病的治療效果。