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一種基于單端測序的多重PCR擴增建庫方法及其應(yīng)用與流程

文檔序號:41223752發(fā)布日期:2025-03-11 14:02閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,包括如下步驟:

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,在步驟(2)中,所述引物池包括用于檢測原癌基因和抑癌基因的snv/indel、cnv、fusion、msi突變中任意一種或多種的特異性引物對。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,在步驟(2)中,所述引物池包括用于檢測akt1、alk、araf、braf、cd274、ctnnb1、ddr2、dpyd、egfr、erbb2、esr1、fbxw7、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、gnas、hras、idh1、idh2、kit、kras、map2k1、met、nras、ntrk1、ntrk3、pdgfra、pik3ca、pold1、pole、pten、ret、ros1、smad4、tert、tp53、ugt1a1中任意一種或多種基因或msi的引物組成的dna引物池或用于檢測alk、braf、cldn18、egfr、fgfr1、fgfr2、fgfr3、fgfr4、met、nrg1、ntrk1、ntrk2、ntrk3、ret、ros1中任意一種或多種基因的引物組成的rna引物池;

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,所述dna引物池中特異性擴增序列包括如下所示序列中的一種或多種:

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,seq?idno.1~seq?id?no.410所示任意一種特異擴增序列可分別與seq?id?no.414、seq?id?no.415所示搭橋序列連接,用于檢測原癌基因和抑癌基因的snv/indel、cnv、fusion、msi突變中任意一種或多種。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,在步驟(4)中,所述index引物序列如下:

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法,其特征在于,在步驟(5)中,所述生物學(xué)分析的步驟包括:

8.一種權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法在篩選腫瘤靶向藥、癌癥診斷或復(fù)發(fā)監(jiān)測上的應(yīng)用。

9.一種可用于實施權(quán)利要求1所述基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法的ngs檢測裝置或試劑盒。

10.一種權(quán)利要求9所述可用于實施基于單端測序的多重pcr擴增建庫方法的ngs檢測裝置或試劑盒在篩選腫瘤靶向藥、癌癥診斷或復(fù)發(fā)監(jiān)測上的應(yīng)用。


技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種基于單端測序的多重PCR擴增建庫方法及其應(yīng)用,屬于生物醫(yī)藥技術(shù)及分子診斷技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供了一種基于單端測序的多重PCR擴增建庫方法,包括:DNA或RNA的提取與處理、第一輪PCR反應(yīng)及純化、消化反應(yīng)及純化、第二輪PCR反應(yīng)及純化,構(gòu)建文庫并進行檢測。上述方法通過優(yōu)化引物設(shè)計、改進擴增體系和精簡文庫構(gòu)建流程,顯著提升了檢測過程的靈敏度和特異性,并簡化了操作步驟,可用于檢測與腫瘤靶向治療相關(guān)的基因突變(包括SNV/Indel、Fusion、CNV以及MSI),根據(jù)檢測結(jié)果進行癌癥的診斷、復(fù)發(fā)監(jiān)測和用藥指導(dǎo),為科研和臨床應(yīng)用提供了有力的工具支持。

技術(shù)研發(fā)人員:王璐,魏麗,陳維之,杜波
受保護的技術(shù)使用者:臻和(北京)生物科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日:
技術(shù)公布日:2025/3/10
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