本申請涉及生化分析，特別是涉及一種用于檢測微囊藻毒素的層析試紙條及方法。

背景技術：

1、微囊藻毒素(mcs)是一類由藍藻細菌產生的環七肽藍藻毒素，廣泛存在于江河湖水中。據報道其對蛋白磷酸酶有明顯的抑制作用，因此mcs可引起人類肝功能衰竭甚至導致死亡。由于多肽中兩種可變氨基酸組成的不同，mcs具有多種異構體，目前發現mcs存在90多種異構體。其中，微囊藻毒素lr(mc-lr)是mcs家族中分布最廣、毒性最強、危害最大的毒素，含有7個氨基酸，在兩個可變位置處為亮氨酸(l)和精氨酸(r)。人類可能通過飲用水或攝入受污染的水產品而接觸到mc-lr，為此我國在頒布的中國生活飲用水衛生標準(gb?5749-2006)中規定飲用水中微囊藻毒素含量限制為1.0μg/l。因此，現場快速檢測淡水水源中的mc-lr對于確保遵守安全標準至關重要。

2、目前，對于mc-lr的檢測主要有高效液相色譜/質譜法(hplc)、液相色譜質譜聯用(hplc-ms)、酶聯免疫分析(elisa)、蛋白磷酸酶抑制分析法(ppia)等，這些檢測方法雖然具有較高的檢測靈敏度，但由于分析成本高、儀器昂貴、檢測時間長等弊端，難以滿足快速檢測mc-lr的需求。

技術實現思路

1、鑒于現有技術問題，本申請提供一種用于檢測微囊藻毒素的層析試紙條及方法，能夠實現對水樣中微囊藻毒素的現場快速檢測。

2、本申請中用于檢測微囊藻毒素的層析試紙條，具有沿層析方向依次布置的樣品墊、結合墊以及檢測墊，所述結合墊存儲有帶信標分子的銀金復合納米粒子，所述銀金復合納米粒子的表面偶聯有可與所述微囊藻毒素特異性結合的第一抗體，所述檢測墊存儲有與所述微囊藻毒素特異性結合的適配體。

3、可選的，所述銀金復合納米粒子為金層包裹銀球納米粒子表面的核殼結構。

4、可選的，所述銀球納米粒子的粒徑為30～40nm，所述金層的厚度為1～2nm。

5、可選的，所述微囊藻毒素為微囊藻毒素lr(mc-lr)，第一抗體為可與mc-lr特異性結合的抗體。

6、可選的，所述適配體為可與微囊藻毒素lr特異性結合的適配體，適配體例如5’-biotin-ggcgccaaacaggaccaccatgacaattacccataccacc?tcattatgccccatctccgcgaggtggtatgggta-3’(seq?id?no：1)。

7、可選的，所述適配體修飾有鏈霉親和素(br)。

8、可選的，所述檢測墊中所述適配體的含量為0.0005～0.001nmol/mm2。

9、可選的，所述檢測墊包括底板以及固定于所述底板表面且用于層析過濾的醋酸纖維膜。

10、可選的，所述檢測墊存儲有與所述第一抗體特異性結合的第二抗體，所述適配體與所述第二抗體沿層析方向間隔布置，分別為t線和c線。

11、可選的，所述第二抗體為羊抗鼠igg。

12、可選的，所述信標分子為4-氨基苯硫酚(4-atp)、4-巰基苯甲酸、4-巰基苯甲腈、4-巰基苯硫醇中的至少一種。優選為4-atp。

13、可選的，將帶信標分子的銀金復合納米粒子溶液與所述第一抗體溶液在中性條件下混合反應，反應結束后加入位點封閉劑；離心去上清，分離得到第一抗體-銀金復合納米粒子-信標分子的偶聯物(ag/4-atp@au?nps)。

14、可選的，所述第一抗體的濃度為0.8～1.2mg/ml，優選為1.0mg/ml。

15、可選的，所述位點封閉劑為牛血清白蛋白(bsa)，所述牛血清白蛋白的濃度為10wt％。

16、本申請還提供檢測微囊藻毒素的方法，包括如下步驟：

17、提供所述層析試紙條；

18、將待測樣本添加于所述樣品墊，待反應完成，利用激光照射所述檢測墊，收集檢測墊的拉曼信號，構建拉曼信號與所述微囊藻毒素濃度的標準曲線，根據所述標準曲線，計算待測樣本中微囊藻毒素的含量。

19、與現有技術相比，本申請結合超靈敏的sers技術和高特異性免疫技術，利用層析試紙條能夠快速、定量地檢出水樣中微囊藻毒素，且檢測的靈敏度高、特異性強、準確性好。

技術特征：

1.用于檢測微囊藻毒素的層析試紙條，具有沿層析方向依次布置的樣品墊、結合墊以及檢測墊，其特征在于，所述結合墊存儲有帶信標分子的銀金復合納米粒子，所述銀金復合納米粒子的表面偶聯有可與所述微囊藻毒素特異性結合的第一抗體，所述檢測墊存儲有與所述微囊藻毒素特異性結合的適配體。

2.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述銀金復合納米粒子為金層包裹銀球納米粒子表面的核殼結構。

3.根據權利要求2所述的層析試紙條，其特征在于，所述銀球納米粒子的直徑為30～40nm，所述金層的厚度為1～2nm。

4.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述微囊藻毒素為微囊藻毒素lr。

5.根據權利要求4所述的層析試紙條，其特征在于，所述適配體為如seq?id?no：1所示的核苷酸序列。

6.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述檢測墊中所述適配體的含量為0.0005～0.001nmol/mm2。

7.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述檢測墊包括底板以及固定于所述底板表面且用于層析過濾的醋酸纖維膜。

8.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述檢測墊存儲有可與所述第一抗體特異性結合的第二抗體。

9.根據權利要求1所述的層析試紙條，其特征在于，所述銀金復合納米粒子偶聯第一抗體的制備方法包括：

10.檢測微囊藻毒素的方法，其特征在于，包括如下步驟：

技術總結
本申請公開一種用于檢測微囊藻毒素的層析試紙條及方法，所述層析試紙條具有沿層析方向依次布置的樣品墊、結合墊以及檢測墊，所述結合墊存儲有帶信標分子的銀金復合納米粒子，所述銀金復合納米粒子的表面偶聯有可與所述微囊藻毒素特異性結合的第一抗體，所述檢測墊存儲有與所述微囊藻毒素特異性結合的適配體；將待測樣本添加于所述樣品墊，待反應完成，利用激光照射所述檢測墊，收集檢測墊的拉曼信號，根據所述拉曼信號，計算待測樣本中微囊藻毒素的含量。本申請提供的檢測方法能夠快速實現水中微囊藻毒素的定量檢測，且檢測的靈敏度高、特異性強、準確性好。

技術研發人員：徐晴,朱依雯,李佳霖,林丙永,姚媛媛,王悅靚,陳麗芬,郭隆華
受保護的技術使用者：嘉興大學
技術研發日：
技術公布日：2025/4/28