專利名稱：枸杞雜交育種的方法
技術領域：
本發明涉及到農作物育種領域，特別是枸杞雜交育種的方法。
背景技術：
常規枸杞雜交育種的方法是親本雜交后，使其自然結實，待雜交種子成熟后，收集雜交種子進行常規播種，培育出雜交植株后進行染色體鏡檢及其性狀觀察。
常規枸杞雜交技術有下列缺點(1)在枸杞雜交育種過程中，特別是四倍體同二倍體雜交，雜交種子因胚乳或胚的發育障礙而引起的種子敗育現象特別嚴重，飽籽率只有0.9％。很難得到具有生命力的雜交種子，雜交成功率極低。(2)常規雜交技術或方法。周期較長，往往一個雜交過程(從授粉到染色體鏡檢)至少要經歷兩年以上時間，使得一個枸杞新品種的選育周期至少需要8-10年。(3)常規雜交技術很容易受到外界環境和人為因素的影響，如自然災害或人為損壞，使得全部技術過程可控性不強，這也是雜交成功率極低的重要原因。(4)常規雜交技術不易在較短的時間內獲得較多的育種材料，選擇范圍窄，新品種選育成功率低。

發明內容
本發明的任務在于克服上述缺陷，提供一種可拯救雜交后代敗育幼胚、雜交過程不易受外界環境和人為因素影響而可控性強，雜交成功率高、雜交過程短的新型枸杞雜交育種方法。
本發明的技術方案是一種枸杞雜交育種的方法，其特征在于采用了如下措施(1)首先自枸杞親本雜交授粉后第五天起，對枸杞雜交幼胚的形態發育進行觀察，待幼胚發育到“魚雷期”或“心型期”時，確定為幼胚接種的最佳時期；(2)摘取枸杞幼果，在無菌室進行滅菌處理；(3)在解剖鏡下剖開幼果種子，取出幼胚，接種到由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+NAA0.02-0.05mgL-1+IAA1.0-1.5mgL-1+LH100-300mgL-1構成的第一培養基上培養(4)對幼胚進行培養及植株再生處理首先將接種后的幼胚暗培養24-48小時，然后放置在25℃-28℃，光照為2000LX的條件下進行培養；待幼胚形成的愈傷組織增殖且轉綠，將該綠色愈傷組織轉移到由MS+6-B0.5-1.0mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基上繼續培養；(5)待幼胚分化苗長高至1.0cm以上時，對其進行染色體鏡檢，在確定其為三倍體后，立即擴繁建立該株系的無性系；(6)對該三倍體株系采用由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基擴繁后，再用由1/2MS+IBA0.4-0.6mgL-1構成的第三培養基進行接種培養使之生根，當根生至0.5-1.0cm時即可練苗移栽。
所述滅菌處理是指將枸杞幼果先放在70％的酒精中浸泡1-2分鐘，然后再放入0.1升汞(HgCl2)中浸泡8-10分鐘，再用無菌水沖洗3-5次。
所述移栽是在營養缽中進行的，營養缽的下部2/3是營養土，其上部1/3為用0.2％多菌靈消毒過的蛭石；移入苗木后的營養缽應放到苗木培養架上，也可以放在鋪有帶孔地膜的地面苗床上。
本發明有效地解決了常規枸杞雜交育種周期長、雜交敗育嚴重及易受外界因素影響等實際問題，具有雜交成功率高，育種周期短，受外界環境及人為影響小，技術可控性好的優點。
常規雜交育種從授粉到得到植株一般至少需要兩年時間，本發明只需要60天；常規雜交育種經兩年育種工作最多只能得到5-10個雜交單株，而利用本發明1年中最少能得到50-200個雜交單株，且利用快繁技術可在1年中繁殖50-100萬株雜交無性系植株，可加快新品種的推廣。
(四)具體實施例枸杞雜交育種的方法(1)首先自枸杞親本雜交授粉后第五天起，開始對枸杞雜交幼胚的形態發育進行觀察。不同親本間雜交幼胚的形態發育是不同的，特別是枸杞四倍體同二倍體雜交，幼胚一般發育到“魚雷期”或“心型期”就停止發育。通過觀察可知，該期一般在授粉后10-15天，此時為幼胚接種的最佳時期。
(2)摘取授粉后10-15天的枸杞幼果，在無菌室進行滅菌處理。即將枸杞幼果先放在70％的酒精中浸泡1-2分鐘，然后再放入0.1升汞(HgCl2)中浸泡8-10分鐘，再用無菌水沖洗3-5次。
(3)在解剖鏡下剖開幼果種子，取出幼胚，接種到由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+NAA0.02-0.05mgL-1+IAA1.0-1.5mgL-1+LH100-300mgL-1構成的第一培養基上培養。
該技術手段主要為枸杞幼胚培養尋找最佳培養時期，提供幼胚生長的理想培養基，在該培養基上，“魚雷型”期的幼胚，成活率達到47-50％，“心型期”幼胚成活率達70％以上。
(4)對幼胚進行培養及植株再生處理首先將接種后的幼胚暗培養24-48小時，然后放置在25℃-28℃，光照為2000LX的條件下進行培養。7天后開始形成愈傷組織，15-20天愈傷組織增殖且轉綠，將該綠色愈傷組織轉移到由MS+6-B0.5-10mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基上繼續培養，20天左右即可分化成芽，待芽長至1.5-2.0cm時即可進行染色體鏡檢。
該技術手段主要是為幼胚培養提供理想的光照、溫度條件，并為幼胚形成的愈傷組織成苗，完成植株再生提供理想的培養基。在該培養基上，愈傷組織100％能分化成苗。
(5)待幼胚分化苗長高至2.0cm以上時，對其進行染色體鏡檢，方法是取幼葉(莖尖生長點周圍5-6片)和生長點用0.1％秋水仙素預處理3-4小時，沖洗后用1N的HCL解離10-15分鐘，再用卡寶品紅染色后壓片進行染色體計數，當確定為三倍體時，立即擴繁建立該株系的無性系。做到鏡檢與三倍體無性系的建立同步進行。
采用該技術能縮短育種年限，如在執行國家科技部“九五”期間重大攻關項目“無籽枸杞新品種選育”攻關中，1998年8月份對一雜交組合進行雜交授粉，到10月份得到分化三倍體株系幼苗，12月份將生根苗在溫室進行加代處理，于1999年4月份移植大田進行評比試驗，當年7月份開花結果，此技術與常規育種相比僅此一個環節就使育種周期縮短2年。
(6)對該三倍體株系采用由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基擴繁后，再用由1/2MS+IBA0.4-0.6mgL-1構成的第三培養基進行接種培養使之生根，生根培養基接種后7天開始生根，11天左右90％以上的苗木生根，當根生至0.5-1.0cm時即可練苗移栽。
移栽是在營養缽中進行的，營養缽的下部2/3是營養土，上部1/3為用0.2％多菌靈消毒過的蛭石；移入苗木后的營養缽應放到苗木培養架上，若為地上苗床可在苗床上鋪帶孔地膜，以利空氣修根，切忌苗木根系直接進入土壤。移栽后注意保濕、遮陰，25天后去掉塑料保濕棚練苗，當苗高長至10-15cm左右可直接進行大田綠苗移栽。該技術主要是為迅速擴繁苗木，縮短育種年限，同時可將各雜交無性系利用試管苗形式加以保存，建立育種基因庫。
本發明也可用于與枸杞相類似的其它植物新品種的選育，能有效地在短時期內選育出優新品種。因此本發明的保護范圍也應涵蓋這些類似的植物新品種的選育。
注 6-BA為 6-芐基氨基嘌呤 6-Benzyl-adeninIAA為 吲哚-3-乙酸 Indole-3-acetic acidIBA為 吲哚-3-丁酸 Indole-3-butyric acidNAA為 α-萘乙酸 α-Naphthy-aeetic acidLH為 水解乳蛋白 TC Lactal bumin Hydroly Sate
秋水仙素ColchicineMS培養基的配方為單位為mg/l
權利要求
1.一種枸杞雜交育種的方法，其特征在于采用了如下措施(1)首先自枸杞親本雜交授粉后第五天起，對枸杞雜交幼胚的形態發育進行觀察，待幼胚發育到“魚雷期”或“心型期”時，確定為幼胚接種的最佳時期；(2)摘取枸杞幼果，在無菌室進行滅菌處理；(3)在解剖鏡下剖開幼果種子，取出幼胚，接種到由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+NAA0.02-0.05mgL-1+IAA1.0-1.5mgL-1+LH100-300mgL-1構成的第一培養基上培養；(4)對幼胚進行培養及植株再生處理首先將接種后的幼胚暗培養24-48小時，然后放置在25℃-28℃，光照為2000LX的條件下進行培養；待幼胚形成的愈傷組織增殖且轉綠，將該綠色愈傷組織轉移到由MS+6-B0.5-1.0mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基上繼續培養；(5)待幼胚分化苗長高至1.0cm以上時，對其進行染色體鏡檢，在確定其為三倍體后，立即擴繁建立該株系的無性系；(6)對該三倍體株系采用由MS+6-BA0.5-1.0mgL-1+IAA1.0-2.0mgL-1構成的第二培養基擴繁后，再用由1/2MS+IBA0.4-0.6mgL-1構成的第三培養基進行接種培養使之生根，當根生至0.5-1.0cm時即可練苗移栽。
2.根據權利要求1所述的枸杞雜交育種的方法，其特征在于所述滅菌處理是指將枸杞幼果先放在70％的酒精中浸泡1-2分鐘，然后再放入0.1升汞(HgCl2)中浸泡8-10分鐘，再用無菌水沖洗3-5次。
3.根據權利要求1或2所述的枸杞雜交育種的方法，其特征在于所述移栽是在營養缽中進行的，營養缽的下部2/3是營養土，其上部1/3為用0.2％多菌靈消毒過的蛭石；移入苗木后的營養缽應放到苗木培養架上，也可以放在鋪有帶孔地膜的地面苗床上。
全文摘要
本發明公開了一種枸杞雜交育種的方法,主要步驟為:(1)觀察枸杞雜交幼胚的發育,確定幼胚接種的最佳時期;(2)摘取枸杞幼果,在無菌室進行滅菌處理;(3)在解剖鏡下剖開幼果種子,取出幼胚,接種到由MS+6－BA0.5－1.0mgL
文檔編號A01H1/02GK1336106SQ0112604
公開日2002年2月20日 申請日期2001年8月25日 優先權日2001年8月25日
發明者李健, 王錦秀 申請人:寧夏林業研究所(有限公司)