專利名稱：：用檀香樹(shù)種子胚離體快速育苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹(shù)種子胚離體培養(yǎng)快速苗育的方法。
背景技術(shù)：
：檀香樹(shù)(53/^W，《3乃，L.)是檀香科常綠喬木，原產(chǎn)于印度、印度尼西亞及馬來(lái)西亞，有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。其樹(shù)干心材含有豐富的揮發(fā)油，是名貴的中藥材，主要有溫中和胃、止痛止血的功效，心材所含的揮發(fā)油在醫(yī)藥工業(yè)上用途非常廣泛。此外，檀香還是日用化妝品生產(chǎn)中的貴重原料。檀香是常綠植物，也作為亞熱帶地區(qū)的綠化樹(shù)種，因此，大力推廣檀香種植對(duì)于解決國(guó)內(nèi)檀香資源緊缺具有重大意義。推廣種植檀香樹(shù)需要解決的是種苗的來(lái)源，目前檀香樹(shù)苗主要靠種子繁殖，由于檀香種子成熟后有一定的休眠期，播種前需要半年至一年的沙藏，從播種到萌發(fā)成苗，一般需23個(gè)月，且種子發(fā)芽率低，出苗不整齊，是檀香種苗繁育的一大障礙。文獻(xiàn)"檀香體細(xì)胞胚胎的發(fā)生及植株再生的研究"(食品與藥品，200S,10(1):35-37)報(bào)道了應(yīng)用現(xiàn)代生物技術(shù)研究開(kāi)發(fā)檀香樹(shù)種苗的生產(chǎn)，其方法是用檀香樹(shù)的葉片在附加1.1pmol/LTDZ(thidiazuron,N-苯基-N'-l,2，3-噻二唑-5-脲)的MS培養(yǎng)基(Murashige和Skoog，1962)上誘導(dǎo)體細(xì)胞胚胎的發(fā)生，再將生成的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)移到附加1.4pmol/L的赤霉素的MS培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使之發(fā)育成苗。該方法培養(yǎng)的周期長(zhǎng)，從體細(xì)胞胚誘導(dǎo)培養(yǎng)開(kāi)始到無(wú)菌苗生成需要34個(gè)月的時(shí)間；生成的無(wú)菌苗沒(méi)有根，所得的檀香苗成不了種苗，不能推廣應(yīng)用。CN101213936A公開(kāi)了一種檀香的組織培養(yǎng)快繁種苗的方法，但它是需要用十年以上的檀香樹(shù)的嫩芽進(jìn)行體外培養(yǎng)，其方法需四個(gè)步驟一是誘導(dǎo)長(zhǎng)出不定芽的培養(yǎng)；二是叢芽繁殖培養(yǎng)；三是生根培養(yǎng)；四是移栽。步驟繁瑣，成苗時(shí)間長(zhǎng)，成本高而且在實(shí)際應(yīng)用中，成功率很低，僅處在理論研究階段，方法上有待進(jìn)一步改進(jìn)。因此，尋求一種實(shí)用技術(shù)快速培養(yǎng)檀香樹(shù)苗對(duì)于檀香種植業(yè)具有重要的實(shí)際意義。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供了一種能實(shí)際應(yīng)用于批量生產(chǎn)的，檀香樹(shù)種苗快速繁育的方法。為達(dá)到本發(fā)明的目的，所采用的技術(shù)方案是用檀香樹(shù)種子胚離體快速育苗的方法，它是取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25士2'C，無(wú)菌黑暗培養(yǎng)IO天，第11天增加光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26士2'C、相對(duì)濕度75±5%、光照強(qiáng)度為150020001x、光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，種苗可長(zhǎng)成1520公分高，根系發(fā)達(dá)的樹(shù)苗，即可移栽至大田。所說(shuō)的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加26mg的赤霉素或1L的MS培養(yǎng)基中添加1.0~2.0mg6-芐基氨基嘌呤。為了提高種胚的發(fā)芽率和成活率，將用作離體培養(yǎng)的檀香樹(shù)的成熟果實(shí)去除肉質(zhì)的果皮，洗凈后，用重量百分濃度為0.1%的HgCl2溶液浸泡815分鐘，或510°/。的次氯酸鈉水溶液浸泡1520分鐘，或用0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡后取出種子用無(wú)菌水沖洗，去除水分后備用。本發(fā)明的有益效果1.縮短了育苗時(shí)間從用種胚開(kāi)始培養(yǎng)至長(zhǎng)成1520公分高，可移栽大田的苗，僅需5060天；2.成苗率高，成苗率可達(dá)到87%;3.種苗發(fā)芽整齊，便于大規(guī)模生產(chǎn)操作；4.成本比組織培養(yǎng)低。下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明的技術(shù)方案具體實(shí)施例方式實(shí)施例1檀香樹(shù)種子胚離體育苗1.材料與方法l.l種子采集在10月12月間，采集樹(shù)齡約為IO年的檀香樹(shù)成熟(紫黑色)果實(shí)，去除外層紫黑色肉質(zhì)果皮后，用清水洗凈，晾干備用。人工培養(yǎng)基的酉己制按文獻(xiàn)NarayanaswamiS,NorstogK.Plantembryoculture.BotRev[J]，1964,30:587-628配制MS培養(yǎng)基，高壓滅菌(O.lMPa，121°C,15分鐘)后冷卻至5(TC，按，每lL的MS培養(yǎng)基添加4.8mg赤霉素。1.2種胚離體培養(yǎng)將上述檀香種子剝除紅色骨質(zhì)中果皮，取出種子，用重量百分濃度為10%的次氯酸鈉水溶液浸泡15分鐘后，用無(wú)菌水沖洗5次，吸干表面過(guò)多水分，在無(wú)菌條件下接種于人工培養(yǎng)基上(每瓶接種3個(gè)胚)，在25土rc，黑暗培養(yǎng)。每5天觀察一次，記錄萌發(fā)情況；第ll天轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)(每天16小時(shí)光照，8小時(shí)黑暗，光照強(qiáng)度為2000k)，培養(yǎng)10天后大部分種胚都己萌發(fā)，或長(zhǎng)成帶12對(duì)葉的小苗，即可取出移栽至沙土，在26士2'C溫度，相對(duì)濕度7080%，多少光照度光照12小時(shí)的條件下培養(yǎng)30天，檀香苗生長(zhǎng)健壯，根系發(fā)達(dá)，苗高達(dá)1520公分，即可成為栽培生產(chǎn)用苗，同時(shí)統(tǒng)計(jì)成苗數(shù)量，計(jì)算成苗率。結(jié)果見(jiàn)表l。試驗(yàn)結(jié)果表1檀香種胚體外培養(yǎng)成苗情況<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>萌發(fā)率計(jì)算萌發(fā)率=萌發(fā)的胚數(shù)量/接種的胚數(shù)量X100%成苗率計(jì)算成苗率二成苗的數(shù)量/接種的胚數(shù)量X100%實(shí)施例2檀香樹(shù)種子胚胎用不同激素濃度的培養(yǎng)基離體育苗l.材料與方法l.l種子采集同實(shí)施例l培養(yǎng)基的配制與實(shí)施例1相同方法配制MS培養(yǎng)基并滅菌后，按每1L的MS培養(yǎng)基添加2.0mg或6.0mg赤霉素配制，分別為試驗(yàn)組1、2。1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實(shí)施例l。剝?nèi)テさ姆N子用O.1%的升汞(HgCl2)溶液浸泡10分鐘。種子消毒后的處理方法同實(shí)施例1結(jié)果見(jiàn)表2表2檀香種胚體外培養(yǎng)成苗情況試驗(yàn)組試驗(yàn)批次檀香種胚總萌發(fā)數(shù)平均萌發(fā)總成苗數(shù)平均成苗率接種數(shù)量(粒)率(％)(顆)(%)(粒)1958387.48084.212998787.88585.93998989.98686.91907886.76572.222907583.37077.83908088.96875.5實(shí)施例3檀香樹(shù)種子胚胎用其它激素培養(yǎng)基離體育苗l.材料與方法l.l種子采集同實(shí)施例l培養(yǎng)基的配制與實(shí)施例1相同方法配制MS培養(yǎng)基，按2.0mg/L的用量添加6-芐基氨基嘌呤(6-BA)后，再高壓滅菌(O.lMPa，121°C，15分鐘)。1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實(shí)施例1。結(jié)果見(jiàn)表3表3檀香種胚在含6-BA的人工培養(yǎng)基上培養(yǎng)的成苗情況試驗(yàn)批次6-BA濃檀香種胚總萌發(fā)數(shù)平均萌發(fā)總成苗數(shù)平均成苗率度(mg/L)接種數(shù)量(粒)率a)(顆)(%)(粒)11.0995353.53131.321.5904145.52829.532.0954244.22425.2實(shí)施例4，種子用不同消毒方法的育苗試驗(yàn)比較材料與方法l.l種子采集同實(shí)施例l培養(yǎng)基的配制方法同實(shí)施例l1.2種胚離體培養(yǎng)方法同實(shí)施例l。剝?nèi)ビ财さ姆N子胚的分別用下列不同的消毒劑進(jìn)行消毒A次氯酸鈉溶液；B升汞溶液；C高錳酸鉀溶液；種胚消毒后的處理方法及培養(yǎng)條件同實(shí)施例l。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1.一種用檀香樹(shù)種子胚離體快速育苗的方法，其特征在于取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25±2℃，無(wú)菌黑暗培養(yǎng)10天，第11天增加光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對(duì)濕度75±5％、光照強(qiáng)度為1500～2000lx、光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，所說(shuō)的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加赤霉素2～6mg或6-芐基氨基嘌呤1.0～2.0mg。2.根據(jù)權(quán)利要求1所說(shuō)的用檀香樹(shù)種子胚離體快速育苗的方法，其特征在于在取檀香樹(shù)的種子胚之前將檀香樹(shù)的種子用重量百分濃度為0.1%的HgCl2水溶液浸泡515分鐘，或用重量百分濃度為515%的次氯酸鈉水溶液浸泡520分鐘，或用重量百分濃度為0.51.0%高錳酸鉀溶液浸泡2060分鐘，浸泡后取出種子用無(wú)菌水沖洗，去除水分后備用。全文摘要用檀香樹(shù)種子胚離體快速育苗的方法，涉及植物再生的方法，具體是用檀香樹(shù)種子胚離體培養(yǎng)快速育苗的方法。它是取檀香種胚置于人工培養(yǎng)基上，在25±2℃，無(wú)菌黑暗培養(yǎng)10天，第11天增加光照16小時(shí)，黑暗8小時(shí)，光照強(qiáng)度為2000lx，培養(yǎng)10天，再將萌發(fā)的苗移栽至沙土，在溫度26±2℃、相對(duì)濕度75±5％、光照強(qiáng)度為1500～2000lx、光照12小時(shí)條件下培養(yǎng)30天以上即成種苗，所說(shuō)的人工培養(yǎng)基為1L的MS培養(yǎng)基中添加2～6mg的赤霉素或1L的MS培養(yǎng)基中添加2.0mg6-芐基氨基嘌呤。本發(fā)明的有益效果縮短了育苗時(shí)間；成苗率高，成苗率可達(dá)87％；種苗發(fā)芽整齊，便于大規(guī)模生產(chǎn)操作；成本低。文檔編號(hào)A01C1/00GK101595824SQ200910040708公開(kāi)日2009年12月9日申請(qǐng)日期2009年7月1日優(yōu)先權(quán)日2009年7月1日發(fā)明者振嚴(yán),曾慶錢(qián),莫小路,蔡岳文,亮袁,邱蔚芬申請(qǐng)人:廣東省中藥研究所