1.一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:具體步驟如下:
(1)花托外植體預處理:
選取直徑1~2cm的花蕾,在4℃環境中冷藏3~5天后,將花蕾取出自然恢復至室溫,剝去苞片和小花,用純凈水沖洗,先在0.05%的升汞水溶液中消毒5~8min,再用70%的酒精消毒20~40s,之后用無菌水沖洗3次,即得到非洲菊花托外植體,以上涉及的百分比均為體積百分比;
(2)外植體接種及誘導培養:
將非洲菊花托外植體移入到滅菌后的第一培養基中,將溫度設定為23±1℃,以藍光燈為光源,光照強度控制為400~800Lx,光周期控制為光14h/暗10h,10天左右誘導出愈傷組織;
(3)轉移誘導培養:
將步驟(2)得到的愈傷組織轉移到第二培養基,溫度為27±1℃,以熒光燈為光源,光照強度控制為1800~2500Lx,光周期控制為光14h/暗10h,14天愈傷組織誘導出嫩芽;
(4)種質離體保存:
將嫩芽從非洲菊花托外植體上完整地切下,轉移到第三培養基內慢速生長保存,保存環境為:溫度為4±1℃,以熒光燈為光源,光照強度控制為300~500Lx,光周期控制為光8h/暗16h;
(5)恢復培養:
將步驟(4)的嫩芽轉移到第四培養基內,溫度為27±1℃,以熒光燈為光源,光照強度控制為1800~2500Lx,光周期控制為光14h/暗10h,培養至形成非洲菊幼苗;
(6)幼苗的馴化與煉苗:
將非洲菊幼苗移栽到煉苗基質中,并逐步轉移到外部環境中,在幼苗適應外部環境正常生長后,再移栽至普通土壤中正常培養。
2.根據權利要求1所述的非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:步驟(2)所述第一培養基的組成成分為:KNO3 800~1300mg/L,2-氨基-5-羧基戊酰胺800~1200mg/L,KH2PO4300~450mg/L,CaCl2·2H2O 320~350mg/L,MgSO4·7H2O 180~240mg/L,EDTA 120~180mg/L,FeSO4·7H2O 30~50mg/L,MnSO4·4H2O 50~80mg/L,ZnSO4·7H2O 15~30mg/L,H3BO3 8~10mg/L,KI 5~10mg/L,Na2MoO4·2H2O 1~5mg/L,CoCl2·6H2O 0.2~0.5mg/L,4-碘苯氧乙酸0.15~0.20mg/L,肌醇30~80mg/L,甘氨酸0.5~1.0mg/L,維生素B1 0.5~0.75mg/L,維生素B6 1.0~1.5mg/L,煙酸1.0~1.5mg/L,蔗糖30~50g/L,瓊脂10~15g/L,激動素KT 0.5~1.0mg/L,萘乙酸NAA0.3~0.4mg/L,山梨醇50~70g/L,生物素0.15~0.20mg/L,鹽酸吡哆醇0.5~1.0mg/L,鹽酸硫胺素0.5~1.0mg/L,甲基亞硝基脲1.5~2.0mg/L,吲哚丁酸1.5~2.0mg/L,丙氨酸5~10mg/L,葉酸5~10mg/L,調環酸鈣1.5~2.0mg/L,秋水仙堿1.5~2.0mg/L,水解蛋白2.0~2.5g/L。
3.根據權利要求1或2所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:所述第二培養基的組成成分在步驟(2)所述第一培養基基礎上添加了吲哚丁酸0.5~2.0mg/L和2,4-二氯苯氧乙酸丁酯1.5~2.0mg/L;
所述第三培養基的組成成分為:KNO3 800~1300mg/L,2-氨基-5-羧基戊酰胺800~1200mg/L,KH2PO4 300~450mg/L,CaCl2·2H2O 320~350mg/L,MgSO4·7H2O 180~240mg/L,EDTA 120~180mg/L,FeSO4·7H2O 30~50mg/L,MnSO4·4H2O 50~80mg/L,ZnSO4·7H2O 15~30mg/L,H3BO3 8~10mg/L,KI 5~10mg/L,Na2MoO4·2H2O 1~5mg/L,CoCl2·6H2O 0.2~0.5mg/L,4-碘苯氧乙酸0.15~0.20mg/L,蔗糖30~50g/L,瓊脂10~15g/L,山梨醇50~70g/L,二甲基亞砜8~10mg/L、甘油10~15g/L,萘乙酸NAA0.3~0.4mg/L;
所述第四培養基的組成成分在所述第二培養基基礎上添加了6-芐氨基嘌呤1.5~2.0mg/L。
4.根據權利要求1所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:步驟(4)中所述嫩芽保存期限超過12個月,則進行繼代培養1次;超過24個月,則進行繼代培養2次,依次類推。
5.根據權利要求1所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:步驟(6)所述逐步轉移到外部環境中的方法為:將非洲菊幼苗移栽到煉苗基質后,從誘導環境中逐天降低溫度并逐天增加光照強度,至與外部環境相同時,再培養2~3天即可移栽至普通土壤中,轉移過程的周期根據室外環境不同而調節,轉移過程的周期持續10~15天。
6.根據權利要求1所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:步驟(6)所述煉苗基質的組成成分為:珍珠巖、蛭石、鋸末、松樹皮、水苔、花泥、泥炭土以及鈣鎂磷鉀肥。
7.根據權利要求6所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:所述煉苗基質中,珍珠巖、蛭石、鋸末、松樹皮、水苔、花泥、泥炭土、鈣鎂磷鉀肥的質量比為1:0.5~1.5:0.2~0.8:0.2~0.8:0.1~0.5:0.05~0.15:0.05~0.15:0.005~0.015。
8.根據權利要求7所述的一種非洲菊種質資源的保存方法,其特征在于:所述煉苗基質中,珍珠巖、蛭石、鋸末、松樹皮、水苔、花泥、泥炭土、鈣鎂磷鉀肥的質量比為1:1:0.5:0.5:0.3:0.1:0.1:0.01。