1.黃精葉鉤吻的組培快速繁殖方法,其特征是包括以下步驟:
1)、取材:
選用黃精葉鉤吻的根狀莖的不定芽作為外植體;
2)、不定芽的消毒:
將步驟1)所得的根狀莖上的不定芽充分洗滌,然后在超凈臺上操作,先用75%酒精浸泡處理20~30sec,無菌水沖洗后,用含0.1%升汞滅菌8~10min,無菌水沖洗3~5次;
3)、不定芽的啟動培養:
將消毒后的不定芽剝離外圍的葉片后接種到啟動培養基上,進行不定芽生長及叢生芽的誘導;
所述啟動培養基為MS+BA0.6~3mg/L+NAA0~0.2mg/L+蔗糖20~30g/l+瓊脂5~8g/l,pH為5.6~5.8;
誘導培養條件為:16小時光照,光照強度30~45μmolm-2s-1,溫度為25±1℃;8小時暗培養,溫度為21±1℃;上述光照和暗培養交替進行;
當啟動培養基上的不定芽的基部出現至少3個叢生芽時,結束啟動培養;
4)、不定芽的快速擴增:
將步驟3)所得的叢生芽分割成含1新芽的芽叢后轉接于增殖培養基上進行培養,增殖培養基為MS+BA 0.6~3mg/L+NAA 0.2~0.5mg/L+KT 0~1.0mg/L+2,4-D 0~0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8;
培養條件為:16小時光照,光照強度30~45μmolm-2s-1,溫度為25±1℃;8小時暗培養,溫度為21±1℃;上述光照和暗培養交替進行;
待增殖培養基上的新芽至少長出3個叢生芽時,結束此步驟的培養;
5)、不定芽的伸長及生根培養:
將步驟4)所得的叢生芽切割成含2~3株為一叢的不定芽叢轉移到生根/伸長培養基上進行培養,生根/伸長培養基為MS+BA0.6mg/L+NAA0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8;
培養條件為:16小時光照,光照強度30~45μmoLm-2s-1,溫度為25±1℃;8小時暗培養,溫度為20±1℃;上述光照和暗培養交替進行;
當不定芽叢長到4.0~6.0cm高、且基部有至少5條根時,結束此步驟的培養;
6)、將步驟5)所得的已生根的植株取出,得可出瓶種植的種苗。
2.根據權利要求1所述的黃精葉鉤吻的組培快速繁殖方法,其特征是:
以步驟4)所得的叢生芽替代步驟3)所得的叢生芽,重復進行步驟4)的不定芽的快速擴增;待增殖培養基上的新芽長出至少3個叢生芽時,將其進行分割。
3.根據權利要求1或2所述的黃精葉鉤吻的組培快速繁殖方法,其特征是:
所述步驟5)為:
將不定芽叢轉移到生根/伸長培養基上,經過28~35天的培養,不定芽既能伸長生長,同時在植株的基部產生根,7~14天可誘導形成根,再培養后形成發達的根系。
4.根據權利要求1或2所述的黃精葉鉤吻的組培快速繁殖方法,其特征是:
將步驟6)所得的裝有生根幼苗的培養容器置于自然溫度、光照的環境下鍛煉5~7天,然后打開瓶蓋,放置1~2天后,將植株基部的生根/伸長培養基洗凈,將苗移栽到河沙:泥炭土為1:1的混合基質培養20~35天,開始的10~14天溫度為23~25℃,相對濕度為70~80%。
5.根據權利要求1或2所述的黃精葉鉤吻的組培快速繁殖方法,其特征是:
啟動培養基為:MS+BA 2mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8;
增殖培養基為以下任意一種:
MS+BA3mg/L+NAA0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8;
MS+BA2mg/L+NAA 0.2mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8;
MS+BA2mg/L+KT 1mg/L+NAA 0.2mg/L+2,4-D 0.5mg/L+0.8g/L PVP+蔗糖20~30g/L+瓊脂5~8g/L,pH為5.6~5.8。