本發明涉及植物細胞培養
技術領域：
，尤其是涉及一種沙米愈傷組織及其誘導增殖方法。
背景技術：
：沙米，又稱沙蓬、登相子，是藜科一年生草本植物，廣泛分布于我國西北、華北和東北各省區的沙漠地區，以及河南、河北、山西和西藏的部分地區，蒙古、前蘇聯西伯利亞和中亞地區也有分布。沙米具有耐寒、耐寒、耐貧瘠、耐風蝕沙埋、喜沙質土壤的基本特性。常見于流動沙丘或者半流動沙丘及河岸沙堤，為我國北部常見的沙生植物，是固定流動沙丘的先鋒鎮植物。沙米能夠起到防風固沙的作用；其種子含豐富的營養成分，是很好的功能食物；其植株也可作為牲畜飼料。因此，對于沙米的研究，具有重要的意義。已有特定結構與功能的植物組織，在一定條件下，其細胞被誘導改變原來的發育途徑，逐步逆轉其原有的分化狀態，轉變為具有分生能力的胚性細胞，這個過程稱為脫分化。來自于植物各種器宮的外植體在離體培養條件下，細胞經脫分化等一系列過程，改變了它們原有的特性而轉變形成一種能迅速增殖的無特定結構和功能的細胞團，即愈傷組織。理論上講，植物各器官和組織均有誘導產生愈傷組織的潛在可能性。但是在實踐中，愈傷組織的誘導受外植體種類、培養基、激素、培養條件等多種因素的影響，能否成功地誘導出愈傷組織是研究者們面臨的一個重要問題。對于相關研究人員來說，不能成功地誘導出愈傷組織，就無法開展后續的針對植物細胞生理、代謝等相關研究工作。因此，成功誘導出愈傷組織是研究的基礎。然而，目前針對沙米，仍然沒有能夠高效誘導改植物愈傷組織的方法，因此，提出一種沙米愈傷組織的誘導方法，具有重要意義。因此，特提出本發明。技術實現要素：本發明的目的在于提供一種沙米愈傷組織的誘導增殖方法，以解決現有技術中尚未存在能夠有效誘導沙米愈傷組織的方法的問題。本發明提供的一種沙米愈傷組織的誘導增殖方法，包括如下步驟：(1)剪取沙米無菌實生苗，接種于誘導培養基中進行沙米愈傷組織的誘導培養，所述誘導培養基為：MS培養基，補充0.2～0.5mg/L6-BA，2.0～4.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖，pH值為5.8～6.0；(2)取步驟(1)中的所述愈傷組織，接種于增殖培養基中進行沙米愈傷組織的增殖培養，所述增殖培養基為：MS培養基，補充0.1mg/L6-BA，1.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖。進一步的，步驟(1)中，所述沙米無菌實生苗的獲取方法為：將沙米種子用次氯酸鈉溶液漂洗，用水沖洗，然后接種于1/2的MS培養基上進行育苗培養。進一步的，步驟(1)中，所述育苗培養溫度為20～25℃，所述育苗培養時間為1～2周。進一步的，步驟(1)中，所述次氯酸鈉溶液的濃度為1～5％，所述漂洗時間為10～15min，所述用水清洗的時間為1～2h。進一步的，所述沙米無菌實生苗的苗齡為10天。進一步的，步驟(1)中，所述誘導培養基為：MS培養基，補充0.2mg/L6-BA，4.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖，pH值為5.8～6.0。進一步的，步驟(1)中，所述剪取沙米無菌實生苗，具體為剪取沙米無菌實生苗的莖或者葉。進一步的，步驟(1)中，所述誘導培養的時間為20～40天，優選30天。進一步的，步驟(2)中，所述增殖培養的時間為20～40天，優選30天。另外，本發明的另一目的在于提供一種沙米愈傷組織，以彌補現有技術中的不足。本發明提供了一種沙米愈傷組織，所述沙米愈傷組織按照所述沙米愈傷組織的誘導增殖方法獲得。本發明提供的沙米愈傷組織的誘導增殖方法，經過誘導培養和增殖培養步驟，通過對培養基中不同組分合理的選取、科學的配比，能夠以沙米的根、莖、葉等作為外植體，成功誘導出愈傷組織，且具有較高的誘導率。另外，本發明還提供了一種按照所述誘導增殖方法獲得的沙米愈傷組織，彌補了現有技術中尚未獲得穩定的沙米愈傷組織的不足。附圖說明為了更清楚地說明本發明具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。圖1為本發明實施例1愈傷組織誘導結果；圖2為本發明實施例1愈傷組織增殖結果。具體實施方式下面將結合附圖對本發明的技術方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例是本發明一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本發明中的實施例，本領域普通技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發明保護的范圍。本發明提供了一種沙米愈傷組織的誘導增殖方法，包括如下步驟：(1)剪取沙米無菌實生苗，接種于誘導培養基中進行沙米愈傷組織的誘導培養，誘導培養基為：MS培養基，補充0.2～0.5mg/L6-BA，2.0～4.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.8～6.0；(2)取步驟(1)中的愈傷組織，接種于增殖培養基中進行沙米愈傷組織的增殖培養，增殖培養基為：MS培養基，補充0.1mg/L6-BA，1.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖。在一個優選的實施方式中，步驟(1)中，誘導培養基中6-BA的濃度為0.2mg/L、0.3mg/L、0.4mg/L或者0.5mg/L。在另一個優選的實施方式中，步驟(1)中，誘導培養基中2,4-D的濃度為2mg/L、2.5mg/L、3mg/L、3.5mg/L或者4mg/L。在另一個優選的實施方式中，步驟(1)中，誘導培養基的pH值為5.8、5.9或者6.0。在另一個優選的實施方式中，步驟(1)中，沙米無菌實生苗的獲取方法為：將沙米種子用次氯酸鈉溶液漂洗，用水沖洗，然后接種于1/2的MS培養基上進行育苗培養。在另一個優選的實施方式中，次氯酸鈉溶液的濃度為1％、2％、3％、4％或者5％，次氯酸鈉溶液漂洗時間為10min、11min、12min、13min、14min或者15min。在另一個優選的實施方式中，用水沖洗具體為用流動的水沖洗，并且最后用無菌水沖洗。在另一個優選的實施方式中，育苗培養的溫度為20℃、21℃、22℃、23℃、24℃或者25℃。育苗時間為7、8、9、10、11、12、13或者14天。在另一個優選的實施方式中，步驟(1)中，剪取沙米無菌實生苗，具體為剪取沙米無菌實生苗的根、莖或者葉。在另一個優選的實施方式中，步驟(1)中，誘導培養的時間為20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或者40天。在另一個優選的實施方式中，步驟(2)中，增殖培養的時間為20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或者40天。其中，6-BA為6-芐氨基腺嘌呤，是一種細胞分裂素；2,4-D為2,4-二氯苯氧乙酸，是一種除草劑；MS培養基的組分及濃度如表1所示，1/2MS培養基為MS培養基稀釋一倍：表1MS培養基配方為了有助于更清楚的理解本發明，現結合具體實施例詳細介紹如下：如未明確指出，實施例中所用到的方法為常規方法，所用到的試劑購自于市場。實施例1(1)選取健康的沙米種子，將沙米種子置于三角瓶內，加入濃度為3％的次氯酸鈉溶液，采用透氣瓶塞封住瓶口，置于搖床上振蕩漂洗15min后，置于流水下沖洗1h，然后用無菌水清洗2～3次，將種子接種于1/2MS培養基上進行培養，12天后獲取沙米無菌實生苗。培養間溫度25℃，普通熒光燈光照強度。剪取苗齡為10天的沙米無菌實生苗的莖，接種于誘導培養基中進行沙米愈傷組織的誘導培養，其中誘導培養基為：MS培養基，補充0.2mg/L6-BA，2.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。誘導時間為30天，誘導結果如圖1所示，由圖1可以看出，該方法成功誘導出了愈傷組織。(2)取步驟(1)中誘導形成的愈傷組織，切成小塊后轉接于增殖培養基中進行沙米愈傷組織的增殖培養，其中增殖培養基為：MS培養基，補充0.1mg/L6-BA，1.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖。增值時間為30天。愈傷組織增殖結果如圖2所示。實施例2實施例2是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。實施例2與實施例1的不同之處在于，實施例2中的誘導培養基為：MS培養基，補充0.3mg/L6-BA，3.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。實施例3實施例3是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。實施例3與實施例1的不同之處在于，實施例3中的誘導培養基為：MS培養基，補充0.5mg/L6-BA，4.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。實施例4實施例4是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。實施例4與實施例1的不同之處在于，實施例4中的外植體為苗齡為10天的沙米無菌實生苗的葉。其余步驟與實施例1相同。實施例5實施例5是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。實施例5與實施例1的不同之處在于，實施例5中的外植體為苗齡為10天的沙米無菌實生苗的根。其余步驟與實施例1相同。為了有助于更好的體現本發明的有益效果，現結合對比例解釋如下：對比例1對比例1是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。對比例1與實施例1的不同之處在于，對比例1中的誘導培養基為：MS培養基，補充0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。對比例2對比例2是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。對比例2與實施例1的不同之處在于，對比例2中的誘導培養基為：MS培養基，補充2.0mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。對比例3對比例3是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。對比例3與實施例1的不同之處在于，對比例3中的誘導培養基為：MS培養基，補充0.2mg/L6-BA，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。對比例4對比例4是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。對比例4與實施例1的不同之處在于，對比例4中的誘導培養基為：MS培養基，補充0.05mg/L6-BA，1mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。對比例5對比例5是在實施例1基礎上的改變，實施例1中提到的內容，在本實施例中不再詳述。對比例5與實施例1的不同之處在于，對比例5中的誘導培養基為：MS培養基，補充1mg/L6-BA，10mg/L2,4-D，0.70％瓊脂以及2.0％蔗糖組成，pH值為5.9。其余步驟與實施例1相同。實施例1～5及對比例1～5的愈傷組織誘導率結果如表2所示，其中誘導率表示成功誘導出愈傷組織的樣本量與總樣本量的比值。表2實施例1～5及對比例1～5的誘導率6-BA含量(mg/L)2,4-D含量(mg/L)外植體誘導率(％)實施例10.22莖100實施例20.54莖100實施例30.33莖100實施例40.22葉70實施例50.22根50對比例100莖0對比例202莖0對比例30.20莖0對比例40.051莖20對比例5110莖10發明人，通過科學、合理的篩選，經過大量實驗的驗證，確定了本發明中誘導培養基和增殖培養基的組分和配比。由表2可知，本發明提供的沙米愈傷組織的誘導增殖方法能夠有效的誘導出沙米愈傷組織，具有較高的誘導率。最后應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述各實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的范圍。當前第1頁1 2 3