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快速誘導繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法與流程

文檔序號:12299450閱讀:來源:國知局

技術特征:

1.一種快速誘導繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于步驟如下:

(1)無毒條件下無菌外植體的獲得:將偏穗鵝觀草種子置于50%~55%的濃硫酸中,在條件為28℃~30℃,210r/min~220r/min的搖床里振蕩0.9~1.2小時做脫皮催芽處理,之后用蒸餾水洗去濃硫酸并置于超凈工作臺,首先用無菌水清洗種子,然后用75%的酒精振蕩沖洗2.5~3.5min,緊接著用無菌水將種子表面的酒精清洗干凈,再用20%~25%的次氯酸鈉振蕩沖洗14~16min,最后用無菌水將種子表面的次氯酸鈉清洗干凈,獲得偏穗鵝觀草無菌種子,將滅菌后的種子放置于培養無菌實生苗的培養基中培養10-15d,獲得無菌實生苗的下胚軸幼嫩部分作為誘導愈傷的外植體;

(2)愈傷組織誘導:將步驟(1)獲得的無菌實生苗下胚軸橫切為約0.3-0.5cm長的小段作為誘導愈傷的材料,接種于誘導愈傷組織培養基上培養25-30d,誘導愈傷發生;

(3)愈傷組織增殖培養:將步驟(2)獲得的顏色黃綠,質地疏松的愈傷組織切割成直徑為0.1-0.2cm的小塊,然后轉接到誘導愈傷組織增殖培養基中,培養25-30d后繼續轉接到新的誘導愈傷組織增殖培養基中進行繼代增殖,最終獲得顏色黃綠,結構致密的優良愈傷組織材料。

2.如權利要求1所述的快速誘導繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于:步驟(1)中所述的培養無菌實生苗的培養基為MS營養液、5-7g/L瓊脂、20-30g/L蔗糖、0.05-0.1g肌醇組成,PH=5.7-5.8;步驟(2)中所述的誘導愈傷組織培養基、步驟(3)中所述的誘導愈傷組織增殖培養基均為MS誘導培養基,其配比為:3.0-5.0mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸,5-7g/L瓊脂,20-30g/L蔗糖,0.05-0.1g肌醇組成,PH=5.7-5.8。

3.如權利要求1所述的快速誘導繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于:所述的步驟(1)中偏穗鵝觀草發芽階段需暗培養,發芽以后階段及步驟(2)、(3)的下胚軸愈傷誘導和愈傷增殖均在連續光照培養,光照強度在1500-2000lx之間,濕度60-70%的環境下進行。

4.如權利要求1所述的快速誘導繁殖偏穗鵝觀草下胚軸愈傷組織的方法,其特征在于還包括有步驟(3)所述的產生的愈傷組織材料,通過稱量法測定愈傷組織的生長量,其具體步驟為:

1)將盛有MS誘導培養基的錐形瓶放在天平上進行稱量,得到數值a;

2)將1)中稱量過的錐形瓶放入超凈工作臺中進行愈傷組織的轉接,轉接結束后對錐形瓶進行稱量,得到數值b;

3)將轉接后的愈傷組織培養30天后再次對錐形瓶進行稱量,得到數值c;

4)愈傷組織的生長量為:c-(b-a)。

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