本發(fā)明涉及醫(yī)藥生物
技術(shù)領(lǐng)域：
，尤其是涉及一種鐵皮石斛的快速繁技術(shù)。
背景技術(shù)：
：鐵皮石斛為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（DendrobiumSw）植物，全世界蘭科約有500屬，15000多種；石斛屬是蘭科中最大的屬之一。中國蘭科約有150屬，1000種，莖圓柱形，高15～50cm，粗4～8mm。葉鞘帶肉質(zhì)，矩圓狀披針形，長(zhǎng)3～6.5cm，寬0.8～2cm，頂端略鉤。總狀花序生于具葉或無葉莖的中部，有花2～4朵；花淡黃綠色，稍有香氣；萼片長(zhǎng)1.2～2cm；花瓣短于萼片，唇瓣卵狀披針形，長(zhǎng)1.3～1.6cm寬7～9mm，先端漸尖或短漸尖，近上部中間有圓形紫色斑塊，近下部中間有黃色胼胝體。花期4～6月。表面黃色，基部稍有光澤，具縱紋，節(jié)上有花序柄痕及殘存葉鞘；葉鞘短于節(jié)間，常與節(jié)間上部留下環(huán)狀間隙，褐色，鞘口張開。質(zhì)硬而脆，易折斷，斷面纖維狀。鮮品莖直徑3～6mm，表面黃綠色或黑綠色，葉鞘灰白色。氣微，嚼之有粘性。主要分布于秦嶺和長(zhǎng)江流域以南省區(qū)；石斛屬植物大多數(shù)種類都集中分布在北緯15°30′～25°12′之間，且越向北延而種類則逐漸減少。中國鐵皮石斛主要分布于浙江、廣西、湖南、云南、貴州等地。它是一種名貴的中藥材，是多年生草本植物，莖叢生，圓柱型，高10--30厘米，粗3—8毫米，在民間，被譽(yù)為“救命仙草”藥界的“大熊貓”。由于新鮮鐵皮石斛不宜保存，鮮藥由于其汁多鮮嫩，容易腐爛變質(zhì)，特別是霉雨季節(jié)，更不易保存，因此在大多數(shù)中藥店和醫(yī)院中藥房中很少配有鮮類藥材，，鐵皮石斛加工后干品稱鐵皮楓斗，其藥效成分主要是石斛多糖、石斛堿和總氨基酸等。能提高人體免疫能力，增強(qiáng)記憶力，補(bǔ)五臟虛勞，抗衰老，抑制腫瘤，改善糖尿病癥狀，抗缺氧，對(duì)放化療以及夜生活、煙酒過度者有顯著效果。鐵皮石斛種子無胚乳，需與某些真菌共生才能萌發(fā)，自然繁殖率低，雖分布廣，但生境窄，加上長(zhǎng)年無節(jié)制采掘，自然資源日漸枯竭，產(chǎn)量不能滿足目前市場(chǎng)需求。本發(fā)明的首要目的在于提供一種胚萌發(fā)率高、成活率好的鐵皮石斛的快速繁育技術(shù)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：一種鐵皮石斛的快速繁育技術(shù)方法，包括以下步驟：1.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡10-60，再用0.1%升汞消毒5-12min，最后用無菌水沖洗1-5次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上。培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉1-5g?Ｌ－１、蔗糖10-50g·Ｌ－１，瓊脂5-15g·Ｌ－１，PH4.5-5.5，蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).1.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)；3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70～90%，作為優(yōu)選，上述步驟1中，種子用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最后用無菌水沖洗3-4次。作為優(yōu)選，上述步驟1中，播種量為種子覆蓋培養(yǎng)基表面50％.作為優(yōu)選，上述步驟1中，培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉1-5g?Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，瓊脂8-12g·Ｌ－１，馬鈴薯提取液100-300mg·Ｌ－１,PH4.8-5.2。作為優(yōu)選，上述培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基、1/2MS培養(yǎng)基、B5培養(yǎng)基、LS培養(yǎng)基、N6培養(yǎng)基。作為優(yōu)選，上述步驟2中，每瓶接8株鐵皮石斛幼芽，高0.3-0.6cm作為優(yōu)選，上述培養(yǎng)條件為溫度26-28℃，光照強(qiáng)度1600-2000Ｌx。作為優(yōu)選，上述步驟2中，鐵皮石斛幼苗為具有2-5條根，高2-3cm。作為優(yōu)選，上述步驟3中，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:1-1:3。本發(fā)明具有以下有益效果：1.本發(fā)明在種子誘導(dǎo)培養(yǎng)，壯苗及生根培養(yǎng)，組培苗移栽過程中不會(huì)對(duì)周圍環(huán)境產(chǎn)生影響，是一種環(huán)境友好型的快速繁育技術(shù)。2.本發(fā)明克服了野生鐵皮石斛植株生長(zhǎng)的質(zhì)量低、增殖慢及長(zhǎng)勢(shì)不一致等的問題，從而提高培養(yǎng)效率及減少生產(chǎn)成本。本發(fā)明具有技術(shù)工藝易操作、流程少、繁育快速等優(yōu)點(diǎn)。具體實(shí)施方式下面通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的具體說明。應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明的實(shí)施并不局限于下面的實(shí)施例，對(duì)本發(fā)明所做的任何形式上的變通或改變都將落入本發(fā)明保護(hù)范圍。實(shí)施例11.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡20-50s，再用0.1%升汞消毒6-10min，最后用無菌水沖洗3-4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,以MS作為基本培養(yǎng)基,培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉1-5g?Ｌ－１、蔗糖20-40g·Ｌ－１，瓊脂8-12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調(diào)pH4.8-5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).2.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),溫度26-28℃，光照強(qiáng)度1600-2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:1-1:3，移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70～90%。實(shí)施例21.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最后用無菌水沖洗3次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,以MS作為基本培養(yǎng)基,培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉4g?Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，瓊脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調(diào)pH4.8,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).2.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),溫度28℃，光照強(qiáng)度2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:1，移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70-90%。實(shí)施例31.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最后用無菌水沖洗4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,以MS作為基本培養(yǎng)基,培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉3g?Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，瓊脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調(diào)pH5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).油酰谷氨酸二鈉和蔗糖配伍能提高鐵皮石斛幼芽的成活率。2.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),溫度27℃，光照強(qiáng)度1800Ｌｘ。組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:2移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70～90%。實(shí)施例41.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡30s，再用0.1%升汞消毒7min，最后用無菌水沖洗3次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,以MS作為基本培養(yǎng)基,培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉1g?Ｌ－１、蔗糖30g·Ｌ－１，瓊脂8g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調(diào)pH4.8,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).2.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),溫度28℃，光照強(qiáng)度2000Ｌｘ。3.組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:1移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70～90%，培養(yǎng)６個(gè)月后調(diào)查成活率、平均新芽數(shù)及大于３ｃｍ的平均新芽數(shù)。項(xiàng)目成活率平均新發(fā)芽數(shù)大于３ｃｍ的平均新芽數(shù)結(jié)果100%1.741.11由上表可知，該方案下，培養(yǎng)６個(gè)月的鐵皮石斛成活率為100%，平均新發(fā)芽數(shù)為1.74，大于3cm的平均發(fā)芽數(shù)為1.11。實(shí)施例51.種子的誘導(dǎo)培養(yǎng)：去掉朔果干枯部分，用自來水沖洗干凈后，用70%酒精浸泡40s，再用0.1%升汞消毒5min，最后用無菌水沖洗4次。在無菌條件下切開朔果，把種子播種于誘導(dǎo)培養(yǎng)基上,以MS作為基本培養(yǎng)基,培養(yǎng)基加入椰油酰谷氨酸二鈉1g?Ｌ－１、蔗糖20g·Ｌ－１，瓊脂12g·Ｌ－１，以1.5mol/LNaOH或0.2mol/LHCl調(diào)pH5.2,在121℃高壓滅菌鍋滅菌25min；蓋上瓶蓋,置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng).2.壯苗及生根培養(yǎng):將上述獲得的鐵皮石斛幼芽從組培瓶中取出，在無菌條件下移入增殖和壯苗培養(yǎng)基中，蓋上瓶蓋，置于培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),溫度27℃，光照強(qiáng)度1800Ｌx。組培苗移栽:將鐵皮石斛幼苗經(jīng)過常規(guī)煉苗處理后移栽于溫室大棚，溫室大棚以木屑、泥炭土作為基質(zhì)，且木屑：泥炭土為1:2移栽后按常規(guī)管理，濕度保持在70～90%。培養(yǎng)６個(gè)月后調(diào)查成活率、平均新芽數(shù)及大于３ｃｍ的平均新芽數(shù)。項(xiàng)目成活率平均新發(fā)芽數(shù)大于３ｃｍ的平均新芽數(shù)結(jié)果100%2.201.31由上表可知，該方案下，培養(yǎng)６個(gè)月的鐵皮石斛成活率為100%，平均新發(fā)芽數(shù)為2.20，大于3cm的平均發(fā)芽數(shù)為1.31。當(dāng)然，上述說明并非對(duì)本發(fā)明的限制，本發(fā)明也并不限于上述舉例。本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員在本發(fā)明的實(shí)質(zhì)范圍內(nèi)，作出的變化、改型、添加或替換，也應(yīng)屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3