專利名稱：治療絕經后骨質疏松癥的中藥復方提取物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥復方提取物，具體是涉及一種采用二氧化碳超臨界萃取技術和大孔吸附樹脂富集技術，以白花敗醬草、白鮮皮、仙鶴草、柴胡、蛇床子、紅景天、決明、柏子仁、金蕎麥、澤瀉和甘草為原料制得的提取物，該提取物具有明顯的治療絕經后骨質疏松癥的作用。本發明還涉及了該提取物在制備治療絕經后骨質疏松癥藥物制劑和保健食品中的應用。
背景技術：
絕經后骨質疏松癥是指絕經后婦女由于卵巢功能衰退、雌激素水平下降，發生的以低骨量及骨組織微結構退行性病變為特征的一種全身性骨骼疾病，屬于原發性骨質疏松癥，臨床主要表現為疼痛、身材變矮及骨折。發病率可高達25% 50%，并隨著年齡增大發病率增高，50歲以上女性發生髖關節、脊椎、四肢關節等部位骨折的比例占40%，絕經20年以上者可達53. 62% 57. 89%。由于絕經后女性骨量的急劇變化，特別是脊椎和髖關節骨折常會導致癱瘓，絕經后骨質疏松癥及其骨折帶來的高致殘率和致死率給社會帶來沉重的經濟和人力負擔。隨著老齡化社會的到來，絕經后骨質疏松癥的防治工作越發受到重視。絕經后骨質疏松癥發病與雌激素水平降低有關，因此，雌激素是當前防治絕經后骨質疏松的首選藥物，此療法稱為激素替代療法。但是，由于雌激素的長期單一使用增加卵巢癌、乳腺癌、子宮內膜癌的患病率及其它不良反應，從而限制了其應用。中藥治療骨質疏松癥有悠久的歷史，且不良反應輕，尋找能夠有效治療絕經后骨質疏松癥的中藥組方，并開展現代新藥研發，對拓寬絕經后骨質疏松癥的防治手段意義重大。

發明內容
本發明的一個目的是提供一種具有治療絕經后骨質疏松癥作用的中藥復方提取物。本發明另一個目的是提出該中藥復方提取物在制備治療絕經后骨質疏松癥的藥物制劑和保健食品中的應用。為了達到上述目的，本發明采取了以下技術方案組方藥材及比例為以重量份數計，白花敗醬草5份、白鮮皮3份、仙鶴草3份、柴胡3份、蛇床子3份、紅景天3份、決明子3份、柏子仁3份、金蕎麥3份、澤瀉2份、甘草1 份。以重量份數計，按照白花敗醬草5份、白鮮皮3份、仙鶴草3份、柴胡3份、蛇床子3 份、紅景天3份、決明子3份、柏子仁3份、金蕎麥3份、澤瀉2份、甘草1份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉裝入二氧化碳超臨界萃取裝置中，加入夾帶劑無水乙醇， 用量為0. 5ml/g藥粉，設定萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C，萃取時間為池，得棕黃色粘稠油狀物。將上一步二氧化碳超臨界萃取后的藥渣，加入10倍量70%乙醇浸泡12小時，加熱回流提取2小時，過濾，向藥渣中再加入5倍量70%乙醇加熱回流提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101 型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10個柱體積的20%乙醇和10個柱體積的50%乙醇進行洗脫， 收集50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發明的中藥復方提取物。作為對上述技術方案的改進和補充1、組方中藥材的相對量可以按照白花敗醬草4-6份、白鮮皮2-4份、仙鶴草2-4 份、柴胡2-4份、蛇床子2-4份、紅景天2-4份、決明子2-4份、柏子仁2_4份、金蕎麥2_4份、 澤瀉1-3份、甘草1-2份的比例進行調整。2、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度可以設定為30-60°C。3、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取壓力可以設定為20_60MPa。4、在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取時間可以設定為Ih或以上。5、在進行二氧化碳超臨界萃取時，夾帶劑可以為乙醇或濃度為95%以上的乙醇， 并且用量可以設定為0. 1-lml/g藥粉。6、在用旋轉蒸發儀對二氧化碳超臨界萃取液進行減壓濃縮回收乙醇時，溫度可以設定為45°C或以下。7、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取溶劑可以是30% -100%乙醇。8、在對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取方式可以是加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。9、在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂可以是D-101型或者 AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。10、在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑可以是水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。通過上述技術方案制備得到的提取物，具有明顯的治療絕經后骨質疏松癥作用， 可以用于制備治療絕經后骨質疏松癥的藥物制劑和保健食品。當將上述提取物混合進具有治療絕經后骨質疏松癥作用的藥物制劑和保健食品時，除這些提取物外，在不防礙本發明效果的范圍內，可以根據需要適當混合用于通常的藥物制劑和保健食品的其他成分中，例如交聯聚乙烯吡咯烷酮、羧甲淀粉鈉、微晶纖維素、乳糖、阿司巴坦、硬脂酸鎂等內加輔料、外加輔料和包衣輔料。其型劑可以是任何一種藥學上所說的劑型，優選丸劑、片劑、膠囊劑或口服液。本發明中藥復方提取物是藥食兼用的純天然的植物提取物，隨后的藥效實驗將證明，本發明中藥復方提取物具有治療絕經后骨質疏松癥的作用。


圖1是正常組大鼠骨組織HE染色后顯微鏡下(X 100)骨形態結構2是模型組大鼠骨組織HE染色后顯微鏡下(X 100)骨形態結構3是TQW組大鼠骨組織HE染色后顯微鏡下(X 100)骨形態結構4是尼爾雌醇組大鼠骨組織HE染色后顯微鏡下(X 100)骨形態結構5是正常組大鼠骨組織低倍電鏡下(X12)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構6是模型組大鼠骨組織低倍電鏡下(X12)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構7是TQW組大鼠骨組織低倍電鏡下(X12)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構8是尼爾雌醇組大鼠骨組織低倍電鏡下(X12)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構
圖
圖9是正常組大鼠骨組織高倍電鏡下(X100)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構10是模型組大鼠骨組織高倍電鏡下(X100)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構11是TQW組大鼠骨組織高倍電鏡下(X100)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構12是尼爾雌醇組大鼠骨組織高倍電鏡下(X100)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結
構圖
圖13是正常組大鼠骨組織高倍電鏡下(X500)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構14是模型組大鼠骨組織高倍電鏡下(X500)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構15是TQW組大鼠骨組織高倍電鏡下(X500)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結構16是尼爾雌醇組大鼠骨組織高倍電鏡下(X500)的皮質骨、松質骨、骨小梁形態結
構圖
圖17是正常組大鼠骨組織I型膠原免疫組化染色后顯微鏡下(X100)骨形態結構18是模型組大鼠骨組織I型膠原免疫組化染色后顯微鏡下(X100)骨形態結構19是TQW組大鼠骨組織I型膠原免疫組化染色后顯微鏡下(X 100)骨形態結構20是尼爾雌醇組大鼠骨組織I型膠原免疫組化染色后顯微鏡下(X100)骨形態結
構圖
具體實施例方式下面結合具體實施例和附圖，進一步闡述本發明。這些實施例應理解為僅用于說明本發明而不用于限制本發明的保護范圍。在閱讀了本發明記載的內容之后，本領域技術人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等效變化和修飾同樣落入本發明權利要求書所限定的范圍。為說明方便，以下將本發明提取物簡稱為TQW。實施例1 (TQW對去卵巢骨質疏松模型大鼠的影響)去卵巢骨質疏松大鼠模型是國際公認模擬婦女絕經后骨質疏松癥的經典動物模型，本實施例用此模型來驗證TQW治療婦女絕經后骨質疏松癥的作用。1材料與方法1. 1 材料清潔級7月齡Wistar大鼠，雌性，體重350士20g，購自黑龍江中醫藥大學GLP中心。TQff混懸液將TQW混懸蒸餾水中，ig劑量為15mg/kg。尼爾雌醇混懸液(Nilestrdiol)尼爾雌醇(購自上海醫藥集團華聯制藥廠，國藥準字H3102164)，混懸蒸餾水中，ig 0. 5mg/kg。1.2 方法1. 2. 1大鼠去卵巢骨質疏松模型的建立3 %戊巴比妥麻醉后，手術摘除雙側卵巢，術后給予青霉素防止感染。
1.2.2動物分組及給藥術后30天，將大鼠按體重隨機分為模型組、TQff組、陽性對照(尼爾雌醇)組，在造模同時預留同批未進行去卵巢手術的大鼠作為正常組，每組12只。分組后開始給藥，正常組每日灌胃蒸餾水5mL/kg體重；模型組每日灌胃蒸餾水 5mL/kg體重；TQW組每日灌胃TQW(15mg/kg體重)混懸液，陽性對照組每日灌胃尼爾雌醇(0. 5mg/kg體重)，以上各組均每日給藥1次，連續給藥M周。2實驗結果2. 1對骨質疏松模型大鼠腰椎、股骨骨密度及骨礦含量的影響結果見表1。給藥M周后，與模型組比較，TQW組和尼爾雌醇組均可增加質疏松模型大鼠的股骨、腰椎的骨密度及骨礦含量(P < 0. 05)。表1 TQW對骨質疏松模型大鼠骨密度及骨礦含量的影響(X±SD)
權利要求
1.一種具有治療絕經后骨質疏松癥作用的中藥復方提取物，其提取方法如下以重量份計，按照白花敗醬草4-6份、白鮮皮2-4份、仙鶴草2-4份、柴胡2-4份、蛇床子2-4份、紅景天2-4份、決明子2-4份、柏子仁2-4份、金蕎麥2_4份、澤瀉1_3份、甘草 1-2份，稱取各藥材適量，混合粉碎，過藥典2號篩，藥粉進行二氧化碳超臨界萃取，以乙醇為夾帶劑，在一定的工藝參數下萃取得棕黃色液體，減壓濃縮回收乙醇，最終得棕黃色粘稠油狀物；再將二氧化碳超臨界萃取后的藥渣，用適當濃度乙醇浸泡后提取，提取液干燥得浸膏，浸膏利用大孔吸附樹脂柱進行富集，在一定的工藝參數下制得棕色粉末；將此粉末與二氧化碳超臨界萃取制得的棕黃色粘稠油狀物混合，即得本發明的中藥復方提取物。
2.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于對白花敗醬草、白鮮皮、仙鶴草、柴胡、蛇床子、紅景天、決明、柏子仁、金蕎麥、澤瀉和甘草藥粉進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為30-60°C，萃取壓力為20-60MPa，萃取時間為Ih或以上，夾帶劑為無水乙醇或濃度為95%以上的乙醇，用量為0. 1-lml/g藥粉，解析壓力為20MI^或以下，解析溫度為 40°C或以下。
3.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取溶劑為30% -100%乙醇，第一次用量為10倍量，浸泡12小時，加熱回流提取或者超聲提取或者滲漉提取2小時，過濾，向藥渣中再加入5倍量30% -100%乙醇， 再提取2小時，過濾，合并濾液，減壓干燥得浸膏。
4.根據權利要求1所述的中藥復方提取物，其特征在于在對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂柱中，上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的不同濃度的乙醇進行洗脫，收集20% -50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
5.根據權利要求2所述的中藥復方提取物，其特征在于在進行二氧化碳超臨界萃取時，萃取溫度為45°C，萃取壓力為40MPa，萃取時間為池，夾帶劑無水乙醇用量為0. 5ml/g藥粉，解析I壓力為lOMPa、溫度為40°C，解析II壓力為4MPa、溫度為25°C。
6.根據權利要求3所述的中藥復方提取物，其特征在于對二氧化碳超臨界萃取后的藥渣進行提取時，提取方式為加熱回流提取、超聲提取或者滲漉提取。
7.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，使用的柱脂為D-101型或者AB-8型，以及其他非極性、弱極性或者中等極性大孔吸附樹脂。
8.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，洗脫溶劑為水或不同濃度的乙醇，依照乙醇濃度由低到高依次洗脫。
9.根據權利要求4所述的中藥復方提取物，其特征在于對乙醇提取浸膏進行大孔吸附樹脂富集時，將浸膏加適量水稀釋后與等體積的D-101型大孔吸附樹脂混合拌勻，上樣于 D-101型大孔吸附樹脂柱中(上樣量以生藥量與樹脂量之比計算為1 2)，靜態吸附30分鐘，然后依次用10個柱體積的水、10個柱體積的20%乙醇和10個柱體積的50%乙醇進行洗脫，收集50%乙醇洗脫液，減壓干燥后粉碎，制得棕色粉末。
10.權利要求1-9中任何一項所述的中藥復方提取物在治療絕經后骨質疏松癥的藥物制劑及保健食品中應用。
全文摘要
本發明涉及一種具有治療絕經后骨質疏松癥作用的中藥復方提取物。本發明中的中藥復方提取物是以白花敗醬草、白鮮皮、仙鶴草、柴胡、蛇床子、紅景天、決明、柏子仁、金蕎麥、澤瀉和甘草等十一種中藥為原料，采用二氧化碳超臨界萃取技術和大孔吸附樹脂富集技術，在一定工藝參數下提取制得的提取物。該提取物具有顯著的治療絕經后骨質疏松癥的作用，該提取物可以直接安全地應用于治療絕經后骨質疏松癥的藥物制劑和保健食品的制備。
文檔編號A23L1/29GK102366493SQ20111029134
公開日2012年3月7日 申請日期2011年9月30日 優先權日2011年9月30日
發明者任燕冬, 劉海洋, 張丹丹, 張寧, 張春蕾, 樸成玉, 王發善 申請人:張寧