專利名稱：一種魚骨小分子多肽螯合鈣及制備方法
技術領域：
本發明屬于營養食品或功能性食品加工技術領域，具體涉及一種魚骨小分子多肽螯合鈣粉，以及它的制備方法。
背景技術：
魚骨中的鈣含量豐富，與人體骨骼鈣的組成相似，是一種優良的天然鈣源。但魚骨中的鈣主要是以羥基磷灰石形式存在，不利于人體吸收。采取生物或化學方法提高魚骨中鈣的溶出率是增加鈣的利用率的常用途徑。目前主要采用酶解或酸處理(醋酸、檸檬酸、蘋果酸、乳酸)等方法制備魚骨活性鈣粉，可以提高鈣的溶出率，有利于人體吸收。蛋白多肽是蛋白質經蛋白酶降解后得到的分子量約為2 IOkD的具有特殊生理活性的生物活性肽。如專利《一種魚骨生物活性多肽鈣粉及制備方法》(CN101731666A)公開了將魚骨蛋白多肽粉和可溶性鈣直接混合得到的魚骨生物活性多肽鈣粉，但并沒有進行螯合，因此，其產品中鈣的吸收效果和應用范圍受到較大的限制。經檢索，沒有發現有關魚骨小分子多肽與魚骨鈣通過螯合作用產生的魚骨小分子多肽螯合鈣粉的報道。

發明內容
本發明目的在于提供一種魚骨小分子多肽螯合鈣粉。本發明另一目的在于提供上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉的制備方法。本發明還一目的在于提供上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉作為食品添加劑或營養食品直接食用的用途。為實現上述目的，本發明的技術方案如下本發明一種魚骨小分子多肽螯合鈣粉，按照如下方法制備(1)將冷凍的魚骨解凍，去除魚骨表面殘留的魚肉、清洗干凈；在壓力為0. 145 0. 165Mpa、溫度為110 120°C條件下蒸煮魚骨15 20min，再用組織搗碎機將魚骨打漿， 經冷卻、浙干，得到魚骨泥；凍結至-5 -10°C保存；(2)按照水與魚骨泥之間質量比為1. 5 2. 5 1的比例，向步驟⑴所得冷凍的魚骨泥中加入水解凍，然后攪拌3 6min，得魚骨漿；按照復合蛋白酶與魚骨漿之間質量比為1 450 500的比例向魚骨漿中加入復合蛋白酶，然后在50 70°C、pH為6. 5 7. 5 條件下進行酶解反應10 30min ；再在90 95°C下保溫3 5min，接著在室溫、4000 6000g條件下離心3 5min，去脂肪，分別取上清液和沉淀物；(3)用分子量為3ku的過濾膜超濾步驟( 所得的上清液2 3次，收集濾液，濃縮，得到魚骨小分子多肽液；(4)將步驟( 所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得魚骨粉；按照魚骨粉與復合酸溶液之間Ig 5 IOmL重量體積比將魚骨粉置于復合酸中進行酸化處理30 60min， 得到魚骨鈣液；所述復合酸溶液的濃度為10 20% ；
(5)將步驟( 所得魚骨小分子多肽液和步驟(4)所得魚骨鈣液混合于生物反應器中攪拌3 5min，然后在40 50°C，pH值為7. 5 8. 5下，于生物反應器中攪拌螯合反應20 40min，干燥，得魚骨小分子多肽螯合鈣粉。上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉步驟(1)中所述的魚骨為鰈魚魚骨。上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉步驟O)中所述的復合蛋白酶由風味蛋白酶和木瓜蛋白酶組成，其中風味蛋白酶和木瓜蛋白酶之間的質量比為1 1。上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉中步驟中所述的復合酸溶液由檸檬酸和乳酸組成，檸檬酸和乳酸之間的體積比為1 1 ；其中所述檸檬酸的濃度為10 20%;所述乳酸的濃度為10 20%。上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉步驟(1)中所述的用組織搗碎機將魚骨打漿時組織搗碎機的轉速為12000rpm。上述魚骨小分子多肽螯合鈣粉的制備方法，包括如下步驟(1)將冷凍的魚骨解凍，去除魚骨表面殘留的魚肉、清洗干凈；在壓力為0. 145 0. 165Mpa、溫度為110 120°C條件下蒸煮魚骨15 20min，再用組織搗碎機將魚骨打漿， 再經冷卻、浙干，得到魚骨泥；凍結至-5 -10°C保存；(2)按照水與魚骨泥之間質量比為1. 5 2. 5 1的比例，向步驟(1)所得冷凍的魚骨泥中加入水解凍，攪拌3 6min，得魚骨漿；按照復合蛋白酶與魚骨漿之間質量比為 1 450 500的比例向魚骨漿中加入復合蛋白酶，然后在50 70°C、pH為6. 5 7. 5條件下進行酶解反應10 30min ；再在90 95°C下保溫3_5min，接著在室溫、4000 6000g 條件下離心3 5min，去脂肪，分別取上清液和沉淀物；(3)用分子量為3ku的過濾膜超濾步驟( 所得的上清液2 3次，收集濾液，濃縮，得到魚骨小分子多肽液；(4)將步驟( 離心所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得魚骨粉；按照魚骨粉與復合酸溶液之間Ig 5 IOmL重量體積比將魚骨粉置于復合酸中進行酸化處理30 60min，得到魚骨鈣液；所述復合酸溶液的濃度為10 20% ；(5)將步驟(3)所得到的魚骨小分子多肽液和步驟⑷所得到的魚骨鈣液混合于生物反應器中攪拌3 5min，然后在40 50°C，pH值為7. 5 8. 5下，于生物反應器中攪拌螯合反應20 40min，干燥，得魚骨小分子多肽螯合鈣粉。上述制備方法步驟(1)中所述的魚骨為鰈魚魚骨。上述制備方法步驟O)中所述的復合蛋白酶由風味蛋白酶和木瓜蛋白酶組成，它們之間的質量比為1 1。上述制備方法步驟(4)中所述的復合酸溶液由檸檬酸和乳酸組成，它們之間的體積比為1 1 ；其中所述檸檬酸的濃度為10 20% ；所述乳酸的濃度為10 20%。上述制備方法步驟(1)中所述的用組織搗碎機將魚骨打漿時組織搗碎機的轉速為 12000rpmo本發明具有的優點和有益效果(1)、本發明魚骨小分子多肽螯合鈣粉的鈣螯合率高，可達90%以上；其次，鈣的生物吸收率高，可達70%以上。( 、本發明魚骨小分子多肽螯合鈣粉無副作用，產品有淡淡的乳香味，具體較好的風味。(3)、本發明制備方法簡便易行，成本低。(4)、本發明所制備的魚骨小分子多肽螯合鈣粉以多肽的整體形式直接從腸黏膜吸收，從而免遭一些理化因素，如PH值、脂類、纖維、草酸、植酸、磷酸鹽等的影響，有效解決了傳統鈣源溶解性差、吸收率低、副作用大、產生結石等問題。(5)、與傳統補鈣制劑如磷酸鈣、碳酸鈣、葡萄糖酸鈣、醋酸鈣、乳酸鈣等相比，本發明魚骨小分子多肽螯合鈣粉既能滿足生命體對鈣元素的需要，又能達到補充蛋白多肽的雙重功效。
具體實施例方式實施例1魚骨小分子多肽螯合鈣粉的制備(1)取鰈魚骨1000克，經解凍、去表面殘留的魚肉、清洗，在壓力為0. 165Mpa、溫度為120°C條件下蒸煮魚骨20min，再用組織搗碎機在12000轉/分下打漿，冷卻、浙干，得到 380克魚骨泥，凍結至-10°C，備用；(2)向冷凍的魚骨泥中加入水760mL解凍，然后攪拌5分鐘，加復合蛋白酶(風味蛋白酶和木瓜蛋白酶以質量比1 1混合)2.5克，在60°〇、 !1為7.0條件下進行酶解反應 20min,再在95°C下保溫3分鐘滅酶，冷卻至室溫后6000g離心％iin，去脂肪，得到上清液和沉淀物。(3)對步驟( 所得的上清液經過分子量為3ku的過濾膜超濾2次，得到魚骨小分子多肽液450ml。(4)對步驟( 所得的離心沉淀物進行清洗、烘干、粉碎，得魚骨粉，魚骨粉經過復合酸(檸檬酸和乳酸按照1 1體積比混合)酸化(魚骨粉與12%的酸溶液以 Ig IOml (w/v)處理40min，得到魚骨鈣液150ml。(5)對步驟( 和步驟(4)所得到的魚骨小分子多肽液和魚骨鈣液于生物反應器中攪拌混合5分鐘，然后在50°C，pH值為8. 0條件下，于生物反應器中攪拌螯合反應40min， 再經過冷凍干燥(FD-1PF，北京德天佑科技發展有限公司)得到魚骨小分子多肽螯合鈣粉 62克。經測定，鈣螯合率為96%。鈣螯合率的計算方法
螯合率％ —5 χ100%
(1)式(1)中W1 螯合反應前魚骨鈣液中鈣的含量(mg) ,W2 魚骨小分子多肽螯合鈣粉中未螯合鈣的含量(mg)。鈣含量測定方法(1)試劑配置1. 25mol/L氫氧化鉀溶液精確稱取70. 13g氫氧化鉀，用水稀釋至1000M1。0. 05mol/L檸檬酸鈉溶液稱取14. 7g檸檬酸鈉(Na3C6H7 · 2H20)，用水稀釋至 1000mL。EDTA溶液準確稱取4. 50g EDTA(乙二胺四乙酸二鈉)，用水稀釋至lOOOmL，貯存于聚乙烯瓶中，4°C保存。使用時稀釋10倍即可。鈣標準溶液準確稱取0. IMSg碳酸鈣(純度大于99. 99%，105°C 110°C烘干2h)，加20ml水及3mL, 0. 5mol/L.鹽酸溶解，移入500ml 容量瓶中，加水稀釋至刻度，貯存于聚乙烯瓶中，4°C保存。此溶液每毫升相當于IOOyg鈣。 鈣紅指示劑稱取0. Ig鈣紅指示劑(C21O7N2SH14),用水稀釋至100ml，溶解后即可使用。貯存于冰箱中可保持一個半月以上。 (2)標定EDTA濃度吸取0. 5mL鈣標準溶液，以EDTA滴定，標定其EDTA的濃度，根據滴定結果計算出每毫升EDTA相當于鈣的毫克數，即滴定度(T)。(3)試樣及空白滴定分別吸取0. ImL試樣于空白于試管中，加0. ImL檸檬酸鈉溶液，用滴定管加1. 5ML 1. 25mol/L氫氧化鉀溶液，加3滴鈣紅指示劑，立即以稀釋10倍EDTA 溶液滴定，至指示劑由紫紅色變藍為止。(4)計算方法
權利要求
1.一種魚骨小分子多肽螯合鈣粉，其特征在于按照如下方法制備(1)將冷凍的魚骨解凍，去除魚骨表面殘留的魚肉、清洗干凈；在壓力為0.145 0. 165Mpa、溫度為110 120°C條件下蒸煮魚骨15 20min，再用組織搗碎機將魚骨打漿， 經冷卻、浙干，得到魚骨泥；凍結至-5 -10°C保存；(2)按照水與魚骨泥之間質量比為1.5 2. 5 1的比例，向步驟(1)所得冷凍的魚骨泥中加入水解凍，然后攪拌3 6min，得魚骨漿；按照復合蛋白酶與魚骨漿之間質量比為 1 450 500的比例向魚骨漿中加入復合蛋白酶，然后在50 70°C、pH為6. 5 7. 5條件下進行酶解反應10 30min ；再在90 95°C下保溫3 5min，接著在室溫、4000 6000g 條件下離心3 5min，去脂肪，分別取上清液和沉淀物；所述的復合蛋白酶由風味蛋白酶和木瓜蛋白酶組成；(3)用分子量為3ku的過濾膜超濾步驟( 所得的上清液2 3次，收集濾液，濃縮，得到魚骨小分子多肽液；(4)將步驟( 所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得魚骨粉；按照魚骨粉與復合酸溶液之間Ig 5 IOmL重量體積比將魚骨粉置于復合酸中進行酸化處理30 60min，得到魚骨鈣液；所述復合酸溶液的濃度為10 20% ；所述的復合酸溶液由檸檬酸和乳酸組成；(5)將步驟( 所得魚骨小分子多肽液和步驟(4)所得魚骨鈣液混合于生物反應器中攪拌3 5min，然后在40 50°C，pH值為7. 5 8. 5下，于生物反應器中攪拌螯合反應 20 40min，干燥，得魚骨小分子多肽螯合鈣粉。
2.按照權利要求1所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉，其特征在于其步驟(1)中所述的魚骨為鰈魚魚骨。
3.按照權利要求1或2所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉，其特征在于其步驟O)中所述的復合蛋白酶中風味蛋白酶和木瓜蛋白酶之間的質量比為1 1。
4.按照權利要求3所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉，其特征在于其步驟中所述的復合酸溶液中檸檬酸和乳酸之間的體積比為1 1 ；其中所述檸檬酸的濃度為10 20% ； 所述乳酸的濃度為10 20%。
5.按照權利要求3所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉，其特征在于其步驟(1)中所述的用組織搗碎機將魚骨打漿時組織搗碎機的轉速為12000rpm。
6.權利要求1所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉的制備方法，其特征在于包括如下步驟(1)將冷凍的魚骨解凍，去除魚骨表面殘留的魚肉、清洗干凈；在壓力為0.145 0. 165Mpa、溫度為110 120°C條件下蒸煮魚骨15 20min，再用組織搗碎機將魚骨打漿， 再經冷卻、浙干，得到魚骨泥；凍結至-5 -10°C保存；(2)按照水與魚骨泥之間質量比為1.5 2.5 1的比例，向步驟(1)所得冷凍的魚骨泥中加入水解凍，攪拌3 6min，得魚骨漿；按照復合蛋白酶與魚骨漿之間質量比為 1 450 500的比例向魚骨漿中加入復合蛋白酶，然后在50 70°C、pH為6. 5 7. 5條件下進行酶解反應10 30min ；再在90 95°C下保溫3_5min，接著在室溫、4000 6000g 條件下離心3 5min，去脂肪，分別取上清液和沉淀物；所述的復合蛋白酶由風味蛋白酶和木瓜蛋白酶組成，它們之間的質量比為1 1;(3)用分子量為3ku的過濾膜超濾步驟( 所得的上清液2 3次，收集濾液，濃縮，得到魚骨小分子多肽液；(4)將步驟( 離心所得的沉淀物用水清洗、烘干、粉碎，得魚骨粉；按照魚骨粉與復合酸溶液之間Ig 5 IOmL重量體積比將魚骨粉置于復合酸中進行酸化處理30 60min， 得到魚骨鈣液；所述復合酸溶液的濃度為10 20%;所述的復合酸溶液由檸檬酸和乳酸組成，它們之間的體積比為1 1 ；其中所述檸檬酸的濃度為10 20% ；所述乳酸的濃度為 10 20% ；(5)將步驟(3)所得到的魚骨小分子多肽液和步驟⑷所得到的魚骨鈣液混合于生物反應器中攪拌3 5min，然后在40 50°C，pH值為7. 5 8. 5下，于生物反應器中攪拌螯合反應20 40min，干燥，得魚骨小分子多肽螯合鈣粉。
7.按照權利要求6所述的制備方法，其特征在于步驟(1)中所述的魚骨為鰈魚魚骨。
8.權利要求1-5任一所述的魚骨小分子多肽螯合鈣粉作為食品添加劑或營養食品的用途。
全文摘要
本發明公開了屬于功能性食品或添加劑領域的魚骨小分子多肽螯合鈣，主要是將魚骨在高溫、高壓下蒸煮，打漿得魚骨泥；然后用復合蛋白酶對魚骨泥進行酶解，離心，得上清液和沉淀物；將上清液過濾得魚骨小分子多肽液；將沉淀物用檸檬酸和乳酸組成的復合酸酸化，得魚骨鈣液；將魚骨小分子多肽液和魚骨鈣液混合，在40～50℃，pH值為7.5～8.5條件下進行螯合反應，干燥，即得魚骨小分子多肽螯合鈣粉。本發明鈣螯合率高，可達90％以上；其次，鈣的生物吸收率高，可達70％以上；本發明無副作用，風味好；食用后可直接從腸黏膜吸收，解決了傳統鈣源溶解性差、吸收率低、副作用大、產生結石等問題；另外，本發明制備方法簡便，成本低。
文檔編號A23L1/29GK102406176SQ20111029505
公開日2012年4月11日 申請日期2011年10月8日 優先權日2011年10月8日
發明者劉棟, 呂元萌 申請人:山東榮信水產食品集團股份有限公司