參與肺囊康定合成的蛋白glnrps4及其編碼基因的制作方法
【專利摘要】本發明公開了一種參與肺囊康定合成的蛋白glnrps4及其編碼基因。本發明提供的蛋白質，是如下（a）或（b）：（a）由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；（b）將序列表中序列1所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且參與肺囊康定合成的由序列1衍生的蛋白質。抑制Glarea?lozoyensis中所述蛋白的編碼基因的表達，將不能產生肺囊康定B0和肺囊康定A0。本發明為深入研究肺囊康定生物合成途徑和/或代謝途徑提供了理論依據，可用于通過生物合成途徑獲得不同的肺囊康定衍生物，從中篩選更高效的棘白菌素類抗真菌藥物。
【專利說明】參與肺囊康定合成的蛋白glnrps4及其編碼基因
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種參與肺囊康定合成的蛋白glnrps4及其編碼基因。
【背景技術】
[0002]卡泊芬凈(Caspofungin)是第一個獲得美國FDA批準上市的棘白菌素(Echinocandin)類抗真菌藥物,能夠特異性的抑制真菌細胞壁β- (I, 3)-D-葡聚糖的合成，使真菌溶解，具有良好的抗真菌活性，并且對患者不會產生類似兩性霉素B等藥物的細胞毒性，因此也被譽為抗真菌藥物中的青霉素。[0003]卡泊芬凈在臨床上用于治療對其它治療無效或不能耐受的侵襲性曲霉病和念珠菌菌血癥及繼發的念珠菌性腹腔膿腫和腹膜炎患者。2009年其全球銷售額為6.17億美元，在中國整個抗真菌藥物醫院市場中所占份額為12.45%，位居第四。目前，尚無國產的卡泊芬凈產品，國內使用均需進口，單支售價高達千元。然而，默克公司對于卡泊芬凈的專利權將于2013年到期，屆時卡泊芬凈國產化勢在必行，這將帶來巨大的經濟價值。
[0004]卡泊芬凈的前體物是由Glarea 1zoyensis產生的肺囊康定(pneumocandin) B。，因此Glarea 1zoyensis中肺囊康定B。合成至關重要。Glarea 1zoyensis屬于子囊菌門(Ascomycota)錘舌菌綱(Leotiomycetes)柔膜菌目(Helotiales),為無性型絲狀真菌。1991年，Adefarati等通過NMR等技術分析了肺囊康定B。的結構,發現該化合物是由蘇氨酸、trans-4-羥基脯氨酸、3，4-二羥基高酪氨酸、3-羥基谷氨酰胺、trans-3-羥基脯氨酸和4，5- 二羥基鳥氨酸組成的環六肽主鏈和一條10，12- 二甲基-豆蘧酸酯的聚酮側鏈構成的。
[0005]肺囊康定包括和肺囊康定Atl和肺囊康定Btl,結構式如下:
[0006]
【權利要求】
1.一種蛋白質，是如下(a)或(b): Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質； (b)將序列表中序列I所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且參與肺囊康定合成的由序列I衍生的蛋白質。
2.編碼權利要求1所述蛋白的基因。
3.如權利要求2所述的基因，其特征在于:所述基因是如下(I)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子: (1)序列表中序列2所不的DNA分子； (2)序列表中序列3所示的DNA分子； (3)在嚴格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼參與肺囊康定合成的蛋白的DNA分子； (4)與(I)或(2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼參與肺囊康定合成的蛋白的DNA分子。
4.含有權利要求2或3所述基因的重組載體、表達盒、轉基因細胞系或重組菌。
5.權利要求1所述蛋白質在參與肺囊康定合成中的應用。
6.用于抑制權利要求2或3所述基因表達的產品在阻斷肺囊康定合成中的應用。
7.—種重組質粒，是以載體pAgl-H3為骨架載體，在所述骨架載體的不同多克隆位點分別插入序列表的序列2自5’末端第8707-12875位核苷酸所示的DNA片段甲和序列表的序列2自5’末端第12904-16885位核苷酸所示的DNA片段乙得到的重組質粒。
8.權利要求7所述重組質粒在抑制glnrps4蛋白的編碼基因表達中的應用；所述glnrps4蛋白是如下(a)或(b): Ca)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質； (b)將序列表中序列I所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且參與肺囊康定合成的由序列I衍生的蛋白質。
9.如權利要求8所述的應用,其特征在于:所述glnrps4蛋白的編碼基因是如下(I)或(2)或(3)或(4)所述的DNA分子: (1)序列表中序列2所不的DNA分子； (2)序列表中序列3所示的DNA分子； (3)在嚴格條件下與(I)或(2)限定的DNA序列雜交且編碼參與肺囊康定合成的蛋白的DNA分子； (4)與(I)或(2)限定的DNA序列至少具有90%以上同源性且編碼參與肺囊康定合成的蛋白的DNA分子。
【文檔編號】C12R1/645GK103509779SQ201210202632
【公開日】2014年1月15日 申請日期:2012年6月15日 優先權日:2012年6月15日
【發明者】劉杏忠, 安志強, 陳里, 岳群, 向梅春 申請人:中國科學院微生物研究所