白僵菌素的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種白僵菌素的制備方法。包括下述步驟：1a、制備鐮刀菌LF061種子液：將菌株LF061的斜面培養物或孢子液接種于種子培養基，28℃-32℃、轉速120rpm-160rpm，培養48-72h獲得種子液；1b、鐮刀菌LF061種子液經發酵制備白僵菌素：將上述種子液以體積百分比5%-15%的接種量接種于液體發酵培養基，發酵溫度28℃-32℃，轉速120rpm-160rpm，通氣量10L-30L/分，發酵時間96h-144h；所得發酵液分離、精制得白僵菌素。本發明采用液體發酵生產白僵菌素，制備的白僵菌素純度高，回收率高，適用于工業化生產。
【專利說明】白僵菌素的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于工業微生物【技術領域】，具體涉及到一種白僵菌素制備方法。
【背景技術】
[0002]白僵菌素(beauvericin, BEA)是從真菌球抱白僵菌辦assiafla)發酵菌絲體中提取分離的一種六元環狀縮酯肽化合物，由3個N-甲基苯丙氨酸和3個(D)-a -羥基異戊酸殘基交替相連而成，分子式為C45H57N3O9,結構如式(I )所示。白僵菌素為白色粉末狀，不易溶于水，溶于甲醇、丙酮等有機溶劑，可被檢測的紫外吸收光譜范圍是204nm_225nmo
【權利要求】
1.一種白僵菌素的制備方法，其特征在于，包括下述步驟: la、制備鐮刀菌LF061種子液: 將菌株LF061的斜面培養物或孢子液接種于種子培養基，28°C -32°C、轉速120rpm-160rpm,培養48-72 h獲得種子液； 其中所說的種子培養基為YI3D培養基，其含有如下組分:Yeast Extract 10g，Peptone20g,葡萄糖20g,加蒸懼水定容至1000 ml, 121 °C滅菌20 min ; lb、鐮刀菌LF061種子液經發酵制備白僵菌素: 將上述種子液以體積百分比5%-15 %的接種量接種于液體發酵培養基，發酵溫度28℃ -32 °C，轉速120rpm-160 rpm，通氣量10L-30L/分，發酵時間96h-144 h ;所得發酵液分離、精制得白僵菌素； 其中所說的液體發酵培養基含有以下組分:葡萄糖5g-10g，可溶性淀粉20g-30g，工業蛋白胨20g-50g，氯化鉀0.1-0.2g，磷酸二氫鉀3g-5g，硝酸鈉lg-l.5g，七水硫酸鎂0.05g-0.lg，碳酸鈣 lg-2g,加水定容至 1000 ml, 121 °C滅菌 30 min。
2.根據權利要求1所述的白僵菌素的制備方法，其特征在于，所述發酵液分離、精制步驟為: 2a、將發酵液離心或過濾，獲得白僵菌素菌絲體； 2b、用有機溶劑對菌絲體浸提1-2次，每次2-4小時，合并浸提液，減壓濃縮，除去有機溶劑，得到白僵菌素粗提物； 2c、將白僵菌素粗提物加入有機溶劑進行溶解，上樣至裝有聚合物色譜填料的色譜柱； 2d、使用有機溶劑與水的混合液進行梯度洗脫，分管收集洗脫液并進行在線檢測，將符合要求的洗脫液合并，經濃縮、干燥，得到高純度的白僵菌素。
3.根據權利要求1或2所述的白僵菌素的制備方法，其特征在于:所述有機溶劑為乙醇或甲醇。
4.根據權利要求2所述的白僵菌素的制備方法，其特征在于:所述梯度洗脫是指上樣后，先用80%體積百分比的甲醇或乙醇水溶液洗脫2個柱體積去除雜質，然后再用甲醇或乙醇進行洗脫，洗脫速度為1-2倍柱體積/小時。
【文檔編號】C12P21/04GK103898182SQ201310725157
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2013年12月25日 優先權日:2013年12月25日
【發明者】段寶玲, 張立新, 張雪霞, 劉梅, 任風芝, 賀偉, 李寧, 白超弦, 李曉露, 賈嘯靜, 陳書紅, 米貫東, 李麗紅, 王秀琴, 董愛華, 王海燕, 段向東 申請人:華北制藥集團新藥研究開發有限責任公司, 中國科學院微生物研究所