利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌及制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開一種利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌及制備方法與應(yīng)用。該菌株含有如下核苷酸序列：木糖還原酶基因、木糖醇脫氫酶基因和木酮糖激酶基因；其中，木酮糖激酶基因過表達(dá)。本發(fā)明通過同源重組，將組成型強(qiáng)啟動(dòng)子整合到釀酒酵母出發(fā)菌株基因組上木酮糖激酶基因上游，得到木酮糖激酶過表達(dá)的菌株；再轉(zhuǎn)化入從萄牙假絲酵母獲得木糖還原酶基因和木糖醇脫氫酶基因，得到利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌。該釀酒酵母工程菌能夠以木糖為唯一碳源生長，為后續(xù)構(gòu)建木糖和葡萄糖共發(fā)酵產(chǎn)乙醇的菌株奠定了基礎(chǔ)；并可以該工程菌株為基礎(chǔ)進(jìn)一步篩選和改造，使其以木質(zhì)纖維素為原料生產(chǎn)乙醇，從而大大降低乙醇的生產(chǎn)成本。
CCTCC NO：M 2014385
2014.08.20
【專利說明】利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌及制備方法與應(yīng) 用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程【技術(shù)領(lǐng)域】，特別涉及一種利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母 工程菌及制備方法與應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 木質(zhì)纖維素是一類豐富而廉價(jià)的可再生資源，是生產(chǎn)燃料乙醇的主要材料，經(jīng)水 解后，可得到以葡萄糖和木糖為主的發(fā)酵性糖。木糖的有效利用是木質(zhì)纖維素生物轉(zhuǎn)化生 產(chǎn)乙醇的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae從人類有記載以來就一直 是生產(chǎn)乙醇的首選，是目前在工業(yè)規(guī)模上發(fā)酵玉米淀粉和其他糖類化合物產(chǎn)乙醇的菌株， 耗糖迅速快、乙醇耐受能力強(qiáng)，在生物質(zhì)轉(zhuǎn)化中潛力具大。但釀酒酵母不能利用木糖，鑒于 自然界缺少能高效轉(zhuǎn)化木糖生產(chǎn)乙醇的釀酒菌種，近年來通過基因工程技術(shù)獲得了多種不 同類型的木糖發(fā)酵工程菌株，其中釀酒酵母是主要研究對(duì)象。但仍存在許多技術(shù)難題，具有 進(jìn)一步提升的空間。
[0003] 釀酒酵母工程菌株中普遍存在的問題可總結(jié)為：碳源代謝抑制、胞內(nèi)戊糖代謝通 路中的氧化還原失衡、以及底物攝取能力低下，在整個(gè)木質(zhì)纖維素的發(fā)酵過程中，作為發(fā)酵 菌株的釀酒酵母還面臨著來自環(huán)境和物料、遺傳途徑、胞內(nèi)調(diào)節(jié)幾方面的壓力。然而目前對(duì) 這些問題尚未有有效的解決辦法，將新型外源基因用于構(gòu)建釀酒酵母木糖代謝途徑，可進(jìn) 一步了解其它菌株的代謝機(jī)制，是一種提高木糖發(fā)酵能力的有效策略，對(duì)豐富微生物代謝 工程的認(rèn)識(shí)有重要價(jià)值。
[0004] 根據(jù)代謝工程理論，構(gòu)建能利用木糖產(chǎn)乙醇的釀酒酵母工程菌株的重要途徑 之一是克隆天然利用木糖的酵母菌的兩個(gè)關(guān)鍵酶基因，木糖還原酶基因XYL1 (xylose reductase，XR)和木糖醇脫氧酶基因XYL2 (xylitol dehydrogenase, XDH)，并使其在釀酒酵 母細(xì)胞中表達(dá)。代謝通路中緊接著XYL1和XYL2的木酮糖激酶基因XKS (xylulokinase，XK) 也往往是酵母菌代謝木糖的瓶頸。引入外源XYL1、XYL2,過表達(dá)宿主菌的XKS，有望得到高 效發(fā)酵木糖產(chǎn)乙醇的工程菌株。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)與不足，提供一種利用木糖進(jìn)行乙醇 發(fā)酵的釀酒酵母工程菌。該釀酒酵母工程菌可以以木糖為唯一碳源，發(fā)酵生產(chǎn)乙醇。
[0006] 本發(fā)明的另一目的在于提供所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的制 備方法。
[0007] 本發(fā)明的再一目的在于提供所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的應(yīng) 用。
[0008] 本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：一種利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工 程菌，含有如下核苷酸序列：如SEQ ID NO. 1所示的木糖還原酶基因、如SEQ ID N0. 2所示 的木糖醇脫氫酶基因和如SEQ ID NO. 3所示的木酮糖激酶基因；
[0009] 所述的木糖還原酶基因來自葡萄牙假絲酵母；尚未有利用該基因的報(bào)道；
[0010] 所述的木糖醇脫氫酶基因來自葡萄牙假絲酵母；尚未有利用該基因的報(bào)道；
[0011] 所述的木酮糖激酶基因在所述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌中過 表達(dá)；
[0012] 所述的過表達(dá)優(yōu)選為使用強(qiáng)啟動(dòng)子啟動(dòng)木酮糖激酶基因的轉(zhuǎn)錄；
[0013] 所述的強(qiáng)啟動(dòng)子優(yōu)選為磷酸甘油激酶啟動(dòng)子；
[0014] 所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，優(yōu)選含有如下核苷酸序列：啟動(dòng) 子1+如SEQ ID NO. 1所示的木糖還原酶基因+終止子1、啟動(dòng)子2+如SEQ ID N0. 2所示 的木糖醇脫氫酶基因+終止子2和啟動(dòng)子3+SEQ ID NO. 3所示的木酮糖激酶基因+終止子 3 ；
[0015] 所述的啟動(dòng)子1優(yōu)選為組成型啟動(dòng)子，特別優(yōu)選為磷酸丙糖異構(gòu)酶啟動(dòng)子 (pTPIl)，其來自釀酒酵母；
[0016]所述的終止子1優(yōu)選為磷酸丙糖異構(gòu)酶終止子（tTPIl)，其來自釀酒酵母；
[0017] 所述的啟動(dòng)子2優(yōu)選為組成型啟動(dòng)子，特別優(yōu)選為己糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HXI7的啟動(dòng)子 (PHXI7)，其來自釀酒酵母；
[0018] 所述的終止子2優(yōu)選為CYC1終止子，其來自載體PYES2 ;
[0019]所述的啟動(dòng)子3優(yōu)選為組成型強(qiáng)啟動(dòng)子，保證了木酮糖激酶基因過表達(dá)；特別優(yōu) 選為磷酸甘油激酶啟動(dòng)子（PPGK1);
[0020] 所述的終止子3優(yōu)選為木酮糖激酶終止子；
[0021] 所述的核苷酸序列優(yōu)選為整合到所述釀酒酵母工程菌的染色體上；
[0022] 所述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的出發(fā)菌株優(yōu)選為釀酒酵母 Saccharomyces cerevisiae CICC 1917 ；
[0023] 所述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，優(yōu)選名稱為釀酒酵母 (Saccharomyces cerevisiae)004_PGK的菌株，其于2014年8月20日保藏在位于中國武漢 武漢大學(xué)內(nèi)的中國典型培養(yǎng)物保藏中心、保藏號(hào)為CCTCC NO :M 2014385 ;
[0024] 所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的制備方法，包含如下步驟：
[0025] (1)設(shè)計(jì)如下引物（5'-3'）
[0026]表1
[0027]

【權(quán)利要求】
1. 一種利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于含有如下核苷酸序列： 如SEQ ID NO. 1所示的木糖還原酶基因、如SEQ ID NO. 2所示的木糖醇脫氫酶基因和如SEQ ID NO. 3所示的木酮糖激酶基因。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述 的木酮糖激酶基因在所述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌中過表達(dá)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于含有如 下核苷酸序列：啟動(dòng)子1+如SEQ ID NO. 1所示的木糖還原酶基因+終止子1、啟動(dòng)子2+如 SEQ ID NO. 2所示的木糖醇脫氫酶基因+終止子2和啟動(dòng)子3+SEQ ID NO. 3所示的木酮糖 激酶基因+終止子3。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述 的啟動(dòng)子1為磷酸丙糖異構(gòu)酶啟動(dòng)子； 所述的終止子1為磷酸丙糖異構(gòu)酶終止子； 所述的啟動(dòng)子2為己糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HXI7的啟動(dòng)子； 所述的終止子2為CYC1終止子； 所述的啟動(dòng)子3為磷酸甘油激酶啟動(dòng)子； 所述的終止子3為木酮糖激酶終止子。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述 的核苷酸序列為整合到所述釀酒酵母工程菌的染色體上。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所 述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的出發(fā)菌株為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC 1917。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌，其特征在于：所述的利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌為名稱為釀酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)004-PGK的菌株，其于2014年8月20日保藏在位于中國武漢武漢大學(xué)內(nèi)的中 國典型培養(yǎng)物保藏中心、保藏號(hào)為CCTCC NO :M 2014385。
8. 權(quán)利要求1?7任一項(xiàng)所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的制備方法， 其特征在于包含如下步驟： ⑴設(shè)計(jì)如下引物，引物方向均為5'-3' ： 3sites oligo dT ：GAGCGGATAACAATTTCACACAGGTTTTTTTTTTTTTTTT ； XYL1-DEG-F ：ATGCTATTAAAGTAGGTTATAGATTATTYGAYGGNGC ； XYL1-DEG-R ：ATTAAATGTGGTTGTTGTAAATATGGRTGRTGYTC ； XYL2-DEG-F ：GTTATAGTTGAAGTTAAGAAAACTGGNATHTGYGG ； XYL2-DEG-R ：CAGCTAATAAACCAACTGGACCNGCNCCRAA ； xyll 3sites F ：CTTGAACCTCGAGTACCTTG ； xyl2 3sites F ：CCACATCCAAAGAAGGCGAAC ； 3sites Adaptor ：GAGCGGATAACAATTTCACACAGG ； 5sites Tri-G ：AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTACGCGGG ； xyll 5sites R ：AAGTCGCTCAATGTCTTGTCC ； xyl2 5sites R：TGGTCTGGCAACTTAACCAA ； 5sites Adaptor ：AAGCAGTGGTATCAACGCAGAGTAC ； xyll-cDNA-F ：GCTTTCCCGATGACACGTTTGCGAAAAT ； xyll-cDNA-R ：AATATGACTAATAGAAGGTAATTTT ； xyl2-cDNA-F ：CCACCTCAAGGTATGAGCCTAT ； xyl2-cDNA-R ：AACGGAGAAGAAAACCATTAGCTTT ； pXKSl-F ：GGGCCCGAATTCAGCCCGACGGATATACCACTTATGT ； pXKSl-R ：GGGCCCGGTACCTAAAGTACTAATCTCATCCTCCTTT ； pPGKl-F ：GGGCCCGGTACCAAGAAATTACCGTCGCTCGTG ； pPGKl-R ：GGGCCCGGATCCTGTTTTATATTTGTTGTAAA ； XKS1 ORF-F ：GGGCCCGGATCCATGTTGTGTTCAGTAATTCA ； XKS1 ORF-R ：GGGCCCGTCGACTTAGATGAGAGTCTTTTCCA ； XKSl-ext-R ：GCGCTAATTTGATTTGTCT ； pTPIl-F ：GGGCCCACTAGTCTACGTATGGTCATTTCTTC ； pTPIl-R ：GGGCCCGAATTCCTGTATGTGTTTTTTGTAGT ； xyll-F ：GGGCCCGAATTCATGGCCACTATTAAGTTGAA ； xyll-R ：TTTATATAATTATATTAATCGGTACCCTAGTGGAAGATTGGGATTT ； tTPIl-F ：AAATCCCAATCTTCCACTAGGGTACCGATTAATATAATTATATAAA ； tTPIl-R ：CATACCCCTCATTTCCACGGGAGCTCGCTCTTCTATATAACAGTTG ； PHXT7-F ：CAACTGTTATATAGAAGAGCGAGCTCCCGTGGAAATGAGGGGTATG ； PHXT7-R ：TGTCTGGCAATGCGCCCCACGGATCCTTTTTGATTAAAATTAAAAA ； xyl2-F ：TTTTTAATTTTAATCAAAAAGGATCCATGTCCAACCCATCTTTGGT ； xyl2-R ：GGGCCCTCTAGATTACTCAGGACCGTCAATAA ； (2) 獲得木糖還原酶基因和木糖醇脫氫酶基因 ① 提取葡萄牙假絲酵母的總RNA，使用引物3sites oligo dT進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA; ② 以得到的cDNA作為模板，使用引物對(duì)XYL1-DEG-F+XYL1-DEG-R以及引物對(duì) XYL2-DEG-F+XYL2-DEG-R分別進(jìn)行PCR，PCR產(chǎn)物經(jīng)過純化后與T載體連接，測(cè)序后證明是 木糖還原酶和木糖醇脫氫酶基因的部分序列； ③ 3' RACE :以步驟①得到的cDNA為模板，分別使用特異引物xyll 3sites F和xyl2 3sites F結(jié)合3sites Adaptor引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物純化后連接T載體后測(cè)序； @5'狀0￡:提取葡萄牙假絲酵母的總1?隱，使用引物38^68〇11§〇(11'和58^68 Tri-G進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄，得到cDNA ;以該cDNA為模板，分別使用特異引物xyll 5sites R和xyl2 5sites R結(jié)合5sites Adaptor引物進(jìn)行PCR反應(yīng)，PCR產(chǎn)物純化后連接T載體后測(cè)序； ⑤再以步驟①得到的cDNA為模板，使用xyl 1-cDNA-F和xyl 1-cDNA-R為引物對(duì)，PCR得 到木糖還原酶基因；使用xyl2-cDNA-F和xyl2-cDNA-R為引物對(duì)，PCR得到木糖醇脫氫酶基 因； (3) 獲得木酮糖激酶啟動(dòng)子片段、磷酸甘油激酶啟動(dòng)子片段、木酮糖激酶基因片段、磷 酸丙糖異構(gòu)酶啟動(dòng)子片段、磷酸丙糖異構(gòu)酶終止子片段、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HXI7啟動(dòng)子片段 以釀酒酵母基因組DNA為模板，以pXKSl-F和pXKSl-R為引物對(duì)，PCR得到木酮糖激酶 啟動(dòng)子片段；以PPGK1-F和pPGKl-R為引物對(duì)，PCR得到磷酸甘油激酶啟動(dòng)子片段；以XKS1 ORF-F和XKS1 ORF-R為引物對(duì)，PCR得到木酮糖激酶基因片段；以pTPIl-F和pTPIl-R為引 物對(duì)，PCR得到磷酸丙糖異構(gòu)酶啟動(dòng)子片段；以tTPIl-F和tTPIl-R為引物對(duì)，PCR得到磷 酸丙糖異構(gòu)酶終止子片段；以PHXI7-F和pHXI7-R為引物對(duì)，PCR得到葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HXI7 的啟動(dòng)子片段； (4) 重組載體的構(gòu)建 I、 釀酒酵母整合型表達(dá)載體nplac211-dpXKS的構(gòu)建 用BamHI-Kpnl酶切磷酸甘油激酶啟動(dòng)子片段，連入Hplac211的BamHI-Kpnl切口，得 到質(zhì)粒nplac211-Pp ;接著用KpnI-EcoRI酶切木酮糖激酶啟動(dòng)子片段，連入nplac211-Pp 的KpnI-EcoRI切口，得到質(zhì)粒nplac211-dp ;用Sall-BamHI酶切木酮糖激酶基因片段，連 入 nplac211-dp 的 Sall-BamHI 切口，得到質(zhì)粒 nplac211-dpXKS ; II、 質(zhì)粒P0J04的構(gòu)建 以步驟⑵①得到的cDNA為模板，以xyll-F和xyll-R為引物對(duì)，擴(kuò)增得到xyll基 因；以步驟⑵①得到的cDNA為模板，以xyl2_F和xyl2_R為引物對(duì)，擴(kuò)增得到xyl2基因； 用Spel-EcoRI酶切上一步驟得到的磷酸丙糖異構(gòu)酶啟動(dòng)子片段，連入pYES2的Spel-EcoRI 切口，得到質(zhì)粒P〇J〇l ;將xyll基因和上一步驟得到的磷酸丙糖異構(gòu)酶終止子片段等摩 爾比混合后作為模板，使用引物對(duì)xyll-F+tTPIl-R擴(kuò)增得到XYLl-tTPIl ;將xyl2基因 和上一步驟得到的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白HXI7啟動(dòng)子片段等摩爾比混合后作為模板，使用引物 對(duì) pHXI7-F+xyl2-R 擴(kuò)增得到 pHXI7-XYL2 ;XYLl-tTPIl 和 pHXI7-XYL2 經(jīng)純化后，以之作為 模板再次進(jìn)行融合PCR，使用引物對(duì)xyll-F+Xyl2-R，得到4片段的融合產(chǎn)物XYLl-t-p-2 ; XYLl-t-p-2 用 EcoRI-Xbal 酶切，連入 pOJOl 的 EcoRI-Xbal 切口，得到質(zhì)粒 p0J04 ; (5) 木酮糖激酶過表達(dá)的釀酒酵母菌的制備 將線性化的nplac211-dpXKS轉(zhuǎn)化入釀酒酵母感受態(tài)細(xì)胞，涂布于含有1M山梨醇溶液 的尿嘧啶省卻培養(yǎng)基選擇性平板，30°C倒置培養(yǎng)；使用引物pPGKl-F和XKSl-ext-R通過菌 落PCR篩選得到陽性克隆；將陽性克隆涂布于含有5-F0A的篩選平板上，使用引物pPGKl-F 和XKSl-ext-R再次篩選pPGKl正確插入到XKS 0RF之前的轉(zhuǎn)化子，得到木酮糖激酶過表達(dá) 的釀酒酵母菌； (6) 表達(dá)木糖還原酶基因和木糖醇脫氫酶基因的釀酒酵母重組菌株的獲得 將木酮糖激酶過表達(dá)的釀酒酵母菌處理成感受態(tài)細(xì)胞；接著將線性化的P0J04轉(zhuǎn)化入 木酮糖激酶過表達(dá)的釀酒酵母菌感受態(tài)細(xì)胞中，涂布于含有1M山梨醇溶液的尿嘧啶省卻 培養(yǎng)基選擇性平板，30°C倒置培養(yǎng)，使用引物xyl 1-F和xyl 1-R進(jìn)行菌落PCR，篩選出表達(dá)木 糖還原酶基因和木糖醇脫氫酶基因的釀酒酵母重組菌株。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的制備方法，其特征 在于： 步驟（2)中所述的葡萄牙假絲酵母為萄萄牙假絲酵母Candida lusitaniae CICC 1461 ； 步驟（2)②和⑤中所述的PCR的體系為：Premix LA Taq 25 iiL、濃度為10mM的上游引 物4 ii L、濃度為10mM的下游引物4 ii L、模板2 ii L，ddH20補(bǔ)足至50 ii L ; 步驟⑵③中所述的PCR的體系為：Premix LA Taq 25 iiL、濃度為lOmM的特異引物 2 u L、濃度為 lOmM 的 3sites Adaptor 2 u L、模板 2 u L，ddH20 補(bǔ)足至 50 u L ; 步驟（2)④中所述的反轉(zhuǎn)錄的具體步驟如下： A、 將濃度 ly g/y L 的總 RNA2. 75ii L 和濃度為 lOOiiM 的 3sites oligo dT 引物 lii L 混合均勻，離心后在PCR儀上72°C溫育3min，然后冷卻至42°C處理2min，離心后冰浴； B、 往步驟A得到的反應(yīng)液中加入濃度為20 ii M的5sites Tri-G引物1 ii L，混合均勻； 接著加入Master Mixture溶液，混合均勻；42°C溫育90min進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄；70°C處理lOmin 終止反應(yīng)；加入l〇〇y L Tris-EDTA緩沖液，得到cDNA ;Master Mixture溶液的組成如下： ddH200. 75 ii l、5XBuffer 1、濃度為 10mM 的 dNTP mixture 1 y 1、濃度為 20 U/ii 1 的 RNase InhibitorO. 5 u 1、濃度為 100U 的 SMARTScribe Reverse Transcriptase In 1 ; 步驟⑵④中所述的PCR的體系為：Premix LA Taq 25 iiL、濃度為lOmM的特異引物 2 u L、濃度為 lOmM 的 5sites Adaptor 2 u L、模板 2 u L，ddH20 補(bǔ)足至 50 u L ; 步驟（2)中所述？0?的條件為：941：1111111;941：3〇8,551：3〇8,721：延伸11*/111111， 30cycles ；72°C lOmin ； 步驟（3)和步驟（5)中所述的釀酒酵母為釀酒酵母Saccharomyces cerevisiae CICC 1917 ； 步驟⑶中所述的PCR的反應(yīng)體系為：Premix LA Taq 25iiL、濃度為10mM的上游引物 2 U L、濃度為10mM的下游引物2 ii L、模板2 ii L，ddH20補(bǔ)足至50 ii L。
10.權(quán)利要求1?7任一項(xiàng)所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌的應(yīng)用，其特 征在于：所述利用木糖進(jìn)行乙醇發(fā)酵的釀酒酵母工程菌用于以木糖為原料生產(chǎn)乙醇。
【文檔編號(hào)】C12N15/81GK104328061SQ201410588693
【公開日】2015年2月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月28日
【發(fā)明者】朱明軍, 區(qū)健發(fā), 謝文化 申請(qǐng)人:華南理工大學(xué)