專利名稱：一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，屬于制藥技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
恩諾沙星化學(xué)名稱為I-環(huán)丙基-6-氟-4-氧代-I，4-二氫-7-(4-乙基-I-哌嗪基)-3_喹啉羧酸，具有廣譜、高效、低殘留、低毒、藥代動力學(xué)特征好、作用機制獨特、半衰期長、組織分布廣等優(yōu)點。在臨床應(yīng)用范圍比較廣泛，包括雞支原體、禽大腸桿菌、雞白痢、 多殺性巴氏桿菌、鼠傷寒沙門氏菌、嗜血桿菌、金黃葡萄球菌等，在臨床上常見到是混合感染，應(yīng)用恩諾沙星可以一舉多效；豬大腸桿菌、霉形體性、多殺性巴氏桿菌、豬丹毒、布氏桿菌、鏈球菌、乳腺炎、子宮炎等臨床上應(yīng)用治療效果明顯；針對于牛、羊的大腸桿菌、霉形體肺炎、炭疽、李氏桿菌、乳房炎、子宮炎等應(yīng)用注射液肌注可以完全治愈；犬、兔消化道、呼吸道、泌尿系統(tǒng)、生殖器官感染、外耳炎、心內(nèi)膜炎、綠膿桿菌、骨髓炎等用恩諾沙星可以治療。恩諾沙星在動物機體內(nèi)可以代謝成環(huán)丙沙星，同樣是一種藥效性較好的抗菌素， 因此通過這種方法將恩諾沙星制成脂質(zhì)體，脂質(zhì)體是一種靶向藥物載體，可以將藥物包封在直徑為亞微米或納米的脂質(zhì)體從而延長有效作用時間，提高生物利用度，減少臨床用藥次數(shù)，提高治愈率，增創(chuàng)經(jīng)濟效益。目前的恩諾沙星脂質(zhì)體的包封率和治愈率還有待提高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，以延長藥物的有效作用和半衰期、提高生物利用度。為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其步驟如下I)取2. 5重量份恩諾沙星加入到pH為6. 8-7. 2的緩沖液中充分溶解，制成濃度為2. 5mg/mL的水相，備用；取大豆卵磷脂3 5重量份、膽固醇I重量份、O. 3-0. 5重量份吐溫-80，采用氯仿混合溶解充分得到油相，備用；2)將油相減壓蒸餾除溶劑得到空白磷脂膜，對空白磷脂膜采用硫酸銨溶液沖洗、 水化得到空白脂質(zhì)體，經(jīng)過濾膜過濾處理，備用；3)將步驟2)得到的空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水于37°C恒溫透析5-7 小時，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中加熱至45-55°C，孵化15-25分鐘，得到恩諾沙星脂質(zhì)體粗品；4)將步驟3)得到的粗品進行離心處理，將離心后的沉淀物凍干得到恩諾沙星脂質(zhì)體。步驟I)所述緩沖溶液為PBS緩沖溶液。步驟I)氯仿混合溶解采用超聲波細胞破碎儀輔助處理。步驟2)所述硫酸銨溶液的濃度為300mmol/L。步驟2)所述的濾膜為O. 45微米濾膜。
步驟3)所述透析袋的截留分子量為600Da。步驟4)離心處理條件為4°C、15000轉(zhuǎn)/分鐘離心40分鐘。所述步驟4)采用如下方法替代將步驟3)得到的粗品進行離心處理，向離心后的沉淀物中加入PBS緩沖溶液得到溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體，其中恩諾沙星脂質(zhì)體的濃度為
2.Omg/mL ο本發(fā)明恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法簡單可行，所需設(shè)施簡單，原料易取，在實際生產(chǎn)中容易實施。恩諾沙星作用在臨床得到廣泛的認可，抗菌譜廣、組織分布廣、針對于細菌性疾病效果良好，本發(fā)明通過將恩諾沙星制成脂質(zhì)體的形式，不僅提高生物利用度，延長半衰期，脂質(zhì)體形式安全可靠、無毒副作用、生理生化性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點，可以在臨床上廣泛應(yīng)用。本發(fā)明制備得到的溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體，經(jīng)過無菌處理之后在4°C保存，而采用凍干處理的凍干型恩諾沙星脂質(zhì)體可以在常溫下保存。
具體實施例方式實施例I本實施例的恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法采用如下步驟I)水相的制備取2. 5g精制恩諾沙星原粉，加入到pH7. 2的PBS緩沖液中充分溶解，制成濃度為2. 5mg/mL的水相,備用；油相的制備取大豆卵磷脂3g、膽固醇lg、0. 3g吐溫-80、氯仿適量混合溶解，經(jīng)過常溫超聲波細胞破碎儀短時間作用，作用時間3s，間隔時間3s，使其充分溶解，得到油相；2)將油相經(jīng)過水溫60°C旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)作用15min制得空白磷脂膜，然后向空白磷脂膜加入300mmol/L硫酸銨溶液充分沖洗，水化得到空白脂質(zhì)體，經(jīng)O. 45微米濾膜過濾處
理，備用;3)將上述步驟中的空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水(O. 85% )于37°C恒溫透析5h，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中，加熱至45°C孵化15min，即制成恩諾沙星脂質(zhì)體粗品；4)將粗品經(jīng)過4°C、15000r/min高速離心40min，留其沉淀加入PBS緩沖液制得溶劑型恩諾沙星脂質(zhì)體溶液，濃度為2. Omg/mL ；5)可以將4)步驟中的溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體進一步濃縮，經(jīng)真空凍干，可以制得凍干型恩諾沙星脂質(zhì)體，凍干制劑不僅保存時間長，而且便于運輸；也可以將步驟4)的離心沉淀直接真空凍干得到凍干型恩諾沙星脂質(zhì)體。實施例2本實施例的恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法采用如下步驟I)水相的制備取2. 5g精制恩諾沙星原粉，加入到pH6. 8的PBS緩沖液中充分溶解，制成濃度為2. 5mg/mL的水相,備用；油相的制備取大豆卵磷脂4g、膽固醇lg、0. 4g吐溫-80、氯仿適量混合溶解，經(jīng)過常溫超聲波細胞破碎儀短時間作用，作用時間3s，間隔時間3s，使其充分溶解，得到油相；2)將油相經(jīng)過水溫70°C旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)作用20min制得空白磷脂膜，然后向空白磷脂膜加入300mmol/L硫酸銨溶液充分沖洗，水化得到空白脂質(zhì)體，經(jīng)O. 45微米濾膜過濾處
理，備用;
3)將上述步驟中的空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水(O. 85% )于37°C恒溫透析6h，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中，加熱至50°C孵化20min，即制成恩諾沙星脂質(zhì)體粗品；4)將粗品經(jīng)過4°C、15000r/min高速離心40min，留其沉淀加入PBS緩沖液制得溶劑型恩諾沙星脂質(zhì)體溶液，濃度為2. Omg/mL ；5)可以將4)步驟中的溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體進一步濃縮，經(jīng)真空凍干，可以制得凍干型恩諾沙星脂質(zhì)體，凍干制劑不僅保存時間長，而且便于運輸。實施例3本實施例的恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法采用如下步驟I)水相的制備取2. 5g精制恩諾沙星原粉，加入到pH7的PBS緩沖液中充分溶解，制成濃度為2. 5mg/mL的水相,備用；油相的制備取大豆卵磷脂5g、膽固醇lg、0. 5g吐溫-80、氯仿適量混合溶解，經(jīng)過常溫超聲波細胞破碎儀短時間作用，作用時間3s，間隔時間3s，使其充分溶解，得到油相；2)將油相經(jīng)過水溫80°C旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)作用25min制得空白磷脂膜，然后向空白磷脂膜加入300mmol/L硫酸銨溶液充分沖洗，水化得到空白脂質(zhì)體，經(jīng)O. 45微米濾膜過濾處
理，備用;3)將上述步驟中的空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水(O. 85% )于37°C恒溫透析7h，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中，加熱至55°C孵化25min，即制成恩諾沙星脂質(zhì)體粗品；4)將粗品經(jīng)過4°C、15000r/min高速離心40min，留其沉淀加入PBS緩沖液制得溶劑型恩諾沙星脂質(zhì)體溶液，濃度為2. Omg/mL ；5)可以將4)步驟中的溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體進一步濃縮，經(jīng)真空凍干，可以制得凍干型恩諾沙星脂質(zhì)體，凍干制劑不僅保存時間長，而且便于運輸。實驗例包封率檢測將恩諾沙星脂質(zhì)體溶液(步驟3)中的粗品)取Iml于離心管中，經(jīng)過 4°C低溫15000r/min離心50min處理之后，取O. 5ml上清液，進行高效液相測定，作為游離的恩諾沙星Cis ;另O. 5ml沉淀作為總的恩諾沙星C總，然后包封率=(C&~Cm)/C& X 100%。動物試驗I :100只5周齡的健康雞進行隨機分成對照、試驗、空白、市售藥組4組， 25只/組，4組試驗雞在新的飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)兩天后，對照、試驗組、市藥組中每只雞人工皮下接種致病性細菌2ml (大腸桿菌)感染雞只，空白接種生理鹽水，自由飲水和采食。表現(xiàn)出臨床癥狀時，精神沉郁，食欲減退，下痢等癥狀時，應(yīng)用精制恩諾沙星脂質(zhì)體進行治療，注射用量lml/Kg直至全愈，同時試驗組和市藥組定點采血，測定藥動學(xué)。動物試驗2 40頭健康豬，體重10±0. 5公斤，公母兼有，隨機分成對照、試驗、空白、市藥組4組，10只/組，4組試驗豬在新的飼養(yǎng)環(huán)境中適應(yīng)兩天后，對照、試驗組、市藥組每頭豬人工接種致病性細菌5ml (大腸桿菌)感染豬，空白組接種生理下水，自由飲水和采含表現(xiàn)出臨床癥狀時，用精制恩諾沙星脂質(zhì)體溶液進行治療，注射用量3ml/Kg直至全愈。同時試驗組和市藥組定點采血，測定藥動學(xué)。動物試驗3 15只實驗級小白鼠，隨機分成對照組、試驗組I、試驗組2，在屏障系統(tǒng)中飼養(yǎng)，自由采食，對照組注射生理鹽水3ml ;試驗組I注射精制恩諾沙星脂質(zhì)體溶液3ml ； 試驗組2 口服精制恩諾沙星脂質(zhì)體溶液5ml，飼養(yǎng)一周，觀察并記錄臨床情況。具體的試驗結(jié)果見表I 表4所示表I實施例I 3恩諾沙星脂質(zhì)體的包封率
權(quán)利要求
1.一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于其步驟如下1)取2.5重量份恩諾沙星加入到pH為6. 8-7. 2的緩沖液中充分溶解，制成濃度為 2. 5mg/mL的水相，備用；取大豆卵磷脂3 5重量份、膽固醇I重量份、O. 3-0. 5重量份吐溫-80，采用氯仿混合溶解充分得到油相，備用；2)將油相減壓蒸餾除溶劑得到空白磷脂膜，對空白磷脂膜采用硫酸銨溶液沖洗、水化得到空白脂質(zhì)體，經(jīng)過濾膜過濾處理，備用；3)將步驟2)得到的空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水于37°C恒溫透析5-7小時，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中加熱至45-55°C，孵化15-25分鐘，得到恩諾沙星脂質(zhì)體粗品；4)將步驟3)得到的粗品進行離心處理，將離心后的沉淀物凍干得到恩諾沙星脂質(zhì)體。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟I)所述緩沖溶液為PBS緩沖溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟I)氯仿混合溶解采用超聲波細胞破碎儀輔助處理。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟2)所述硫酸銨溶液的濃度為300mmol/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟2)所述的濾膜為O. 45微米濾膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟3)所述透析袋的截留分子量為600Da。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于步驟4)離心處理條件為4°C、15000轉(zhuǎn)/分鐘離心40分鐘。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述步驟4)采用如下方法替代將步驟3)得到的粗品進行離心處理，向離心后的沉淀物中加入PBS緩沖溶液得到溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于所述溶液型恩諾沙星脂質(zhì)體的濃度為2. Omg/mL。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種恩諾沙星脂質(zhì)體的制備方法，1)取2.5重量份恩諾沙星加入緩沖液制成水相；取大豆卵磷脂3～5重量份、膽固醇1重量份、0.4重量份吐溫-80，采用氯仿混合溶解充分得到油相；2)將油相減壓蒸餾除溶劑得到空白磷脂膜，對空白磷脂膜采用硫酸銨溶液沖洗、水化得到空白脂質(zhì)體；3)將空白脂質(zhì)體放入透析袋中，利用生理鹽水于37℃恒溫透析5-7小時，然后將透析后的空白脂質(zhì)體加入到水相中加熱至45-55℃，孵化15-25分鐘，離心處理將沉淀物凍干得到恩諾沙星脂質(zhì)體。本發(fā)明通過將恩諾沙星制成脂質(zhì)體的形式，不僅提高生物利用度，延長半衰期，脂質(zhì)體形式安全可靠、無毒副作用、生理生化性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點，可以在臨床上廣泛應(yīng)用。
文檔編號A61P31/04GK102600078SQ20121000362
公開日2012年7月25日 申請日期2012年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月6日
發(fā)明者吳紅云, 李建正, 郭俊清 申請人:鄭州后羿制藥有限公司