專利名稱：化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-O-β-D ...的制作方法
化合物(20R, 24R) -24，25-16，23-23，27-三環氧-12- ZJ先 氧基-9，19-環羊毛留烷-3-0- β -D-吡喃木糖甙在制藥中
的應用所屬領域本發明屬于藥物學領域，具體地，涉及ー種從升麻中提取的化合物DA即(20R，24R) -24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3_0_ β -D-吡喃木糖式[(20R,24R)-24，25-16，23-23，27-triepoxy-12-acetoxyl-9,19-CycIoIanostano1-3-0-β -D-xylopyranoside]在制備抗腫瘤藥物中的應用,特別是在制備抗乳腺癌的藥物中的應用。
背景技術：
升麻是我國十分常用的著名中藥，主要為毛茛科植物三葉升麻Cimicifugaheracleifolia Kom、興安升麻 C. dahurica Maxim、升麻或綠升麻 C. foetida L.的干燥根莖。這三種藥用植物的根莖，已經作為中藥升麻藥材，收載入《中華人民共和國藥典》(2010年版)。升麻具有發表透疹，清熱解毒，升舉陽氣的功效；常被用于風熱頭痛，齒痛，ロ瘡，咽喉腫痛，麻疫不透，陽毒發斑，脫肛，子宮脫垂等病癥。升麻Cimicifuga foetida L.主要產于云南、貴州、四川、湖北等地，是大量栽培或野生的常用中藥材。同屬植物黑升麻(Cimicifuga racemosa L.),又稱蛇根草,在歐美國家也有很長的使用歷史。印地安人飲用煎煮的黑升麻藥汁解除疲勞，治療喉痛、關節炎與毒蛇咬傷等癥，同時也用于治療一些婦科疾病，并在1820-1926年被收入到美國藥典。英國也將黑升麻載入英國草藥典，1749年Linnaeus將黑升麻收入《Materia Medica》，20世紀初成為順勢療法的主要藥物之一。升麻屬植物的化學成分和藥理活性研究一直是國內外研究熱點。近十年來從其中分離得到三萜及其苷類、苯丙素類、色酮及其他類型化合物200多個。國際上對升麻中化學成分的研究主要集中在其三貼皂苷類成份上，對其藥理活性研究則以類雌激素、抗骨質疏松為主。在德國、日本、美國等發達國家都分別開發出了治療更年期綜合癥和骨質疏松癥的藥物。與國際上研究的熱點不同，本發明為了拓展升麻三萜化合物研究的新領域，充分利用云南省升麻資源，開發其新用途。

發明內容
本發明g在提供一種從升麻中提取的化合物DA即(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛留烷-3-0-β -D-吡喃木糖甙[(20R, 24R) -24,25-16，23-23，27-triepoxy-12-acetoxyl-9,19-CycIoIanostano1-3-0-β -D-xylopyranoside]在制備抗腫瘤藥物中的應用，以及化合物DA的制備方法。
本發明的上述目的是用下面的技術方案加以實現的化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-0-β -D-吡喃木糖甙在制備抗腫瘤藥物中的應用。
化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基_9，19-環羊毛甾烷-3-0-0 -D-吡喃木糖甙在制備抗乳腺癌藥物中的應用。化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基_9，19-環羊毛甾燒-3-0-0-D-卩比喃木糖式的制備方法,取升麻Cimicifuga foetida L.干燥根莖，粉碎后用80%甲醇提取三次，每次4小時；80%甲醇提取液過濾除去藥渣后，減壓濃縮至蒸不出甲醇；再加一定量的水稀釋之后，用石油醚萃取2-3次，回收石油醚后，濃縮得到石油醚提取部位；然后水層再用氯仿萃取2-3次，回收氯仿，濃縮得到氯仿提取部位；氯仿提取部位用硅膠柱層析分離，洗脫液用40 I的氯仿甲醇或氯仿丙酮反復洗脫，洗脫后結晶純化得化合物(20R, 24R) -24， 25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基_9，19-環羊毛甾燒-3-0- ^ -D-卩比喃木糖式。化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基_9，19-環羊毛甾燒-3-0-0-D-卩比喃木糖式的制備方法,取升麻Cimicifuga foetida L.干燥根莖，粉碎后用80 %的甲醇水溶液90°C回流提取3次，提取液除去大部分甲醇后，分別用石油醚，氯仿，正丁醇萃取；回收溶劑后，得石油醚部分、氯仿部分、正丁醇部分；氯仿部分用硅膠拌樣，硅膠層析；用I : 0，40 1,20 1,10 I的氯仿甲醇梯度洗脫，TLC檢測合并相同部分，得到四個組分Fr. A-D;其中Fr. B硅膠拌樣，硅膠層析柱，常壓層析分離，用40 I氯仿甲醇反復洗脫層析，得到化合物(20R, 24R) -24, 25-16, 23-23, 27-二環氧-12-乙酸氧基-9,19-環羊毛留烷-3-0-0 -D-吡喃木糖甙。本發明的化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基-9，19-環羊毛留烷-3-0-0 -D-吡喃木糖甙(簡稱DA)可直接作為藥物使用，其余輔料為藥物學上可接受的，對人和動物無毒和惰性的藥用載體或賦形劑。所述的藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、超填料以及藥物制品輔劑。將所述的有效提取物或有效部位以單位體重服用量的形式使用。本發明的藥物可經口服和口腔噴霧兩種形式給藥。口服可用其固體或液體制劑，如粉劑、片劑、糖衣片劑、膠囊、酊劑、糖漿、滴丸劑
坐寸o口腔噴霧可用其固體或液體制劑。本發明藥物可用于治療和預防抗腫瘤，特別用于治療乳腺癌疾病。本發明藥物具有療效非常顯著，起效快，服藥量低，方便患者等優點。


圖I :各個組別裸鼠照片，圖IA模型對照組；圖IB他莫昔芬組；圖IC化合物DA高劑量；圖ID化合物DA中劑量；圖IE化合物DA低劑量；圖2 :各個組別腫瘤照片，圖2A模型對照組；圖2B他莫昔芬組；圖2C化合物DA高劑量；圖2D化合物DA中劑量；圖2E化合物DA低劑量。
具體實施例方式下面結合附圖，用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但并不以此來限定本發明。
實施例1 :化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-0-β -D-吡喃木糖甙(DA)的分離制備1、植物特征和樣品來源綠升麻Cimicifuga foetida L.分布于我國西藏、云南、四川、甘肅、陜西、河南西部和山西等省份。生于海拔1700-3500米間陰濕的山地林緣林中或路旁的草叢中。為多年生草本植物，根狀莖粗壯，堅實而稍帶木質，外皮黒色，生多數細根。莖単一，常高大，直立，圓柱形，通常在上部少數分枝。葉為一回至三回三出或近羽狀復葉，有長柄；小葉卵形、菱形或狹橢圓形，邊緣具有粗鋸齒。花序為總狀花序，通常2-30條集成圓錐狀花序。花毎年7-8月開放，白色，花瓣狀，倒卵狀圓形。種子少數，橢圓形至狹橢圓形，黃褐色，通常四周生膜質的鱗翅，背、腹面的橫向鱗翅明顯或不明顯，9-10月成熟。升麻(Cimicifuga foetida L.)植物樣品2006年采自云南省麗江市玉龍縣；植物標本由中科院昆明植物研究所裴盛基研究員鑒定。2、化合物DA的分離制備干燥升麻根莖10公斤，粉碎后用80%的甲醇水溶液90°C回流提取3次，提取液除去大部分甲醇后，分別用石油醚，氯仿，正丁醇萃取。回收溶劑后，得石油醚部分50克，氯仿部分900克，正丁醇部分500克。氯仿部分900克用I公斤硅膠拌樣，I公斤硅膠層祈。氯仿甲醇(I 0,40 1,20 1,10 I)梯度洗脫，TLC檢測合并相同部分，得到四個組分Fr.A-D。其中Fr.B(300克)，300克硅膠拌樣，I公斤硅膠層析柱，常壓層析分離，用氯仿甲醇(40 I)反復洗脫層析，得到化合物DA(LOg)。3.化合物DA的結構表征化合物DA =C37H56O10,無色針晶，mp 253-254 で，[a ]D = -61. 2。(c = O. 255，CHCl3-CH3OHd I))。氫核磁共振譜數據δ (ppm)(溶劑 Py_d5) :5. 10 (1H，brd, J = 5. 3Hz，12-H)；4. 23 (1H, brd, J = 6. 7Hz,16-H),4. 05(1H, d, J = 10. 4Hz，26-H)，4. 04(1H，s，24-H)，3. 62 (1H, d, J = 10. 4Hz,26-H) ,3. 44 (1H, dd, J = 10. 8，3. 4Hz，3_H) ；1. 45 (3H, s，27_H)，I. 40 (3H, s, 18-H), I. 29 (3H, s，29-H)，I. 00 (3H，d, J = 6. 7Hz，21-H)，0. 99 (3H，s，30_H)，0. 83 (3H, s，28-H)，0. 52 (1H, d, J = 3. 8Hz, 19-H)，0. 19 (1H, d, J = 3. 8Hz, 19-H)。12_C0CH3部分2. 12 (3H, s，2，-COCH3)。木糖部分:4. 83 (1H, d, J = 7. 2Hz，I，-H)，4· 04 (1Η, t, J =10·4Ηζ，2’ -H), 4. 10(lH，t，J = 8·6Ηζ，3’ -H)，4· 20 (lH，m，4’ -H) ;3.71(lH，t，J = 10. 4Hz,5’ -H)，3. 35 (1Η, dd, J = 4· 2，10. 4Ηζ，5’ -H)。碳核磁共振譜數據δ (ppm)(溶劑 Py_d5) 105. 9 (s, 23-C)，88. I (d，3_C)，77. 0 (d，12-C)，74. 5 (d, 16-C)，68. I (t, 26—C)，62. 5 (s, 25—C)，62. 3 (d, 24—C)，56. 2 (d, 17—H)，48. 8 (s, 13-C) ,47. 9(s, 14-H)，47. 0 (s，5_C)，45. 6 (d，8_C)，44. 2(t, 15-C)，41. 22(s，4_C)，37. 6(t,22-C) ,36. 6(t, 11—C), 31. 9 (t, 1_C), 29. 9 (t, 2_C), 29. 8 (t, 19—C), 26. 7 (s, 10-C)，25. 7 (t, 7-C), 25. 7 (q, 29—C), 23. 3 (d, 20—C) ,21. 3 (q,21-C), 20. 3 (t, 6_C), 20. I (s, 9_C)，19. 6(q，28_C)，15. 3(q，30_C)，14. 3 (q, 18-C)，13. 4(q，27_C)。12_C0CH3 部分:171. 6 (s，CO)，21. 6 (q, COCH3)。木糖部分:107. 5 (d，I，_C)，75. 6 (d，2，_C)，78. 6 (d，3，_C)，71. 2 (d，4，_C)，67. l(t，5，-C)。
4.化合物DA的化學結構
權利要求
1.化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-0-β -D-吡喃木糖甙在制備抗腫瘤藥物中的應用。
2.化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-0- β -D-吡喃木糖甙在制備抗乳腺癌藥物中的應用。
3.化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾燒-3-0-β-D-卩比喃木糖式的制備方法,取升麻Cimicifuga foetida L.干燥根莖,粉碎后用80%甲醇提取三次，毎次4小吋；80%甲醇提取液過濾除去藥渣后，減壓濃縮至蒸不出甲醇；再加一定量的水稀釋之后，用石油醚萃取2-3次，回收石油醚后，濃縮得到石油醚提取部位；然后水層再用氯仿萃取2-3次，回收氯仿，濃縮得到氯仿提取部位；氯仿提取部位用硅膠柱層析分離，洗脫液用40 I的氯仿甲醇或氯仿丙酮反復洗脫，洗脫后結晶純化得化合物(20R，24R) -24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾焼-3-0- β -D-卩比喃木糖式。
4.化合物(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-こ酰氧基-9，19-環羊毛甾燒-3-0-β-D-卩比喃木糖式的制備方法,取升麻Cimicifuga foetida L.干燥根莖,粉碎后用80 %的甲醇水溶液90°C回流提取3次，提取液除去大部分甲醇后，分別用石油醚，氯仿，正丁醇萃取；回收溶劑后，得石油醚部分、氯仿部分、正丁醇部分；氯仿部分用硅膠拌樣，硅膠層祈；用I : 0，40 1,20 1,10 I的氯仿甲醇梯度洗脫，TLC檢測合并相同部分，得到四個組分Fr. A-D;其中Fr. B硅膠拌樣，硅膠層析柱，常壓層析分離，用40 I氯仿甲醇反復洗脫層析，得到化合物(20R, 24R) -24, 25-16, 23-23, 27-ニ環氧-12-こ酸氧基-9,19-環羊毛留烷-3-0-β -D-吡喃木糖甙。
全文摘要
一種從升麻中提取的化合物DA即(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-三環氧-12-乙酰氧基-9，19-環羊毛甾烷-3-O-β-D-吡喃木糖甙[(20R，24R)-24，25-16，23-23，27-triepoxy-12-acetoxyl-9，19-Cyclolanostanol-3-O-β-D-xylopyranoside]在制備抗腫瘤藥物中的應用，特別是在制備抗乳腺癌的藥物中的應用，以及化合物DA的制備方法。
文檔編號A61P35/00GK102614208SQ20121004430
公開日2012年8月1日 申請日期2012年2月25日 優先權日2012年2月25日
發明者周琳, 年寅, 李忠榮, 王海燕, 邱明華, 陸璐 申請人:中國科學院昆明植物研究所