專利名稱：一種促愈合生物膜及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種促愈合生物膜，具體地說是以殼聚糖衍生物和芝麻油為主要原料制備得到的用于促進創面愈合的生物膜，屬于生物醫用材料領域。
背景技術：
創傷是正常皮膚(組織)在外界致傷因子如外科手術、外力、熱、電流、化學物質、低溫以及機體內在因素如局部血液供應障礙等作用下所導致的損害。常見的創傷有手術切開、擦傷、燒傷、供皮區、褥瘡、下肢血管性潰瘍、糖尿病潰瘍以及其他難愈合性創面等。創傷 的形成和存在，對機體的局部乃至全身的功能將產生重大的影響。為了加速創傷的愈合，減少創面的感染，一般采用敷料覆蓋和保護的方法進行治療。傳統的外科創傷敷料是醫用脫脂棉和紗布，它具有強大而快速地吸收傷口創面滲出液的能力，對創傷的治療能起到一定的促進作用，但存在著會與創面粘連、換藥時會導致創面二次損傷之不足。理想的醫用敷料應具備以下性能(I)保持創面濕潤環境，利于傷口愈合；(2)能夠有效吸收創面滲出物，減少感染；(3)不但具有良好的通透性，而且能夠有效阻隔細菌和有害粒子的入侵；(4)去除敷料時不會與傷口發生粘連，以免造成二次損傷；(5)具有抗菌、消炎作用，儲存方便，使用方便；(6)最好有止血、止痛等作用，可促進肉芽生長和皮膚再生，加速愈合，減少疤痕。隨著社會和醫學的發展，具有生物活性的功能性醫用敷料是治療創面的發展趨勢，其中醫用高分子生物材料、含銀敷料將成為醫用敷料研發的熱點。殼聚糖或其衍生物屬于一種高分子生物可降解材料，是自然界中唯一帶正電荷的材料，具有良好的促愈合、抗菌、止血和鎮痛等作用，將其制備成膜、海綿、無紡布或凝膠制劑用于治療創面，更是目前開發生物敷料的熱點。但是殼聚糖或其衍生物凝膠制劑，具有吸收傷口滲出液少、換藥困難等不足。而單純的殼聚糖或其衍生物膜、海綿或無紡布制劑則因力學性能差，遇到液體即溶化，不利于換藥等缺點，使用上受到了限制。目前在研或上市的殼聚糖或其衍生物制劑多為加入化學交聯劑交聯后的產物，存在著交聯劑對機體危害的潛在風險。所以將殼聚糖或其衍生物與其他材料復合，開發成復合生物醫用敷料已成為趨勢。芝麻油是中國傳統上用于治療燙傷、燒傷的物質。另外，芝麻油無毒，來源廣泛，價格便宜，使用簡單，在臨床中應用方便、安全，是療效極佳的一種制劑。

發明內容
本發明的目的在于提供一種促愈合生物膜，具體地說是提供一種將現代公認的促愈合物質——7jC溶性殼聚糖衍生物與傳統的治療燒傷物質——芝麻油組成新配方，共混后，經離子交聯，制成的用于覆蓋創面、加速愈合的生物膜。該膜具有一定的柔韌性和強度，吸收滲出液后可形成整體凝膠，不會和創面發生粘連，換藥方便且不產生二次損傷，還具有保持濕潤作用、抗菌作用、減少疤痕等優點。本發明的另一目的在于提供一種上述促愈合生物膜的制備方法。
為了實現上述目的，本發明提供的促愈合生物膜，它是將殼聚糖衍生物溶液和芝麻油共混后，進行離子交聯，然后干燥成膜制得。所述的殼聚糖衍生物為水溶性殼聚糖衍生物，如羧甲基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、羥丙基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基甲殼素、羥乙基甲殼素、殼聚糖季銨鹽中的一種或一種以上，優選羧甲基殼聚糖。所述的殼聚糖衍生物溶液，使用蒸餾水、生理鹽水或磷酸緩沖液作為溶劑配制而成，其中殼聚糖衍生物濃度為2% -8% (m/v)。所述的芝麻油加入量為殼聚糖衍生物溶液的1^-6% (m/m)。所述的離子交聯，其離子來自氯化鈣、碳酸鈣、葡萄糖酸鈣、乙酸鋅、乳酸鋅、葡萄糖酸鋅、乙二胺四乙酸鋅、蘋果酸鋅或檸檬酸鋅中的一種或一種以上，其濃度占殼聚糖衍生物/芝麻油共混液的O. 05-2%。所述的干燥方法是將共混液灌注到淺不銹鋼盤中，使共混液厚度在3-10_范圍， 然后通過熱風循環烘干或真空干燥的方法制得。干燥后的膜厚度在O. 1-0. 6mm范圍。根據臨床需求裁切為不同大小的片狀，封裝于內包裝后使用6tlCo輻照滅菌。根據本發明的制備方法，獲得了一種促愈合生物膜，其特征在于適用于各種創面的治療，包括手術創口、擦傷、燒傷、供皮區、褥瘡、糖尿病潰瘍以及其他難愈合性創面。本發明獲得了一種理想的促愈合生物膜敷料，其優點在于(I)殼聚糖衍生物與芝麻油的促愈合作用機制不同，兩者共混后促愈合療效將協同增強，并減少疤痕形成。殼聚糖衍生物的促愈合機制在于促進成纖維細胞的遷移，對基質細胞有趨化、遷移、激活的作用，并加速細胞增殖和組織重塑的過程，促進皮膚組織修復，有加速傷口愈合和止血作用。芝麻油中多種成分均有促愈合功能，例如其中的油酸、亞油酸等不飽和脂肪酸，具有疏水性，可潤滑粘膜，隔絕外來刺激，減輕疼痛，促使創面愈合；其中的芝麻酚、生育酚、芝麻素和褐色物質等成分具有極強的抗氧化性、促細胞分裂再生功能；其中的維生素E具有抗氧化作用，與肌肉營養有關，能維持毛細血管的通透性，改善周圍循環。(2)兩種物質共混后，殼聚糖衍生物中氨基等官能團可與芝麻油中不飽和脂肪酸中羧基等官能團發生結合，再加上各分子間的氫鍵作用，生物膜的力學性能明顯提高，避免了化學交聯中化學交聯劑帶來的潛在危害。(3)殼聚糖衍生物本身具有的抗菌消炎功能賦予了促愈合生物膜具有抗菌消炎功效。(4)芝麻油的保濕作用，加上膜吸收滲出液后形成的凝膠，可為傷口提供促愈合的濕潤環境。(5)促愈合生物膜對傷口滲出液具有強大的吸收作用，還具有一定的柔韌性和強度，膜在吸收滲出液后可溶脹成整體性凝膠，對傷口有潤滑作用，不會和創面發生粘連，換藥方便且不產生二次損傷。


圖I為促愈合生物膜。圖2為促 愈合生物膜吸收液體后，形成具有柔韌性的整體性凝膠。檢測指標及檢測方法I.膜的吸水量(I)將已知質量的樣品置于培養皿內；⑵加入試驗液(溶液中含有142mmol鈉離子和2. 5mmol的鈣離子)，使其質量為供試材料的40倍；(3)移入恒溫箱內，在37°C下保持4h和12h ; (4)用鑷子夾持樣品一角或一端,懸垂30s,稱重。2.細胞毒性試驗依照GB/T16886. 5-2003 (浸提液法)規定的方法進行細胞毒性試驗。3.抑菌試驗首先制備混菌培養基平板，用接種環分別挑取少許已培養好的金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌斜面培養基物于無菌生理鹽水5ml中，制成菌懸液。取菌懸液I. Oml加到已滅菌干燥的培養皿中，加入冷卻至50°C左右的普通營養肉湯瓊脂培養基,搖勻，待充分冷凝后備用。然后進行抑菌試驗，將樣品膜剪切成I. Ocm的圓片，貼于混菌培養基平板上，35-37°C倒置培養20-24小時，觀察細菌生長情況。4.動物促愈合試驗試驗對象選擇SD大鼠(250g左右)作為實驗動物。試驗過程每只大鼠用3%戊巴比妥30mg/kg腹腔注射麻醉后俯臥固定，背部剪毛，消毒鋪巾，在脊柱兩側各I. 5cm處環形全層切除皮膚，形成直徑9-1 Imm的圓形皮膚缺損創面4個。覆蓋敷料并固定，分別于皮膚創傷后I天、2天、3天、5天、7天、10天及12天等時間點觀測。將大鼠單只飼養，自由攝食、水。每天換藥并觀察大鼠創面情況。通過記錄各組實驗動物的愈合時間(手術后開始至創面直徑小于Imm)，計算出平均愈合時間。觀察敷料的吸收滲出液情況、換藥情況以及肉芽組織生長情況。
具體實施例方式現結合下列實例來進一步描述本發明，下列實施例旨在進一步舉例說明本發明制備方法，這些實施例不以任何方式限制本發明待批權利要求的范圍。實施例I :促愈合生物膜的制備將羧甲基殼聚糖溶解于磷酸緩沖液中，制成5% (W/V)的膠液。加入芝麻油，使芝麻油濃度為I. 5% (W/V)。加入氯化鈣，使其在共混液中的濃度為0.8%?；旌暇鶆颉９嘧⒂诓讳P鋼平底淺盤內，厚度為5_，于熱風循環箱內，40°C干燥10h，形成膜。將膜裁切成適當大小，封裝于內包裝袋內，用30Kgy的鈷60照射滅菌，即得促愈合生物膜。實施例2 :促愈合生物膜的制備將羧甲基殼聚糖溶解于磷酸緩沖液中，制成3% (W/V)的膠液。加入芝麻油，使芝麻油濃度為2. 5% (W/V)。加入葡萄糖酸鋅，使其在共混液中的濃度為0.5%。混合均勻。灌注于不銹鋼平底淺盤內，厚度為7mm，于熱風循環箱內，37°C干燥16h，形成膜。將膜裁切成適當大小，封裝于內包裝袋內，用25Kgy的鈷60照射滅菌，即得促愈合生物膜。對比例I :純殼聚糖衍生物膜的制備將羧甲基殼聚糖溶解于磷酸緩沖液中，制成5% (W/V)的膠液。混合均勻。灌注于不銹鋼平底淺盤內，厚度為5_，于熱風循環箱內，40°C干燥10h，形成膜。將膜裁切成適當大小，封裝于內包裝袋內，用30Kgy的鈷60照射滅菌，即得。對比例2 :純殼聚糖衍生物膜的制備將羧甲基殼聚糖溶解于磷酸緩沖液中，制成3% (W/V)的膠液。灌注于不銹鋼平底淺盤內，厚度為7mm，于熱風循環箱內，37°C干燥16h，形成膜。將膜裁切成適當大小，封裝于內包裝袋內，用25Kgy的鈷60照射滅菌，即得。對實施例I、實施例2、對比例I、對比例2以及市售的紗布敷料進行相關項目的檢測，其吸水量、細胞毒性試驗和抑菌試驗結果見表1，動物促愈合試驗結果見表2。表I
樣品名稱~吸水量細胞毒性試驗抑菌試驗
實施例I 第4h的吸水呈為膜重 I級抑制圈S徑為I. 7cm。
迠的11.5倍；第12h 的吸水m為膜IE m的 13. 6 倍。
實施例2 第4h的吸水為膜重 I級抑制圈直徑為I. Icm0
呈的10.2倍；第12h 的吸水M為膜重顯的 11. 8 倍。
對比例I 4h后，膜的整體性消 I級抑制圈直徑為I. 7crao
火，用鑷子無法夾起。
對比例2 4h后，膜的整體性消Tm抑制圈直徑為I. 5cmο
火，HJ鑷+無法夾起。I
________I
市枵紗布敷第4h的吸水呈為膜重I級無抑歯圈I
I
料W；的15.1倍；第12hI
的吸水M為膜重的I
15. 5 倍。_I表 權利要求
1.一種促愈合生物膜，其特征在于它是將殼聚糖衍生物溶液和芝麻油共混后，進行離子交聯，然后干燥成膜制得。
2.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于所述的殼聚糖衍生物為水溶性殼聚糖衍生物，如羧甲基殼聚糖、琥珀酰殼聚糖、羥丙基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基甲殼素、輕乙基甲殼素、殼聚糖季銨鹽中的一種或一種以上，優選羧甲基殼聚糖。
3.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于所述的殼聚糖衍生物溶液，使用蒸餾水、生理鹽水或磷酸緩沖液作為溶劑配制而成，其中殼聚糖衍生物濃度為2% -8% (m/V)。
4.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于所述的芝麻油加入量為殼聚糖衍生物溶液的1% -6% (m/m)。
5.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于所述的離子交聯，其離子來自氯化鈣、碳酸鈣、葡萄糖酸鈣、乙酸鋅、乳酸鋅、葡萄糖酸鋅、乙二胺四乙酸鋅、蘋果酸鋅或檸檬酸鋅中的一種或一種以上，其濃度占殼聚糖衍生物/芝麻油共混液的0. 05-2%。
6.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于所述的干燥方法是將共混液灌注到淺不銹鋼盤中，使共混液厚度在3-10_范圍，然后通過熱風循環烘干或真空干燥的方法制得。
7.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于干燥后的膜厚度在0.1-0. 6mm范圍。
8.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于根據臨床需求裁切為不同大小的片狀，封裝于內包裝后使用6tlCo輻照滅菌。
9.根據權利要求I所述的促愈合生物膜，其特征在于適用于各種創面的治療，包括手術創口、擦傷、燒傷、供皮區、褥瘡、糖尿病潰瘍以及其他難愈合性創面。
全文摘要
本發明公開了一種促愈合生物膜及其制備方法。該種促愈合生物膜是將殼聚糖衍生物溶液和麻油共混，進行離子交聯，然后干燥成膜制得。該膜具有一定的柔韌性和強度，吸收滲出液后可形成整體凝膠，不會和創面發生粘連，換藥方便且不產生二次損傷，還具有保持濕潤作用、抗菌作用、減少疤痕等優點。該膜促傷口愈合療效明顯，適用于手術創口、擦傷、燒傷、供皮區、褥瘡、糖尿病潰瘍以及其他難愈合創面的治療。
文檔編號A61L15/42GK102813957SQ20121034138
公開日2012年12月12日 申請日期2012年9月14日 優先權日2012年9月14日
發明者韓韋紅, 徐雪英, 王園園 申請人:上海白衣緣生物工程有限公司