一種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，先取大豆磷脂、膽固醇和吐溫80，溶于溶劑中，超聲溶解；30～70℃減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，加入乙醚溶解；將地黃多糖的PBS溶液導(dǎo)入反應(yīng)容器，形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的W/O型乳劑；30～70℃減壓蒸發(fā)形成膠態(tài)后加入PBS，繼續(xù)旋蒸除去有機(jī)溶劑；置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理，使地黃多糖融合到脂質(zhì)體中，得到地黃多糖脂質(zhì)體混懸液；再將混懸液分別擠壓過微孔濾膜，得地黃多糖脂質(zhì)體。本發(fā)明首次將地黃多糖制備成脂質(zhì)體，建立了地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法為逆相蒸發(fā)法，通過響應(yīng)面優(yōu)化，能夠最大可能地節(jié)約原材料同時獲得較高的藥物包封率；結(jié)合超聲作用，使制備的脂質(zhì)體更均一更具穩(wěn)定性。
【專利說明】一種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于藥物制備【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種地黃多糖脂質(zhì)體(Rehmanniaglutinosa polysaccharide liposome, RGPL)的制備方法。【背景技術(shù)】
[0002]地黃在我國有悠久的藥用歷史，地黃常以生地黃和熟地黃2種形式入藥。生地黃具有清熱涼血、養(yǎng)陰生津的作用，熟地黃具有滋陰補(bǔ)血、益精填髓的功效。地黃多糖(Rehmannia glutinosa polysaccharide, RGP)是地黃的主要活性成分之一，具抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功能。然而地黃多糖直接用于臨床，存在著多糖在體內(nèi)代謝快，作用時間短，作用范圍不集中，臨床用量大等缺點(diǎn)。
[0003]脂質(zhì)體(liposomes)是人工合成的雙分子層的單層磷脂或多層可溶性物質(zhì)隔開的呈同心圓的微環(huán)體脂質(zhì)小囊，可包裹各種物質(zhì)及疫苗。進(jìn)入機(jī)體后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬而激活機(jī)體的自身免疫功能，它既是抗原也是免疫佐劑，由于其膜結(jié)構(gòu)致密，抗原不易漏出，能長久的將抗原傳遞給適免疫細(xì)胞，促進(jìn)抗原對抗原提呈細(xì)胞的定向作用。能顯著增強(qiáng)機(jī)體對抗原的免疫應(yīng)答，產(chǎn)生保護(hù)性抗體和細(xì)胞免疫應(yīng)答。通過各種給藥途徑，它還可以使包裹的藥物具有打靶作用，準(zhǔn)確的擊中病變部位、組織和細(xì)胞，從而增強(qiáng)藥物的療效，并具有較大的發(fā)展前景。
[0004]脂質(zhì)體作為新型藥物載體應(yīng)用以來，在中藥制劑中應(yīng)用脂質(zhì)體，可以防止藥物快速降解，延緩藥物釋放而延長藥物在體內(nèi)的作用時間，提高藥物的溶出度和穩(wěn)定性，增加藥物對靶區(qū)的指向性，降低對正常細(xì)胞的毒性，提高藥物的生物利用度。以脂質(zhì)體作藥物包埋，不但能提高藥物的靶向定位作用，還能減少藥物的用量及降低毒副作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]發(fā)明目的:針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，使其能夠最大可能地節(jié)約原材料同時獲得較高的藥物包封率，滿足使用需求。
[0006]技術(shù)方案:為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
[0007]—種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，為逆相蒸發(fā)法，具體包括如下步驟:
[0008]I)取大豆磷脂，膽固醇和吐溫80，溶于溶劑中，超聲使其充分溶解；其中，大豆磷脂與地黃多糖的質(zhì)量比為20~160:1，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2~10:1，大豆磷脂與吐溫80的質(zhì)量比為5~20:1 ;大豆磷脂與溶劑的mg/mL比為20~100:1 ;所述溶劑選自氯仿和甲醇中的一種或兩種；
[0009]2)置于反應(yīng)容器中，30~70°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，當(dāng)容器壁上形成一層均勻的薄膜后，加入乙醚溶解；
[0010]3)將含地黃多糖的PBS溶液(2mg.mL—1)緩慢導(dǎo)入反應(yīng)容器，形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑；[0011]4) 30~70°C減壓蒸發(fā)，形成膠態(tài)后加入PBS，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機(jī)溶劑；
[0012]5)置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理(強(qiáng)度50%，2.5s開，2.5s停，作用lh)，得到地黃多糖脂質(zhì)體混懸液；
[0013]6)再將混懸液分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜，得地黃多糖脂質(zhì)
體，置于4°C保存。
[0014]步驟I)中，大豆磷脂與地黃多糖的質(zhì)量比為100:1。
[0015]步驟I)中，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為8:1。
[0016]步驟I)中，吐溫80與大豆磷脂的質(zhì)量比為1:10。
[0017]步驟I)中，大豆磷脂與溶劑mg/mL比為50:1。
[0018]步驟I)中，溶劑為氯仿與甲醇混合溶液，氯仿與甲醇的體積比為3:1~1:3。
[0019]步驟I)中，氯仿與甲醇的體積比為1:1。
[0020]步驟2)或4)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度均為60°C。
[0021]第一優(yōu)選工藝為:大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比7.66:1，溶劑中氯仿與甲醇體積比為3.01:4.99，大豆磷脂和吐溫80的質(zhì)量比為10.06:1，蒸發(fā)溫度為65.92°C。
[0022]第二優(yōu)選工藝為:大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量8:1，溶劑中氯仿與甲醇體積比為3:5，大豆磷脂和吐溫80比為10:1，蒸發(fā)溫度為66°C。
[0023]本發(fā)明將地黃多糖包封于脂質(zhì)體中，制備出地黃多糖脂質(zhì)體，利用脂質(zhì)體的緩釋作用和靶向作用可以有效維持地黃多糖在機(jī)體內(nèi)的有效濃度，提高其生物利用度。
[0024]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明首次將地黃多糖制備成脂質(zhì)體，建立了地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法為逆相蒸發(fā)法，通過響應(yīng)面優(yōu)化，能夠最大可能地節(jié)約原材料同時獲得較高的藥物包封率；結(jié)合超聲作用，使制備的脂質(zhì)體更均一更具穩(wěn)定性。其中，最佳制備工藝為:膜材比8:1，氯仿與甲醇比為3:5，磷脂和吐溫80比為10:1，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為661:;包封率平均值約為73%。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1是葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線圖；
[0026]圖2是磷脂用量對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0027]圖3是磷脂用量對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0028]圖4是脂藥比對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0029]圖5是脂藥比對RGPL的載藥量影響結(jié)果圖；
[0030]圖6是膜材比對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0031]圖7是膜材比對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0032]圖8是吐溫80與磷脂比對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0033]圖9是吐溫80與磷脂比對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0034]圖10是磷脂與氯仿和甲醇體積和之比對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0035]圖11是磷脂與氯仿和甲醇體積和之比對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0036]圖12是氯仿與甲醇比對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；
[0037]圖13是氯仿與甲醇比對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0038]圖14是旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對RGPL包封率的影響結(jié)果圖；[0039]圖15旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對RGPL載藥量的影響結(jié)果圖；
[0040]圖16是膜材比和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對脂質(zhì)體包封率影響的響應(yīng)面圖；
[0041]圖17是膜材比和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對脂質(zhì)體包封率影響的等高線圖；
[0042]圖18是磷脂吐溫80比和氯仿甲醇比對脂質(zhì)體包封率影響的響應(yīng)面圖；
[0043]圖19是磷脂吐溫80比和氯仿甲醇比對脂質(zhì)體包封率影響的等高線圖；
[0044]圖20是氯仿甲醇比和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對脂質(zhì)體包封率影響的響應(yīng)面圖；
[0045]圖21是氯仿甲醇比和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對脂質(zhì)體包封率影響的等高線圖。【具體實(shí)施方式】
[0046]下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，本【具體實(shí)施方式】在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實(shí)施，應(yīng)理解這些方式僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。
[0047]以下實(shí)施例中所使用的主要藥物、試劑、設(shè)備和計算方法具體如下:
[0048]試驗藥物:地黃多糖(陜西慈緣生物技術(shù)有限公司，生產(chǎn)批號CY120813)。
[0049]主要試劑:大豆磷脂(上海太偉藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號20120304)，膽固醇(天津市博迪化學(xué)有限公司，批號20090908)，魚精蛋白(Sigma，USA,批號P4380)，D-無水葡萄糖，分析純，110833-200904,中國藥品生物制品檢定所，氯化鈉、磷酸氫二鈉(分析純，上海凌峰化學(xué)試劑有限公司)，氯化鉀(分析純，南京化學(xué)試劑廠)，磷酸二氫鉀(分析純，汕頭市西隴化工廠)，95%乙醇、硫酸、精制苯酚，分析純，南京化學(xué)試劑有限公司。
[0050]主要儀器設(shè)備:超聲處理器JAC-500，濟(jì)寧奧波超聲電氣有限公司JY92-1I DN型超聲細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝生物科技有限公司；FA1104N型電子天平，上海精密科學(xué)儀器有限生產(chǎn)公司生產(chǎn)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-52A，上海亞榮生化儀器廠；SHZ-1II型循環(huán)水真空泵，上海亞榮儀器廠；754紫外分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司；離心機(jī)湘儀L-550，湖南湘儀實(shí)驗室儀器開發(fā)有限公司；萬用電爐，天津泰斯特儀器有限公司生產(chǎn)。
[0051]RGPL包封率的測定:采用魚精蛋白凝聚法結(jié)合苯酚-濃硫酸法測定。
[0052]RGPL分離及包封率和載藥量的測定:魚精蛋白凝聚法。吸取空白脂質(zhì)體以及制備的RGPL100 μ L，加入100 μ L魚精蛋白溶液(10mg/mL)，混勻后靜置3min，再加入3mL生理鹽水，離心，4000r.min-1, 30mino取其中上清ImL,加生理鹽水補(bǔ)足至2mL,測其中多糖含量，即得到未包封的RGP含量。對于沉淀，加入0.6mL的TritonX-ΙΟΟ，破乳后，再加入2.6mL的生理鹽水，充分混勻，同樣取ImL的樣，生理鹽水補(bǔ)足至2mL，測其中多糖含量，即為包封的RGP含量。計算制備的RGPL的包封率，公式如下:
[0053]包封率EE% = (1- Cf/C 總)X 100%
[0054]式中Cf為游離多糖量；C@為脂質(zhì)體中包封的多糖與游離多糖之和。
[0055]脂質(zhì)體的載藥量按照下列公式計算:
[0056]載藥量W0= [ (WT — WF) /Wp] X 100%,
[0057]式中:WTS脂質(zhì)體溶液中多糖的總質(zhì)量;WF為游離多糖的質(zhì)量;WP為卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量之和。
[0058]實(shí)施例1乙醇注入法制備RGPL
[0059]稱取0.4g大豆磷脂,0.05g膽固醇和0.1g吐溫80溶于IOmL無水乙醇中，超聲使其充分溶解；在50°C水浴搖床的振蕩下，將20mL的含2mg.mL—1熟地多糖的PBS (pH7.0)溶液緩慢導(dǎo)入前者，保持50°C繼續(xù)振蕩30min ;置于250mL圓底燒瓶中，60°C減壓蒸發(fā)除去乙醇，隨后置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理(強(qiáng)度50%，2.5s開，2.5s停，作用lh)，使RGP充分均勻地融合到脂質(zhì)體中，同時也使得RGPL的粒徑更均一，從而得到RGPL混懸液；再將其分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜，各重復(fù)三次，即得RGPL溶液。置于4°C保存。[0060]經(jīng)計算，該方法制備RGPL包封率為30.495%。
[0061 ] 實(shí)施例2薄膜分散法制備RGPL
[0062]稱取0.4g大豆磷脂,0.05g膽固醇和0.1g吐溫80溶于IOmL氯仿和甲醇(1:1)溶液中，超聲使其充分溶解；置于250mL圓底燒瓶中，60°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，當(dāng)燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜后，導(dǎo)入20mL的含2mg -mL-1熟地多糖的PBS(pH7.0)溶液，60°C減壓蒸發(fā)，使瓶壁薄膜洗脫；25°C水化Ih ;隨后置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理(強(qiáng)度50%，
2.5s開，2.5s停，作用lh)，使RGP充分均勻地融合到脂質(zhì)體中，同時也使得RGPL的粒徑更均一，從而得到RGPL混懸液；再將其分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜，各重復(fù)三次，即得RGPL溶液。置于4°C保存。
[0063]經(jīng)計算，該方法制備RGPL包封率為32.560%。
[0064]實(shí)施例3硫酸銨梯度法制備RGPL
[0065]稱取0.4g大豆磷脂,0.05g膽固醇和0.1g吐溫80溶于IOmL無水乙醇中，超聲使其充分溶解；在50°C水浴搖床的振蕩下，將前者導(dǎo)入10mL10%硫酸銨溶液中，進(jìn)而置于250mL圓底燒瓶中，60°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑；置于PBS (pH7.0)中透析24h ;在50°C水浴搖床的振蕩下，將20mL的含2mg.mL—1熟地多糖的PBS (pH7.0)溶液緩慢導(dǎo)入前者，保持50°C繼續(xù)振蕩30min ;隨后置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理(強(qiáng)度50%，2.5s開，2.5s停，作用Ih),使RGP充分均勻地融合到脂質(zhì)體中，同時也使得RGPL的粒徑更均一，從而得到RGPL混懸液；再將其分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜，各重復(fù)三次，即得RGPL溶液。置于4°C保存。
[0066]經(jīng)計算，該方法制備RGPL包封率為29.545%。
[0067]實(shí)施例4逆相蒸發(fā)法制備RGPL
[0068]稱取0.4g大豆磷脂,0.05g膽固醇和0.1g吐溫80溶于IOmL氯仿和甲醇(1:1)溶液中，超聲使其充分溶解；置于250mL圓底燒瓶中，60°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，當(dāng)燒瓶壁上形成一層均勻的薄膜后，加入乙醚溶解，將20mL的含2mg -mL-1熟地多糖的PBS(pH7.0)溶液緩慢導(dǎo)入前者，形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑，60°C減壓蒸發(fā)，形成膠態(tài)后加入一定量PBS，繼續(xù)旋蒸15min，除去有機(jī)溶劑，隨后置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理(強(qiáng)度50%，2.5s開，2.5s停，作用lh)，使RGP充分均勻地融合到脂質(zhì)體中，同時也使得RGPL的粒徑更均一，從而得到RGPL混懸液；再將其分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、
0.22 μ m的微孔濾膜，各重復(fù)三次，即得RGPL溶液。置于4°C保存。
[0069]經(jīng)計算，該方法制備RGPL包封率為35.296%，高于實(shí)施例1_3的制備方法。故而，逆相蒸發(fā)法為制備RGPL的最適方法。
[0070]實(shí)施例5空白脂質(zhì)體的制備
[0071]空白脂質(zhì)體的制備方法分別同實(shí)施例1至實(shí)施例4，分別將其中20mL含2mg -mL-1熟地多糖的PBS (ρΗ7.0)溶液換成20mL PBS (pH7.0)溶液即可。S[0072]實(shí)施例6標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作
[0073]精密稱取105°C干燥至恒重的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品IOOmg,定容至IOOmL,得Img.mL—1的儲備液，吸取IOmL儲備液定容至IOOmL,得0.1mg ·ml-1的標(biāo)準(zhǔn)液。精密吸取標(biāo)準(zhǔn)液0.2,0.4、
0.6,0.8、1.0mL至試管中，加蒸餾水補(bǔ)足至2mL，以空白脂質(zhì)體的透析液做為空白對照，吸取2mL至試管中,各加入5%精制苯酹ImL,濃硫酸5mL,混勻后熱水浴加熱IOmin,冷卻后在分光光度計上測定490nm處的吸光度值，以吸光度為縱坐標(biāo)，葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液濃度為橫坐標(biāo)，繪制成標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0074]如圖1所示，經(jīng)計算得到回歸方程，得Y=13.978X-0.0OlUR2=0.9996)。表明葡萄糖在0.01~0.05mg.mr1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。
[0075]實(shí)施例7
[0076]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，磷脂用量分別為200、400、600、800、lOOOmg，觀察不同磷脂用量對RGPL包封率和載藥量的影響。
[0077]不同磷脂用量對RGPL包封率和載藥量的影響如圖2和3。當(dāng)磷脂用量為0.4g時，包封率和載藥量達(dá)到最大值。以下的實(shí)驗則在磷脂用量固定為0.4g的基礎(chǔ)上進(jìn)行。
[0078]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，大豆磷脂與地黃多糖的質(zhì)量比(m/m)比分別為20:1、40:1、50: 1、100: 1、160:1，觀察大豆磷脂與地黃多糖的質(zhì)量比對RGPL包封率和載藥
量的影響。
[0079]不同脂藥比對RGPL包封率和載藥量的影響如圖4和5。RGPL包封率隨著脂藥比的增大，在20:1~100:1范圍內(nèi)，呈逐漸上升趨勢，在100:1時達(dá)到最大，而后又呈減小趨勢。載藥量隨藥脂比的改變也呈現(xiàn)類似的變化，亦在脂藥比為100:1時載藥量達(dá)到最大，故而選擇100:1作為脂藥比最佳比例。
[0080]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比(m/m)比分別為10:1、8:1、5:1、4:1、2:1，觀察大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對RGPL包封率和載藥量的影響。
[0081]不同膜材比對RGPL包封率和載藥量的影響如圖6和7。RGPL包封率和載藥量隨著膜材比的改變變化較顯著，兩者均隨著膜材比的增大先增大后減小，當(dāng)膜材比為8:1時，包封率和載藥量均取得最大值。
[0082]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，吐溫80與大豆磷脂的質(zhì)量比(m/m)比分別為1:5、1:8、1:10、1:16、1:20，觀察大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比對RGPL包封率和載藥量的影響。
[0083]吐溫80與大豆磷脂比對RGPL包封率和載藥量的影響如圖8和9。RGPL包封率和載藥量隨著吐溫80與大豆磷脂比的改變變化不顯著，基本呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，當(dāng)吐溫80與大豆磷脂比為1:10時，包封率和載藥量均取得最大值。
[0084]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，大豆磷脂與氯仿和甲醇體積和之比(mg/mL)比分別為20:1、40:1、50:1、80:1、100:1，觀察大豆磷脂與氯仿和甲醇體積和之比對RGPL包封
率和載藥量的影響。
[0085]不同磷脂與氯仿和甲 醇體積和之比對RGPL包封率和載藥量的影響如圖10和圖
11。結(jié)果表明，磷脂含量一定，氯仿與甲醇體積和為8mL時，所制得的RGPL包封率最高，達(dá)37.57%，其次為氯仿與甲醇體積和為IOmL時，包封率為36.65%。而載藥量在氯仿與甲醇體積和為IOmL時，達(dá)到最大，為7.104%,其次為氯仿與甲醇體積和為8mL時，載藥量為7.083%。綜合考慮，選擇SmL為氯仿與甲醇最優(yōu)體積和。
[0086]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，氯仿與甲醇體積比(v/v)比分別為8:0、6:2、4:4、2:6、0:8，觀察氯仿與甲醇體積比對RGPL包封率和載藥量的影響。
[0087]不同氯仿與甲醇體積比對RGPL包封率和載藥量的影響如圖12和圖13。結(jié)果表明，氯仿與甲醇各4mL時，所制得的RGPL包封率和載藥量均為最高。
[0088]RGPL的制備方法同實(shí)施例4，其中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度分別為30、40、50、60、70°C，觀察旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度對RGPL包封率和載藥量的影響。
[0089]不同旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度對RGPL包封率和載藥量的影響見圖14和15。RGPL包封率和載藥量均隨著旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度的升高而先增大后減小，當(dāng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度為60°C時，包封率和載藥量均取得最大值。
[0090]實(shí)施例8
[0091]在實(shí)施例7的基礎(chǔ)上，選出對脂質(zhì)體包封率有較顯著影響的4個因素:膜材比(X1X氯仿甲醇體積比(X2)、磷脂與吐溫80質(zhì)量比(X3)和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)溫度(X4)。各自變量水平見表2以脂質(zhì)體的包封率為響應(yīng)值，膜材比、氯仿甲醇體積比、磷脂與吐溫80質(zhì)量比和水浴溫度四個因子為自變量，采用DeSign-EXpert8.0軟件設(shè)計響應(yīng)面試驗見表2。選用BBD模型，以脂質(zhì)體的包封率為響應(yīng)值，做4因素3水平共27個試驗點(diǎn)(5個中心點(diǎn))，二次回歸正交組合試驗。
[0092]表2試驗各因素與水平
[0093]
【權(quán)利要求】
1.一種地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于，為逆相蒸發(fā)法，具體包括如下步驟: 1)取大豆磷脂、膽固醇和吐溫80，溶于溶劑中，超聲使其充分溶解；其中，大豆磷脂與地黃多糖的質(zhì)量比為20~160:1，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為2~10:1，大豆磷脂與吐溫80的質(zhì)量比為5~20:1 ;大豆磷脂與溶劑的mg/mL比為20~100:1 ;所述溶劑選自氯仿和甲醇中的一種或兩種； 2)置于反應(yīng)容器中，30~70°C減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，當(dāng)容器壁上形成一層均勻的薄膜后，加入乙醚溶解； 3)將含地黃多糖的PBS溶液緩慢導(dǎo)入反應(yīng)容器，形成兩相體系，冰水浴超聲，至形成穩(wěn)定的W/0型乳劑； 4)30~70°C減壓蒸發(fā)，形成膠態(tài)后加入PBS，繼續(xù)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去有機(jī)溶劑； 5)置于超聲細(xì)胞粉碎機(jī)進(jìn)行超聲處理，得到地黃多糖脂質(zhì)體混懸液； 6)再將混懸液分別擠壓過孔徑為0.45 μ m、0.22 μ m的微孔濾膜，得地黃多糖脂質(zhì)體，置于4°C保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，大豆磷脂與地地黃多糖的質(zhì)量比為100:1。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述 的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比為8:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，吐溫80與大豆磷脂的質(zhì)量比為1:10。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，大豆磷脂與溶劑mg/mL比為50:1。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，溶劑為氯仿與甲醇混合溶液，氯仿與甲醇的體積比為3:1~1:3。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟I)中，氯仿與甲醇的體積比為1:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:步驟2)或4)中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)的溫度均為60°C。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量比?.66:1，溶劑中氯仿與甲醇體積比為3.01:4.99，大豆磷脂和吐溫80的質(zhì)量比為10.06:1，蒸發(fā)溫度為65.92。。。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的地黃多糖脂質(zhì)體的制備方法，其特征在于:大豆磷脂與膽固醇的質(zhì)量8:1，溶劑中氯仿與甲醇體積比為3:5，大豆磷脂和吐溫80比為10:1，蒸發(fā)溫度為66。。。
【文檔編號】A61P29/00GK103536534SQ201310456446
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年9月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月29日
【發(fā)明者】王德云, 黃葉娥, 胡元亮, 劉家國, 余韻, 陶陽, 武毅 申請人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)