具有益生菌的營養組合物的制作方法
【專利摘要】組合物，包含短雙歧桿菌,不可消化的糖A和不可消化的糖B,其可選組合有副干酪乳桿菌，以及所述組合物在治療和/或預防胃腸疾病、免疫疾病和/內分泌疾病中的用途。
【專利說明】具有益生菌的營養組合物
[0001] 本申請是2006年2月28日提交的題為"具有益生菌的營養組合物"的中國專利 申請200680006368. 2的分案申請。

【技術領域】
[0002] 本發明涉及包含至少兩種不同的不可消化的益生素糖（prebiotic saccharide) 和至少一種益生菌（probiotic bacterium)。所述營養組合物尤其適合喂養嬰兒。 技術背景
[0003] 嬰兒在出生時缺乏腸道菌群。作為在出生過程中與母親的接觸以及隨后用母乳或 配方奶喂養的結果，腸道菌群快速發展。在腸道菌群發展的過程中，其仍然是不成熟的并且 其平衡是脆弱的。母乳喂養的嬰兒與配方奶喂養的嬰兒相比較少出現感染或疾病。因此， 與配方奶喂養的嬰兒相比，母乳喂養的嬰兒的胃腸感染的發病率和持續期都較低，較少出 現特應性疾病諸如過敏癥，濕疹，較少的絞痛和痙攣，以及較少的便秘。生命后期中出現的 疾病，諸如幼兒肥胖，糖尿病以及哮喘與生命早期階段喂養類型也相關，母乳喂養的嬰兒具 有優勢。
[0004] 通常，母乳喂養的嬰兒的腸道菌群主要由雙歧桿菌屬（Bifidobacteria)和乳桿菌 屬（Lactobacilli)組成。母乳含有母乳寡糖，其是嬰兒腸道中雙歧桿菌的生長因子。配 方奶喂養的嬰兒中的菌群更加多樣化并且通常含有更多的擬桿菌（Bacteroides),梭菌 (Clostridium)和腸桿菌（Enterobacteriaceae)。配方奶喂養的嬰兒具有的雙歧桿菌的數 量是母乳喂養的嬰兒所具有的大約十分之一到大約三分之二。雙歧桿菌和乳桿菌被認為對 于維持平衡良好的腸道小型生物群中非常重要，并且認為雙歧桿菌和乳桿菌具有多種健康 促進效應，包括預防和/或治療腹瀉和腸道感染。此外，已經顯示、雙歧桿菌和乳桿菌在宿 王免疫系統中起作用。
[0005] 目前的方法是在總體上促進雙歧桿菌，即在屬的水平。雙歧桿菌屬由多種不同種 組成，其在代謝、酶活性、寡-和多糖利用，細胞壁組成，以及與宿主的免疫系統的相互作 用等方面不同。因此，不是每種雙歧桿菌都對嬰兒具有相同的功能影響。青春雙歧桿菌 (B. adolescentis)在成人以及過敏性嬰兒的菌群中更加常見，在健康嬰兒的糞便中較少。 動物雙歧桿菌（B.animalis)/乳酸雙歧桿菌（B. Iactis)并非天然存在人中。在健康嬰兒 中，雙歧桿菌菌群主要由嬰兒雙歧桿菌（B. infantis)，短雙歧桿菌（B. breve)和長雙歧桿 菌（B. Iongum)組成。本發明的主要目的在于在配方奶喂養的嬰兒中獲得這樣的菌群，其在 雙歧桿菌水平上與母乳喂養的嬰兒中的菌群相似。
[0006] EP1105002描述了兩種不同的不可消化的碳水化合物在改善腸菌群中的用 途。所述碳水化合物具體包括半乳-寡糖（galacto-oligosaccharide)以及果-聚糖 (fructo-polysaccharide)〇


【發明內容】

[0007] 本發明人發現了對人類嬰兒喂以不同不可消化的單糖的組合增加糞便中 的雙歧桿菌水平并在種的水平調節腸道中的雙歧桿菌群體達到類似在母乳喂養的 嬰兒中觀察到的水平，即低水平的小鏈雙歧桿菌（B. catenulatum)，假鏈雙歧桿菌 (B.pseudocatenulatum),和青春雙歧桿菌（青春雙歧桿菌）。但是，發現短雙歧桿菌與母 乳喂養的嬰兒的情況相比相對較低。
[0008] 因此，一方面，本發明提供組合物，其包含不可消化的單糖A和不可消化的單糖B 以及短雙歧桿菌。所述組合物優選用于平衡雙歧桿菌在配方奶喂養的嬰兒的胃腸道中的分 布。
[0009] 另一方面，還發現對嬰兒喂以含有不同不可消化的糖的組合的配方奶增加糞 便中乳桿菌水平并在種的水平調節腸道中的乳桿菌水平，使其達到與在母乳喂養的嬰 兒中觀察到的水平相似的水平。但是，發現副干酪乳桿菌（Lactobacillus paracasei) (L. paracasei)的濃度與母乳喂養的嬰兒相比相對較低。因此，本發明另一方面提供一種組 合物，其包含短雙歧桿菌和副干酪乳桿菌，優選與不可消化的糖A以及不可消化的糖B組 合。發現這些細菌的群體在接受配方奶的嬰兒的胃腸道中發育較差。因此，益生細菌的這 種組合可優選用于喂養嬰兒以及模擬母乳喂養的嬰兒的腸道菌群。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010] 圖1:氣道高反應性的圖，其顯示為相對PenH(延長的暫停）相對于以 下組的小鼠中的醋甲膽堿濃度的圖，所述小鼠為接受短雙歧桿菌、反式半乳寡糖 (transgalacto-oligosaccharide)以及果聚糖（fructopolysaccharide)的組合的小鼠； 以及接受鹽水的小鼠對照組。


【發明內容】
[0011]
[0012] 本發明提供具有以下性質的組合物：粘度l_60mPa. s，熱密度10-250kcal每 100ml，包含短雙歧桿菌，不可消化的糖A以及不可消化的糖B，其中：
[0013] a.不可消化的糖A的聚合度為2-200并且糖A的總單糖單位的至少60mol%是選 自半乳糖，果糖或葡萄糖單糖的單糖；以及
[0014] b.不可消化的糖B的聚合度為2-200并且糖B的總單糖單位的至少60mol%是選 自半乳糖，果糖或葡萄糖單糖的單糖；以及
[0015] 其中
[0016] i)糖A中選自葡萄糖，果糖或半乳糖的至少一種單糖的百分比比糖B中相同單糖 的百分比高至少40mol% ;和/或
[0017] ii)糖A的至少一個糖苷鍵基于糖A的總糖苷鍵的百分比比糖B中相同糖苷鍵的 百分比高至少40% ;和/或
[0018] iii)糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5個單糖單位。
[0019] 另一方面，本發明提供一種組合物，其包含5_16en. %蛋白質，30_60en. %脂肪， 和25-75en. %碳水化合物，并包含短雙歧桿菌以及副干酪乳桿菌。
[0020] 另一方面，本發明提供本發明的組合物用于制備將非母乳喂養的或部分母乳喂養 的嬰兒胃腸道中的雙歧桿菌和/或乳桿菌種類的群體正常化為母乳喂養的嬰兒中的雙歧 桿菌和/或乳桿菌種類的群體的組合物中的用途。
[0021] 本發明另一方面提供本發明的組合物在制備用于預防和/或治療胃腸道疾病、免 疫疾病和/或內分泌疾病，優選牛奶過敏癥和/或感染的組合物中的用途。
[0022] 粘度
[0023] 本發明組合物的粘度為l_60mPa. s，優選l_20mPa. s，更優選I-IOmPa. s，最優選 l-6mPa.s。低粘度保證液體的適當給予，例如適宜地通過奶嘴的給予。該粘度也非常接近 母乳的粘度。此外，低粘度導致正常胃排空以及更好的能量吸收，其對于需要能量用于最佳 生長和發育的嬰兒而言是必需的。本發明的組合物優選通過將粉末狀的組合物與水混合來 制備。通常嬰兒配方奶以此種方式制備。本發明因此涉及包裝的粉末組合物，其中所述包 裝提供將粉末與適宜量的液體混合的說明，由此產生粘度l-6〇mPas的液體組合物。
[0024] 液體粘度利用 Physica Rheometer MCR 300 (Physica Messtechnik GmbH, Ostfilden, Germany)在20°C、剪切速率95s4的條件下測定。
[0025] 短雙歧桿菌
[0026] 短雙歧桿菌是革蘭氏陽性厭氧型分支棒狀細菌。優選，本發明的短雙歧桿菌與短 雙歧桿菌常規菌株ATCC 15700相比其16S rRNA具有至少95 %的相同性，更優選至少97 % 相同性（Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44:846-849)。本發明所 用雙歧桿菌優選與短雙歧桿菌探針雜交，并且利用本文下文所述的5'核酸酶測定法產生信 號。
[0027] 優選的短雙歧桿菌菌株是分離自健康母乳喂養的嬰兒的糞便的那些。通 常，這些可商購得自乳酸細菌生產商，但是也可直接分離自糞便，經鑒定、定性并產 生。根據優選實施方案，本發明的組合物含有至少一種選自下組的短雙歧桿菌：短雙 歧桿菌 Bb_03 (Rhodia)，短雙歧桿菌 M-16V (Morinaga)，短雙歧桿菌 R0070 (Institute Rosell, Lallemand), DSM 20091，或LMG 11613。最優選，所述短雙歧桿菌是短雙歧桿菌 M-16V(Morinaga)。
[0028] 本發明的組合物優選含IO2-IO13集落形成單位（cfu)的短雙歧桿菌/本發明組合 物的每克干重，優選IO 4-IO12,更優選IO5-IOici,最優選IO 5-IxlO9Cfu短雙歧桿菌/本發明 組合物的每克干重。
[0029] 最優選，本發明的組合物含有IO4-IO12,更優選IO 5-IO11,最優選107-5X101(I集落 形成單位（cfu)短雙歧桿菌/每g糖A和B總量。
[0030] 根據本發明短雙歧桿菌的劑量優選以日劑量IO2-IO13給藥，更優選以IO 5-IO11,最 優選以108_5x101ci集落形成單位（cfu)給藥。
[0031] 不可消化的糖
[0032] 本發明提供一種組合物，其包含不可消化的糖A和不可消化的糖B，在本文中分別 稱為糖A和糖B。糖A和糖B是不同的糖并具有不同的糖苷鍵和/或聚合度和/或單糖組 成。
[0033] 除了單糖半乳糖，果糖和葡萄糖，糖A和B可含有其他單糖單元諸如阿拉伯糖，木 糖和甘露糖，總量可達40%。但是優選，糖A和/或B的至少75%，更優選至少90%，或 甚至至少98mol %的單糖單元總量是選自半乳糖，果糖或葡萄糖的單糖。優選α -連接的葡 萄糖的相對量低于30%，具體低于15%。
[0034] 本發明術語糖優選指不可消化的糖的混合物。本發明術語糖B優選指不可消 化的糖的混合物。這是常識，因為利用具有例如一種鏈長度的糖非常昂貴。優選且常 見地，所述混合物僅僅在主要單糖的數量上不同。當糖A和/或B是糖混合物，每種 參數的平均值用于定義本發明。例如，如果糖A是各種糖的混合物，其中包含25wt. % Glu-Gal-Gal-Gal, 25wt. % Glu-Gal-Gal 和 50wt. % Gal-Gal,平均單糖組合物是 85. 4% Gal和14. 6% Glu。平均聚合度（DP)是2. 75。
[0035] 術語不可消化的糖指胃腸道中保持未消化并且不被吸收到達大腸的糖，即沒有在 人優選人嬰兒的上消化道中消化的糖，例如沒有被存在人腸道中的酸或酶消化。注意到可 消化的糖不是糖A和B的一部分。因此，例如葡萄糖、果糖、半乳糖、蔗糖、乳糖和麥芽糊精 被認為是可消化的。
[0036] 優選糖 A 和 B 是水溶性的。根據 L. Prosky et al, J. Assoc. Anal. Chem 71:1017-1023, 1988所述的方法，水溶性糖至少50%是水溶性的。
[0037] 優選實施方案中至少80wt. %的不可消化的糖A和B是可發酵的。術語"可 發酵的"在本文指由胃腸道下半部分（例如結腸）中的微生物分解成小分子的能力， 具體是短鏈脂肪酸和乳酸鹽。不可消化的糖A和B的可發酵性優選通過Am. J. Clin. Nutr. 53,1418-1424(1991)所述的方法確定。更優選的實施方案中，至少80wt. %的不可 消化的糖A和B是益生素。"益生素（prebiotic)"定義為不可消化的食物成分，其選擇性 刺激一或多種細菌種類在結腸中的生長和/或活性，并由此有利地影響宿主（Gibson and Roberfroid, J. Nutr. 125:1401-1412(1995))〇
[0038] 單糖纟目合物
[0039] 糖A和B的全部單糖單元的至少60mol %，優選至少75mol %，更優選至少 90mol%，最優選至少98mol%是選自半乳糖（gal),果糖（fru)或葡萄糖（glu)的單糖。 根據本發明的優選實施方案，糖A中至少一種選自葡萄糖，果糖或半乳糖的單糖的百分比 比糖B中的相同單糖的百分比高至少40mol%，優選至少50mol%，更優選至少75mol%， 更優選至少90mol %。單糖的多樣性增加刺激更廣泛的有益腸細菌的群體。
[0040] 優選糖A和B的至少50wt. %，優選至少75wt. %的累積重量是DP2-8的不可消 化的糖。通過利用高小糖重量百分比的混合物，對乳酸細菌和雙歧桿菌的可發酵性以及生 長的刺激效應將增加。
[0041] 糖中單糖的百分比可通過用糖中的各個單糖單元（例如葡萄糖）的量除以糖中的 單糖單元總量再乘以100來簡單計算。當糖是糖混合物的情況，每種單獨的糖在糖混合物 中的貢獻必須被考慮在內。糖混合物的百分比可通過將所述混合物完全水解并測定每種單 糖的摩爾百分比來簡單地測定。
[0042] 優選糖A含有至少40m〇l%半乳糖，更優選至少67m〇l%半乳糖，更優選至少 75mol%半乳糖。優選糖B含有至少30mol%果糖，更優選至少67mol%果糖，更優選至少 75wt. % 果糖。
[0043] 例如，在糖A是glu-(gal)n = 2_7混合物且平均單糖組成為20mol %葡萄糖和 80mol%半乳糖、并且糖B是glu-(fru)n = 2_7和（fru)n2_7混合物且平均單糖組成為10mol% 葡萄糖和90Π 1Ο11%果糖的情況下，區別是a)葡萄糖為lOmol% ;b)果糖為90Π 1Ο11% ;c)半 乳糖為SOmol %。在該實例中半乳糖滿足了這樣的標準，即糖A中至少一種選自葡萄糖，果 糖或半乳糖的單糖的百分比比糖B中相同單糖的百分比高至少40mol%。
[0044] 聚合度
[0045] 糖A和B的聚合度（DP)為2-200。優選糖A和B的累積重量的至少80wt. %，更優 選至少95wt. %，最優選至少98wt. %的聚合度（DP)低于100,更優選低于60,最優選低于 40。較低的DP優選降低粘度并增加不可消化的糖的可發酵性。優選糖A的至少50wt. %， 優選至少75wt. %是DP 2-8的不可消化的糖。通過利用高小糖重量百分比的混合物，對乳 酸細菌和雙歧桿菌的可發酵性以及對其生長的刺激效應將得以增加。
[0046] 根據本發明的優選實施方案，糖A的DP比糖B的聚合度低至少5個，優選至少10 個，更優選至少15個單糖單元。使糖具有增加的聚合度降低滲透負荷，其對于嬰兒營養有 利并且提供對結腸最遠端部分的腸道菌群的益生素刺激。
[0047] 最優選，糖A的DP為2-15,更優選2-8。優選糖B的DP為8-100。DP不同的糖 A和B具有相同或者稍微不同的單糖組成。如果糖A和B的DP不同而單糖組成相似，則糖 A和糖B的平均DP的差異優選至少5,更優選至少10,更優選至少15。優選，糖A和B具 有不同的單糖組成（見上文）以及不同的DP。
[0048] 例如，如果糖A是平均DP4. 5單糖單位的glu_frum = 2_7和frum = 2_6的混合物，并 且糖B是平均DP為25個單糖單元的glu-frun= 12_1QQ，則平均DP差異為（25-4. 5 = ) 20. 5。
[0049] 糖苷鍵
[0050] 本發明優選實施方案中，糖A的至少一個糖苷鍵基于糖A的總糖苷鍵的百分比比 糖B中的相同的糖苷鍵的百分比高至少40%，優選至少50%，更優選至少75 %。術語"糖 苷鍵"在本發明指兩個環狀單糖的環通過消去水形成的C-O-C連接。糖苷鍵的密度增加刺 激更廣范圍的有益細菌。
[0051] 糖苷鍵的區別在于它們共價結合于單糖單元中不同編號的位置的碳原 子，和/或它們形成α或β鍵。不可消化的糖中存在的不同糖苷鍵的實例是 β (1，3)，α (1，4)，β (2, 1)，α (1，2)，和 β (1，4)鍵。
[0052] 優選糖A中的糖苷鍵包含至少40 %，更優選至少75 %的β (1，4)和/或β (1，6) 糖苷鍵。糖B中的糖苷鍵優選包含至少40%，更優選至少75%的β (2, 1)糖苷鍵。
[0053] 鉬合
[0054] 具體優選的實施方案中，本發明的糖A和B在選自糖苷鍵、聚合度或單糖組成中 的至少兩個方面不同。優選，本發明的糖A和B的聚合度不同并且在選自糖苷鍵或單糖組 成的至少一個方面不同。更優選，本發明的糖A和B的聚合度和單糖組成不同。最優選所 有三個方面均不同。給藥不同大小，不同"級別"，和/或"結構"的糖的混合物協同性刺激 腸道菌群。其有利地影響健康。
[0055] 糖A和B的濃度
[0056] 本發明的組合物優選包含至少5mg糖A每100ml,優選至少50mg糖A每100ml, 更優選至少0. Ig糖A每100ml,最優選至少0.5g糖A每100ml。優選本發明的組合物包含 不超過IOg糖A每100ml,優選不超過2. Og每100ml。本發明的組合物優選包含至少5mg 糖B每100ml,優選至少IOmg糖B每100ml,更優選至少25mg糖B每100ml,最優選至少 50mg糖B每100ml。優選本發明的組合物包含不超過IOg糖B每100ml，優選不超過Ig每 IOOmlo
[0057] 糖A和B的重量比優選0.01-100,更優選0.5-100,更優選4-100,最優選24-99。 高重量比在糖A具有低DP且糖B具有相對高DP的情況中尤其有利。其保證可滲透性和可 發酵性之間的最佳平衡。
[0058] 基于本發明組合物中不可消化的糖的總重量，糖A和糖B優選包含5-lOOwt. %，更 優選50-lOOwt. %不可消化的糖。
[0059] 本發明的不可消化的糖A和B優選以日劑量0. l_30g (糖A重量+糖B重量），更 優選0. 5-15g,更優選3-10g給藥。
[0060] 優詵的糖
[0061] 不可消化的糖A優選選自β -半乳寡糖，α -半乳寡糖或（阿拉伯（arabino)-) 半乳聚糖。根據更加優選的實施方案，糖A是β-半乳寡糖，更優選反式半乳寡糖（TOS)。 優選糖A包含β-半乳寡糖，其具有β (1，4)和/或β (1，6)糖苷鍵以及末端葡萄糖。TOS 例如可以商品名 ViGOS (Borculo Domo Ingredients, Zwolle, Netherlands)購得。
[0062] 不可消化的糖B優選選自果聚糖或果糖寡糖。術語果聚糖 (frctopolysaccharide)，多聚果糖（polyfructose)，多聚果聚糖（polyfructan)和聚果 糖（fructan)在本文可互換使用，并且指包含β-連接的果糖單元的多糖，其優選通過 β (2, 1)和/或β (2, 6)糖苷鍵連接。最優選，果聚糖含有末端β (2, 1)糖苷鍵連接的葡 萄糖。最優選，果聚糖含有至少7β-連接的果糖單元。另一優選實施方案中，胰島素用作 糖Β。胰島素是這種類型的果聚糖，其中至少75%的糖苷鍵是β (2, 1)鍵。通常，胰島素 的平均鏈長度為8-60個單糖單元。適宜用于組合物的果聚糖可以商品名例如Raftiline?: HP(Orafti)購得。
[0063] 另一優選實施方案中，糖B果聚寡糖（fructooligosaccharide)。果聚寡糖 是包含β連接的果糖單元的糖，其優選通過β (2, 1)和/或β (2, 6)糖苷鍵連接。果 聚寡糖優選含有在還原末端由β (2, 1)糖苷鍵連接的葡萄糖。最優選，所述果聚寡糖 含有2-6個連接的果糖單兀。果聚募糖的適且來源是(Orafti),或 Actilight(Beghin-Meiji) 〇
[0064] 副干酪乳桿菌
[0065] 優選實施方案中，本發明的組合物包含副干酪乳桿菌。發現該細菌以有限的量存 在非母乳喂養的嬰兒中。因此，給藥包含不可消化的糖A，不可消化的糖B，短雙歧桿菌， 和副干酪乳桿菌的組合物使得雙歧桿菌在種的水平的正?；蔀榭赡埽彩沟萌闂U菌群體 正常化到等同于母乳喂養嬰兒的胃腸道中的水平成為可能。這是重要的，因為不同乳桿菌 種類對宿主的影響不同。例如，保加利亞乳桿菌（Ldelbrueckii)形成D-乳酸鹽，其導致 不成熟嬰兒中的酸中毒，而副干酪乳桿菌形成L-乳酸鹽。
[0066] 優選本發明的乳桿菌菌株的16S rRNA序列與副干酪乳桿菌的典型菌株 ATCC25032 (Stackebrandt & Goebel, 1994, Int. J. Syst. Bacteriol. 44:846-849)相比具有 至少95,更優選至少97%的序列相同性。本發明所用的乳桿菌優選與副干酪乳桿菌探針雜 交，并且利用本文進一步描述的5'核酸酶測定法時產生信號。
[0067] 優選的副干酪乳桿菌菌株是分離自健康母乳喂養的嬰兒的糞便的那些。數種副 干酪乳桿菌菌株可購自乳酸細菌生產商，但是它們也可直接從糞便分離，鑒定，定性并制 備。根據優選的實施方案，本發明的組合物至少含有選自副干酪乳桿菌F19 (Aria，Sweden)， 副干釀乳桿菌 LAFTI L26(DSM Food Specialties, the Netherlands)和副干釀乳桿菌 CRL431 (Chr. Hansen, Denmark), LMG12165 和 LMGl 1407 組成的組的副干酪乳桿菌。
[0068] 本發明的組合物優選含有IO2-IO13集落形成單位（Cfu)的副干酪乳桿菌/本發明 組合物的每克干重，優選IO 4-IO12,更優選IO5-IOici,最優選Io 5-IxlO9Cfu副干酪乳桿菌/ 每克干重組合物。
[0069] 最優選，本發明的組合物含有1〇4-1〇12,更優選IO 5-IO11,最優選107-5X101(I集落 形成單位（Cfu)的副干酪乳桿菌/每g糖A和B總重。
[0070] 本發明的副干酪乳桿菌優選以日劑量1〇2-1〇13,更優選IO 5-IO11,最優選 108-5x101ci集落形成單位（cfu)給藥。
[0071] 益牛.組合物（Combiotics)
[0072] 另一方面，本發明提供這樣的組合物，其包含5_16en. %的蛋白質，30_60en. %的 脂肪，25-75en. %的碳水化合物，并包含短雙歧桿菌和副干酪乳桿菌。給藥這些細菌的組合 據信刺激嬰兒的胃腸道健康。本發明中描述關于包含糖A和B以及雙歧桿菌的組合物的優 選組合物特征、細菌種類和醫學指征等同地應用于含有短雙歧桿菌和副干酪乳桿菌的組合 物。本發明中所述的糖A和/或糖B可優選地與短雙歧桿菌和副干酪乳桿菌組合。如果副 干酪乳桿菌存在于本發明的組合物中，單一類型的不可消化的糖足以獲得所需的效果。另 一方面，如果副干酪乳桿菌不存在，本發明具體涉及包含重量比為95 :5-99 :1的糖A和糖B 的組合物。
[0073] 除了短雙歧桿菌和/或副干酪乳桿菌，其它微生物也可存在，但是沒有獲得實質 性的進一步改善。所述其他微生物可包括其他雙歧桿菌或其他乳桿菌或其他乳酸細菌。優 選的雙歧桿菌是長雙歧桿菌和/或嬰兒雙歧桿菌。優選的乳桿菌是干酪乳桿菌（Lcasei) 和/或嗜酸性乳桿菌（L. acidophilus)。
[0074] 常量營養素
[0075] 本發明的組合物優選含有脂肪、碳水化合物和蛋白質。
[0076] 優選本發明的組合物含有可消化的碳水化合物，其選自以下物質組成的組：麥芽 糊精，淀粉，乳糖，麥芽糖，葡萄糖，果糖，和蔗糖。優選本發明的組合物含有乳糖。優 選至少35wt. %，更優選至少50wt. %，最優選至少75wt. %的可消化性碳水化合物是乳 糖。在液體形式中時，本發明的組合物優選包含6-19g可消化的碳水化合物每100ml，更優 選 6_10g 每 100ml。
[0077] 優選10% -80%的總能量含量本發明的組合物通過可消化的碳水化合物提供。最 優選，本發明的組合物含有25-75en. %碳水化合物。En. %是能量百分比的縮寫，代表每種 組成成分對制備物的總熱量值的貢獻的相對量。熱量值由可消化的碳水化合物、蛋白質和 脂肪提供。
[0078] 常見的用于液體來源的組分包括動物油，植物油和微生物發酵油。脂肪是重要 的能量來源并且對于嬰兒的正常發育來講非常重要。本發明優選含有亞麻酸（LA ;〇mega6 脂肪酸）和α -亞麻酸（ALA ;〇mega3脂肪酸）。所述組合物優選包含0. 3-1. 5g LA每 100ml，0.05-5g ALA每100ml。LA/ALA重量比優選5-15。優選本發明的組合物包含長鏈多 不飽和脂肪酸（LC PUFA)，更優選二十碳五烯酸（EPA)和/或二十二碳六烯酸（DHA)。優 選實施方案中，所述組合物包含花生四烯酸（ARA)。優選所述組合物包含l_25mg，更優選 4-15mg DHA 每 100ml。優選所述組合物包含 2-50mg,更優選 6-30mg ARA 每 100ml。LC-PUFA 的存在有利地影響乳桿菌和/或雙歧桿菌尤其是副干酪乳桿菌的建群。本發明的組合物優 選包含30-60en. %脂肪，更優選39-50en. %脂肪。所述組合物優選包含2. 1-6. 5g脂肪每 IOOml。
[0079] 優選本發明的組合物包含5_16en. %，更優選8_12en. %的蛋白質。優選本發明 的組合物包含選自下組的蛋白質：酪蛋白，乳清蛋白，脫脂奶，大豆蛋白，豌豆蛋白質（pea protein),膠原蛋白，大米蛋白質（rice protein)和/或玉米蛋白質（corn protein)。優 選至少25wt. %，更優選至少50wt. %，最優選至少90wt. %本發明的組合物的總蛋白通過 水解的蛋白質和/或游離氨基酸來提供。蛋白水解物和/或有利氨基酸的利用降低過敏癥 的風險，具體是牛奶過敏癥的風險。如果組合物是液體形式，優選其包含1.0-6. 0g，更優選 L 0-2. 5g 蛋白質每 100ml。
[0080] 本發明的組合物優選是液體。大便無規律（例如大便干硬，大便量不足，腹 瀉）是許多嬰兒和接受液體食物的患者的主要問題。因此，本發明的組合物優選滲量 (osmolality)為50-500m0sm/kg,更優選100-400m0sm/kg。具有所述的滲量的本發明的組 合物特別適合用于治療和/或預防腹瀉。
[0081] 同樣重要的是本發明的組合物不具有過高的熱密度，但是仍提供足夠的熱量來喂 養受試者。因此，優選液體食物的熱密度為10-250kcal每100ml，更優選50-90kcal/ml， 最優選60-71kcal每100ml。最佳熱密度也對腹瀉的出現減少有貢獻。
[0082] 本發明的組合物優選包含礦物質，微量元素和維生素，膽堿，?；撬?，肉堿，肌 醇和/或其混合物。優選本發明的組合物含有?；撬?，其減少哮喘癥狀（Adv.Exp.Med. Biol. 2003526:403-10)。?；撬崤c本發明組合物中的組分協同作用。優選本發明的組合物 包含核苷酸。最優選，所述組合物包含胞嘧啶5'-單磷酸鹽，尿嘧啶5'-單磷酸鹽，腺嘌 呤5' -單磷酸鹽，鳥嘌呤5' -單磷酸鹽，以及肌苷5' -單磷酸鹽。優選所述組合物包含 0. 75-10,更優選I. 5-5mg核苷酸每100ml。核苷酸的存在有利地支持了雙歧桿菌和乳桿菌， 具體是短雙歧桿菌和/或副干酪乳桿菌的存活和生長。優選本發明的組合物含有有機酸， 香料和/或著色劑。
[0083] 應甩
[0084] 已經發現本發明的組合物具體可用作嬰兒營養物。所述組合物尤其適合根據母 乳喂養的嬰兒中的種類分布正常化在非或部分母乳喂養的嬰兒的胃腸道中的雙歧桿菌和/ 或乳桿菌群體，尤其是在早產兒、足月兒以及處于固體食物過渡期的嬰兒中的那些。因此， 本發明提供向人嬰兒提供營養元素的方法，所述方法包括向嬰兒提供本發明的組合物。優 選，所述嬰兒的年齡為0-36個月，更優選0-18個月，最優選0-12個月。
[0085] 胃腸菌群對對于疾病諸如胃腸疾病、免疫疾病和/或內分泌疾病等具有重要影 響。因此，另一方面，所述組合物可有利地用于制備用于預防和/或治療胃腸疾病、免疫疾 病和/或內分泌疾病的藥物。尤其是過敏癥（allergy)，過敏性鼻炎（allergic rhinitis)， 食物超敏反應（food hypersensitivity)，異位性皮炎（atopic dermatitis)，濕疫 (eczema)，哮喘（asthma)，腹瀉（diarrhoea)，腸道炎癥（intestinal inflammation)，感染 (infection),便秘（constipation),腸痙攣（intestinal cramp),絞痛（colic),幼兒肥胖 癥（childhood obesity),和/或糖尿?。╠iabetes)可適宜地利用本發明的組合物治療。 優選實施方案中，本發明提供用于治療和/或與預防過敏癥和/或感染的方法。本發明的 組合物可有利地用于制備用于預防和/或治療嬰兒中的胃腸疾病、免疫疾病和/或內分泌 疾病的藥物。這些疾病的發病率降低是由于優化的菌群，具體是優化的雙歧桿菌群體和/ 或優化的乳桿菌群體。本發明具體提供利用本發明的組合物制備用于預防和/或治療牛奶 過敏癥和/或感染的藥物。 實施例
[0086] 實施例1:臨床研究
[0087] 該研究中，檢測含有反式半乳寡糖和聚果糖的嬰兒營養素對腸道雙歧桿菌和乳桿 菌的影響。如W02005/039319所述進行所述研究并分析糞便樣品。
[0088] 嬰兒被隨機分入兩個治療組之一：一組（SF-組）接受標準嬰兒配方奶 I (Aptamil IMilupa); -組（GFSF-組）接受補充有0· 72g/100ml反式半乳-寡糖 (GOS，Vivinal?(Borculo Domo Ingredients, Netherlands)和 0.08g/100ml 聚果糖 (inulin, Raftilin HP, Orafti, Belgium)的標準配方奶。母乳喂養嬰兒組包含在參照組 (HMF組）中。
[0089] 糞便樣品中的不同雙歧桿菌和乳桿菌的相對量通過雙鏈體5'核酸酶測定法來測 定。如W02005/039319針對屬于雙棲桿菌的菌種設計并驗證探針和引物，并針對乳桿菌設 計并驗證探針和引物。乳桿菌的探針和引物顯示于表1。F是前向引物，R是反向引物，P是 探針。表2顯示用于對乳桿菌進行的雙鏈體5'核酸酶測定法中的最終的最佳引物和探針濃 度。雙歧桿菌的總量也借助于FISH如前所述測定（1^叩611(1;[」1^6七31.19954。。1』11￥；[1'011· Microbiol. 61:3069-75.)測定。
[0090] 蓋11用于5'核酸酶測定法中的設計的引物和探針
[0091]

【權利要求】
1. 組合物，粘度為l-60mPa. S，熱密度為10-250kcal每100ml，其包含短雙歧桿菌，不 可消化的糖A和不可消化的糖B，其中： a. 不可消化的糖A聚合度為2-200,并且糖A的總單糖單元的至少60mol %是選自半乳 糖，果糖或葡萄糖的單糖；且 b. 不可消化的糖B的聚合度為2-200,并且糖B的總單糖單元的至少60mol %是選自半 乳糖，果糖或葡萄糖的單糖；且 其中 i) 糖A中至少一種選自葡萄糖，果糖或半乳糖的單糖的百分比比糖B中相同單糖的百 分比高至少40Π 1Ο11% ;和/或 ii) 糖A中至少一個糖苷鍵基于糖A中總糖苷鍵的百分比比糖B中相同糖苷鍵的百分 比高至少40% ;和/或 iii) 糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5個單糖單元。
2. 權利要求1的組合物，其粘度為l_6mPa. s。
3. 權利要求1或2的組合物，其中糖A和糖B的重量比是24-99。
4. 權利要求1或2的組合物，其中 i) 糖A中至少一種選自葡萄糖，果糖或半乳糖的單糖的百分比比糖B中相同單糖的百 分比高至少40Π 1Ο11% ;和 ii) 糖A的聚合度比糖B的聚合度低至少5個單糖單元。
5. 權利要求1或2的組合物，還包括副干酪乳桿菌。
6. 權利要求1或2的組合物，其中基于組分A中存在的糖鏈的單糖單元的總量，糖A的 糖鏈包含至少67mol%半乳糖單元。
7. 權利要求1或2的組合物，其中基于糖B中存在的單糖單元的總量，糖B的糖鏈包含 至少67Π 1011%果糖單元。
8. 權利要求1或2的組合物，其中每g組合物干重包含102-1013集落形成單位的短雙 歧桿菌。
9. 權利要求1或2的組合物，包含5-16en. %蛋白質，30-60en. %脂肪，和25-75en. % 碳水化合物。
10. 權利要求1或2的組合物，包含至少5mg糖A每100ml和/或至少5mg糖B每100ml。
11. 權利要求1或2的組合物，包含至少0. 75mg核苷酸每100ml。
12. 包含5-16en. %蛋白質、30-60en. %脂肪以及25-75en. %碳水化合物的組合物，其 中包含短雙歧桿菌和副干酪乳桿菌。
13. 前述任意權利要求的組合物制備用于為嬰兒提供營養的方法中的營養組合物的用 途，所述方法包括將所述營養組合物給藥嬰兒。
14. 權利要求1-12之一的組合物在制備組合物中的用途，所述組合物用于將在用非母 乳或部分母乳喂養的嬰兒的胃腸道中的雙歧桿菌和/或乳桿菌種類群體正?；侥溉槲?養的嬰兒中的雙歧桿菌和/或乳桿菌種類群體。
15. 權利要求1-12之一的組合物在制備用于預防和/或治療胃腸疾病、免疫疾病和/ 或內分泌疾病的組合物中的用途。
16. 權利要求15的用途，其中所述疾病選自以下疾病組成的組：過敏癥，感染，過敏性 鼻炎，食物超敏反應，異位性皮炎，濕疹，哮喘，腹瀉，病毒性腹瀉，腸道炎癥，便秘，腸痙攣， 絞痛，幼兒肥胖癥和糖尿病。
17.權利要求1-12之一的組合物在制備用于預防和/或治療過敏，異位性皮炎，濕疹和 /或感染的組合物中的用途。
【文檔編號】A61P37/08GK104223094SQ201410366993
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2006年2月28日 優先權日:2005年2月28日
【發明者】G·斯皮爾曼斯, J·克諾爾, M·哈爾曼, J·加爾森, A·J·M·弗里塞瑪, M·S·阿勒斯 申請人:紐崔西亞公司