本發明涉及一種高密度脂蛋白的新用途，具體涉及一種高密度脂蛋白在用于治療類風濕性關節炎中的用途。

背景技術：

類風濕關節炎(rheumatoidarthritis，RA)是以關節組織慢性炎癥性病變為主要表現的自身免疫疾病，其特征性表現是滑膜增生，在滑膜與軟骨-骨交界處有變成局灶性侵襲的傾向，侵及軟骨和骨關節軟骨軟骨下骨質和關節周圍軟組織的進行性破壞可以共同引起關節破壞，并最終導致關節畸形，是我國人群喪失勞動力和致殘的主要病因之一。

近年來，有國內外研究表明，在RA的發生發展過程中，腫瘤壞死因子(tumor necrosisfactor，TNF)有重要作用，并被認為占中心地位。TNF是一種重要的免疫調節因子，在關節滑膜炎性變及軟骨基質的降解過程中起重要作用，尤其是滑液中異常升高的TNF-α，對RA的發病起主導作用，它參與了RA多種致病機制，包括內皮細胞的激活細胞因子的誘導白細胞的聚集破骨細胞的活化與軟骨的破壞等，導致炎性反應的持續發生和軟骨與骨的漸進性破壞。

目前，用于治療類風濕性關節炎的藥物主要有中藥或抗體等，但不同的藥物其作用治療機理不相同。

技術實現要素：

本發明的任務在于提供一種高密度脂蛋白的新用途，通過高密度脂蛋白來調控炎癥因子TNF-α的水平來發揮治療作用。

其技術解決方案包括：

高密度脂蛋白在制備用于治療類風濕性關節炎的藥物中的用途。

上述治療類風濕性關節炎的藥物能降低炎癥因子TNF-α表達水平。

上述治療類風濕性關節炎的藥物能降低關節腔組織炎癥細胞浸潤。

上述治療類風濕性關節炎的藥物能降低類風濕性關節炎炎癥信號通路的激活。

本發明所帶來的有益技術效果：

本發明提供的高密度脂蛋白的新用途，證明了高密度脂蛋白用于治療類風濕性關節炎方面，通過觀察類風濕性關節炎動物模型經高密度脂蛋白干預后的炎癥因子變化、關節腔組織炎癥細胞浸潤以及炎癥信號通路激活的變化，發現經高密度脂蛋白干預后一是能夠顯著降低炎癥因子TNF-α表達水平，二是能夠顯著降低關節腔組織炎癥細胞浸潤，三是能顯著降低類風濕性關節炎炎癥信號通路的激活。高密度脂蛋白作為注射用藥治療類風濕性關節炎，對動物無明顯損害，未發現有不良副作用，是一種安全可靠的能夠用于治療類風濕性關節炎的藥物。

附圖說明

下面結合附圖對本發明做進一步說明：

圖1為本發明實施例1試驗過程中類風濕性關節炎動物經高密度脂蛋白干預后小鼠血漿中炎癥因子TNF-α表達水平的變化圖；

圖2為本發明實施例1試驗過程中類風濕性關節炎動物經高密度脂蛋白干預后小鼠血漿中IL-6表達水平的變化圖；

圖3為本發明實施例1試驗過程中類風濕性關節炎動物經高密度脂蛋白干預后小鼠關節腔組織炎癥細胞浸潤的變化圖；

圖4為本發明實施例1試驗過程中類風濕性關節炎動物經高密度脂蛋白干預后小鼠體內炎癥信號通路的影響圖。

具體實施方式

本發明提供了一種高密度脂蛋白的新用途，為了使本發明的優點、技術方案更加清楚、明確，下面結合具體實施例對本發明做詳細說明。

實施例1：

本發明將高密度脂蛋白用于制備治療類風濕性關節炎的藥物中，通過觀察類風濕性關節炎動物模型經高密度脂蛋白干預后的炎癥因子變化、關節腔組織炎癥細胞浸潤以及炎癥信號通路激活的變化，為臨床上針對類風濕性關節炎新藥研發提供可能的理論指導和依據。

內容與要求：

應用小鼠類風濕性關節炎動物模型、ELISA、病理切片H&E染色以及western blot等技術方法首次將高密度脂蛋白應用于類風濕性關節炎的研究，研究類風濕性關節炎炎癥因子表達變化，關節腔組織進行常規病理分析。

技術指標：

1、應用高密度脂蛋白對類風濕性關節炎動物模型予以干預，研究其炎癥相關因子表達水平的變化，參見圖1和圖2；

2、應用高密度脂蛋白對類風濕性關節炎動物模型予以干預，研究其關節腔組織病理變化，參見圖3；

3、應用高密度脂蛋白對類風濕性關節炎動物模型予以干預，研究其體內炎癥信號通路的激活情況，參見圖4。

具體試驗步驟為：

(1)膠原乳劑-高密度脂蛋白的制備

按2mg/ml將牛II型膠原加入0.1mol/L冰醋酸溶液中，4℃放置一晚上，然后加入等體積完全弗氏佐劑充分乳化，得到終濃度為1mg/ml的膠原乳劑-高密度脂蛋白。

(2)動物分組及CIA模型誘導

小鼠隨機分為正常對照組(6只)、CIA模型組(6只)和CIA模型高密度脂蛋白注射液治療組(6只)。正常組小鼠常規飼養，不予處理；后2組小鼠在距尾根部2—3cm處皮內注射膠原乳劑(100ul/只)，將注射當日記為第0d，于第21d進行膠原乳劑的2次注射，高密度脂蛋白注射液(80ug/ml)治療組小鼠于第28—40d sc給藥；三天1次。

(3)取全血分離血清，Elisa檢測腫瘤壞死因子TNF-α或者IL-6的表達水平的變化。相關步驟按照試劑盒說明進行。

(4)病理學分析

關節組織病理學檢查加強免疫第40d后處死小鼠，取小鼠受累關節，10％常規福爾馬林固定加入10％EDTA對骨關節進行脫鈣處理，脫鈣完全后石蠟包埋，常規切片，HE染色，加封玻片保存，顯微鏡下拍照。

(5)Western blot檢測信號通路的變化

關節充分研磨后，加入100μl新鮮配制的細胞RIPA裂解液，立即使細胞與裂解液充分混合，冰浴45min，所有操作均在冰浴上進行，4℃，12,000rpm離心15min收集上清于新的EP管中，留出一小份測量蛋白濃度，其余加入5×loading buffer，100度煮沸5分鐘，放置于-80℃的冰箱中。

通過上述試驗發現，經高密度脂蛋白干預后一是能夠顯著降低炎癥因子TNF-α表達水平，二是能夠顯著降低關節腔組織炎癥細胞浸潤，三是能顯著降低類風濕性關節炎炎癥信號通路的激活。高密度脂蛋白作為注射用藥治療類風濕性關節炎，對動物無明顯損害，未發現有不良副作用，是一種安全可靠的能夠用于治療類風濕性關節炎的藥物。

需要說明的是，在本說明書的教導下本領域技術人員所做出的任何等同方式，或明顯變型方式均應在本發明的保護范圍內。