本發明涉及一種納米脂質載體的制備方法。
背景技術：
將藥物分子或載藥納米制劑與靶向分子連接，可以與細胞表面的受體結合，將藥物選擇性地遞送至腫瘤細胞從而提高藥效。葉酸受體是一種糖基化磷脂肌醇連接的膜糖蛋白，葉酸具有無毒、免疫原性弱、性質穩定的特點，與葉酸受體親和力高。研究表明相較于正常細胞，葉酸受體在多種人類腫瘤細胞(如卵巢癌、肺癌、乳腺癌、結直腸癌、肺癌等)膜表面過度表達，且葉酸與其他分子共價連接后，仍保持對細胞膜表面葉酸受體的高親和力，這為葉酸特異性受體介導的腫瘤細胞靶向提供了依據。牛血清白蛋白(BSA)分子中賴氨酸的一氨基及末端氨基眾多，是對其進行化學修飾的有效部位，能夠與葉酸活性酯共價連接。白蛋白在中性pH條件下荷負電，可以通過靜電引力吸附于陽離子納米載體表面以延長血液滯留時間，并且白蛋白可被腫瘤和炎癥部位優先攝取，本身就具有一定的靶向作用。
技術實現要素：
本發明提出一種納米脂質載體的制備方法。
一種納米脂質載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：
（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環境中、室溫下攪拌反應10h；
（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應的FA；
（3）收集未反應的FA，
（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經0.22納米微孔濾膜過膜數次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步驟（4）中BSA溶液為2.5mg/mL。
所述步驟（4）中水和時間為20 min。
所述步驟（4）的反應溫度為35℃。
本發明所述方法制備的納米脂質載體，顯著提高了腫瘤細胞對納米載體的特異性攝取，并提高了在荷瘤裸鼠體內的抗腫瘤效果。可見，葉酸修飾的主動靶向納米脂質載體，增加了腫瘤細胞主動靶向能力，提高了體內抗腫瘤效果。
具體實施方式
實施例1。
一種納米脂質載體的制備方法，包括以下步驟：
（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環境中、室溫下攪拌反應10h；
（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應的FA；
（3）收集未反應的FA，
（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經0.22納米微孔濾膜過膜數次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
實施例2。
一種納米脂質載體的制備方法，包括以下步驟：
（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環境中、室溫下攪拌反應10h；
（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應的FA；
（3）收集未反應的FA，
（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經0.22納米微孔濾膜過膜數次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步驟（4）中BSA溶液為2.5mg/mL。
實施例3。
一種納米脂質載體的制備方法，包括以下步驟：
（1）將FA5mg溶于二甲基亞砜(DMSO)1mL中，加入縮水劑EDC3mg和羧基活化劑NHS2mg，避光、室溫下攪拌反應4h后將DMSO溶液緩慢加入到BSA水溶液(20mg/mL，3mL)中，在避光環境中、室溫下攪拌反應10h；
（2）將混合物過SephadexG-25凝膠柱，除去未反應的FA；
（3）收集未反應的FA，
（4）精密稱取AL5mg、MCT25mg、PC75mg和PTX4mg或香豆素42g溶于甲醇3mL中，20-50℃減壓旋蒸成膜并真空過夜，加入1.0-3.5mg/mLBSA溶液4mL，35攝氏度環境下水合15-30min，冰浴探頭超聲，經0.22納米微孔濾膜過膜數次后即得包載PTX或香豆素的BSA.cNLCsHJ；
（5）將BSA水溶液替換為FA—BSA水溶液即得FA-BSA—cNLCs。
所述步驟（4）中水和時間為20 min。
所述步驟（4）的反應溫度為35℃。